腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因表达载体的构建及表达

根据腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因 (Pili基因 )序列 ,在 Pili基因 6 19bp Ehe 酶切位点上插入绵羊白细胞介素 - 2基因 (Ovi IL- 2基因 ) ,构建了 Pili基因与 Ovi IL- 2基因的融合基因表达载体。先用 Eco R 、Bam H 双酶切p Bluescript- Ovi IL - 2重组质粒 ,获得两端具有 Eco R 、Bam H 位点的 Ovi IL - 2基因片段 ,用 Klenow补平后 ,与经Ehe 酶切后的重组质粒 PME2 90 - Pili进行平端连接 ;转化 JM10 5感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,分别用 Bam H 、Eco R 、Xba 、Bgl 、Pvu 等进行酶切鉴定。然后将阳性重组质粒转染 BL - 2 1表达宿主感受态细胞 ,用 0 .1m ol/ L Mg Cl2沉淀法和超声波裂解法提取 BL- 2 1表达 Pili基因与 Ovi IL- 2基因融合基因表达蛋白。对流免疫电泳对重组融合蛋白的特异性分析证明 ,融合蛋白主要在宿主菌体中表达 ;SDS- PAGE电泳结果表明 ,重组融合蛋白分子大小约为 330 0 0 ,表达产物的量约占菌体的 5 .49%。

IL-2Rα结合位点修饰型OviIL-2在毕赤酵母中的表达与鉴定

IL-2主要由激活后的T细胞产生,是一种天然的免疫增强剂,临床应用广泛。之前构建了适用于毕赤酵母表达系统的重组绵羊IL-2的真核表达载体pPIC9K-roIL2。本研究在此基础上使用pPIC9K-roIL2转化毕赤酵母GS115,筛选得到阳性克隆,命名为GS115-roIL2并经过摇瓶培养和诱导表达得到表达产物。通过SDS-PAGE进行初步鉴定,证明成功表达出了roIL-2。本研究为下一步roviIL-2免疫机理研究奠定了基础。