不同抗凝剂处理绵羊血液对DNA提取效果的影响

试验旨在比较不同抗凝剂处理血液样品对DNA提取效果的影响。分别使用EDTA-K2、3.2%柠檬酸钠、肝素钠、氟化钠和肝素锂等5种抗凝剂的真空采血管采集小尾寒羊血液,之后采用试剂盒直接提取抗凝血中的DNA,采用NaOH-TE两步法提取抗凝血制成的FTA卡血液样品中的DNA。结果表明:采用试剂盒和NaOH-TE法均能成功提取5种抗凝剂处理的血液中的DNA;利用FTA卡血液样品中提取的DNA扩增的PCR产物浓度各组之间没有显著差异(P>0.05),间接说明DNA提取质量各组之间基本一致;采用试剂盒提取时,提取浓度有一定差异,但差异不显著(P>0.05);氟化钠和肝素锂处理组提取的DNA浓度显著高于EDTA-K2和肝素钠处理组(P<0.05)。结果提示,在采集动物血液同时进行血气分析和提取DNA时,选择肝素锂作为抗凝剂较肝素钠更加适宜。

新疆部分地区绵羊常见蜱传病原分子调查鉴定

研究旨在为新疆绵羊血液原虫病提供病原数据库,调查克拉玛依及巴州和静县区域内绵羊常见血液原虫病流行特性感染情况。研究采用血液涂片和PCR方法调查绵羊6种常见血液原虫(羊巴贝斯虫、羊泰勒虫、吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊无浆体和伯氏立克次氏体)的感染情况,并对其中部分病原进行基因序列比对及系统发育分析。结果显示,克拉玛依乌尔禾区及巴州和静地区绵羊血液涂片均未发现虫体感染。PCR结果显示,两区域内存在绵羊无浆体、伯氏立克次氏体感染情况,总阳性率分别为37.80%、37.76%。公羊的绵羊无浆体阳性数极显著低于母羊(P<0.01)。测定的绵羊无浆体序列分别与青海株和美国株相似性达到62%和100%;伯氏立克次氏体序列分别与北京株和法国株相似性达到62%和97%。

羊源巴贝斯虫未定种甘肃敦煌株的发现

采用动物接种法将采自甘肃敦煌的15只绵羊血液混合后感染1只除脾绵羊,感染后逐日做血涂片检查。结果显示,在感染后第10天的血片上出现了1种大型巴贝斯虫。虫体形态以双梨子形、单梨子形、圆形及卵圆形为主。在感染后第12天,感染羊体温升至41.1℃。染虫率达到0.125%,之后逐渐下降。无菌采集该羊血液,提取全血基因组,用梨形虫通用引物进行PCR扩增全长18SrRNA基因,得到长约1 700bp的片段,将其克隆并测序(登录号:HQ730762),与GenBank中的其他巴贝斯虫的序列进行比较,发现其与新疆巴贝斯虫未定种的同源性最高,达到99.8%。本研究发现甘肃敦煌又是一个新疆羊巴贝斯虫未定种的疫源地。