两段杨树叶绿体DNA片段的克隆及叶绿体定点转化载体的构建

利用PCR方法 ,从毛白杨 (PopulustomentosaC .)叶绿体基因组中克隆了 1.7kb和 1.6kb的相邻DNA片段 ,对其进行序列分析表明 ,扩增片段分别具有 176 6个和 16 0 1个核苷酸 ,前者包括 3’rps12 ,rps7基因的编码区及其边界序列 ,后者包含ndhB基因的第一外显子和内含子。本文还构建了杨树这两个片段的限制酶切图谱 ,并以这两个相邻片段为同源重组片段 ,分别将绿色荧光蛋白 (GFP)基因和苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白 (Bt)基因 ,及其原核表达框插入其间 ,构建了杨树叶绿体定点转化载体pPZG和 pPZB。这两个特异性载体将定位整合到杨树叶绿体基因组中反向重复区的rps7和ndhB基因的间隔区 ,并高效表达GFP和Bt基因。迄今为止 ,本文所报道的内容在国内。