绿海龟(Chelonia mydas)血细胞发育过程的观察

采用Wright’s液染色方法,对绿海龟的外周血、骨髓、脾脏和肝脏等几种组织的印片和涂片进行观察研究。结果表明,骨髓和脾脏是绿海龟的主要造血器官,红血细胞、粒细胞、单核细胞等血细胞主要在骨髓中发生,淋巴细胞主要在脾脏中发生;脾脏中可以发现晚幼红血细胞,脾脏可能是红血细胞的成熟场所;肝脏中无原始型的血细胞,可能不是其造血器官。红血细胞的发育经历了5个阶段:原红血细胞、早幼红血细胞、中幼红细胞、晚幼红血细胞和红血细胞等阶段,其胞体体积经历了由小到大,由大到小、再到大的发育过程;粒细胞的发育经历了5个阶段:原粒细胞、早幼粒细胞、中幼白细胞、晚幼白血细胞和白细胞等阶段,胞体体积均由大到小变化,核分叶可能是粒细胞的衰老的标志;淋巴细胞和单核细胞的发育各经历了3个阶段。各细胞发育均经历了由有细胞核仁到无细胞核仁的变化过程。原血细胞和幼血细胞在造血器官中可以进行有丝分裂,部分成熟的红血细胞可以在外周血中进行直接分裂。

绿海龟外周血细胞的超微结构

在透视电镜和扫描电镜下,对绿海龟Chetonia mydas的外周血细胞形态结构进行了研究。结果表明,在透视电镜下,红细胞核卵圆形,细胞质均匀无细胞器;淋巴细胞核内异染色质较少,多聚集于细胞核的中央,胞质中只有少量颗粒和空泡;单核细胞表面有少量伪足状突起,核呈马蹄形,核内异染色质多,胞质中有少量小的嗜天青颗粒;嗜碱性粒细胞表面有细小胞突或伪足,胞核呈V形,分叶,核内异染色质分布均匀,胞质中特殊颗粒多,圆球形,大小不一,颗粒电子密度高,环绕在胞核周围;嗜酸性粒细胞表面具有细长的指状突起,核内异染色质多,胞质内含有特殊颗粒和嗜天青颗粒两种,胞质中还有少量的空泡和内吞泡;嗜中性粒细胞表面可见突起和微绒毛,细胞质丰富,含有两种大小不等、形态不一的颗粒,胞质内有吞泡。在扫描电镜下,红细胞长椭圆形,可以看见细胞核,细胞表面光滑,无突起;淋巴细胞根据细胞表面结构的特点可分为两种:B淋巴细胞和T淋巴细胞,B淋巴细胞表面凹凸不平,有粗短密集的微绒毛突起,T淋巴细胞表面光滑,无微绒毛突起;单核细胞表面多皱褶,皱褶较B淋巴细胞的起伏大一些,扫描电镜下下还可见到正在分裂的单核细胞;巨噬细胞胞体比一般细胞大,外形不规则,经常伸出伪足把其他细胞包围起来;血栓细胞形态不规则,多有细长突起,聚集成团;粒细胞表面不光滑,有许多皱褶及不规则突起,突起易脱落;提示所有白血细胞表面具有突起,具有吞噬的能力。

绿海龟外周血细胞显微结构与分类

对绿海龟(Chelonia mydas)外周血细胞的进行显微观察。结果表明,经Wright’s染液染色,可鉴定出红血细胞、单核细胞、淋巴细胞、血栓细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞等七种血细胞。其中红血细胞数量多,长椭圆形,具圆核。白细胞数量少,多为圆形,分无颗粒型白细胞和颗粒型白细胞两种。无颗粒型白细胞包括单核细胞和淋巴细胞,细胞质中无特殊颗粒;颗粒型白细胞包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞,细胞质中具有特殊颗粒。在白血细胞中,血栓细胞体积最小,单核细胞体积最大;在数量上,血栓细胞最多,淋巴细胞次之,单核细胞和嗜碱性粒细胞则较少。绿海龟的淋巴细胞可分为大淋巴细胞和小淋巴细胞两种类型。在外周血细胞中可观察到分解、解体状态的红血细胞,还可观察到少量未成熟的红血细胞和嗜中性粒细胞,偶尔可见正在分裂的红血细胞,提示红血细胞也可在外周血直接分裂。

绿海龟消化道组织学观察

通过常规组织学切片方法,对绿海龟的消化道进行组织学观察。结果发现除口腔和泄殖腔外,消化道均由黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜层组成。消化道各段的结构差异主要集中在黏膜层和肌层。其中食管黏膜存在特殊的高度角化倒齿结构,而非常见的皱襞,且食管黏膜层下有较发达的纵行骨骼肌。食道的黏膜上皮为复层扁平上皮,胃、小肠和大肠均为单层柱状上皮。除食管外,消化道各段的肌层均由内环外纵的平滑肌组成,且环形肌均较纵行肌发达。肠道各段黏膜固有层中均有见弥散的淋巴组织。

绿海龟α-actin基因的cDNA克隆与序列分析

为探究绿海龟（Chelonia mydas）α-actin基因序列的相关信息,作者利用RT-PCR和RACE方法从绿海龟肌肉组织中获得了α-actin基因的cDNA全长序列,共1347bp（GenBank登录号为JX073650）。所得序列包含一个1134 bp的开放阅读框,编码由377个氨基酸组成的蛋白,该蛋白7~377位为Actin结构域,14~17位有一个糖基化位点,无信号肽;预测分子量为42.0 kDa,理论等电点为5.23。将编码区序列与GenBank上同源序列进行比对发现,核苷酸序列相似性均在85.4%以上,氨基酸序列相似性均在98.9%以上,说明α-actin基因作为编码蛋白是高度保守的。

绿海龟主要器官组织学多态性观察

应用石蜡切片及H.E.染色法对绿海龟的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏进行了组织结构观察。结果显示,心肌纤维的排列较哺乳动物疏松。肝内结缔组织很少,相邻肝小叶分界不清,肝细胞内充满大小不等的空泡或空隙。脾脏动脉淋巴鞘结构明显,未发现典型的脾小体结构。肺为一对长形扁平囊,其支气管树末端的盲囊上有肺泡上皮细胞和毛细血管分布,称为肺泡囊,行使气体交换功能。肾脏由肾小体、颈段、近曲小管、中间段、远曲小管和收集管6部分构成,无髓袢结构。文章还将绿海龟器官的组织学特点与其他物种进行了比较,研究分析它们进化上的异同点。

温度对绿海龟心、肝、肾功能生化指标的影响

分别在15,20,25和30℃海水中养殖绿海龟90d,研究温度对绿海龟心、肝、肾等17项血液生化指标的影响。结果表明:心功能指标中,总胆固醇和甘油三酯均呈现先上升而后下降的趋势,25℃时含量最高,分别为3.83±0.30和0.60±0.08mmol/L;高密度脂蛋白出现先降后升的变化;肌酸激酶含量随着温度的上升,呈下降趋势。肝功能指标中,白蛋白和总蛋白含量随着温度上升,先上升后下降,在25℃时达到最大值6.47±0.66和36.33±1.96g/L;乳酸脱氢酶、白球比、碱性磷酸酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶和总胆红素都不随水温的变化而变化(P>0.05)。肾功能指标中,血尿酸和血肌酐含量随着温度上升而下降,血尿素氮没出现明显的变化(P>0.05)。综合温度对血液生化指标的影响规律,绿海龟在25℃左右储能物质消耗最少。

中国南海绿海龟(Chelonia mydas)线粒体DNA序列分析

测定了南海海域绿海龟(Chelonia mydas)线粒体DNA的细胞色素b(Cyt b,EU918367、EU918368)和控制区(D-loop,EU918363、EU918364、EU918365、EU918366)的全序列以及细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ,EU600157、EU600158)5’端DNA标签序列。Cyt b基因全序列和COⅠ标签序列(DNA barcode)与GenBank中的相应序列比对,确认样本均为绿海龟。D-loop区序列聚类分析显示中国南海绿海龟分别与中东太平洋、西南太平洋和印度洋的绿海龟存在较近的亲缘关系。

玳瑁和绿海龟幼体外周血细胞的观察与比较

对玳瑁(Eretmochelys imbricata)和绿海龟(Chelonia mydas)外周血细胞形态特征及其数量进行了观察、测定与比较。结果表明,在2种海龟外周血都观察到7种血细胞:红细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和血栓细胞,除了绿海龟观察到大、小2种嗜酸性粒细胞外,另外几种血细胞的形态结构与其他爬行动物相似。白细胞分类计数表明,2种海龟白细胞中以嗜中性粒细胞数量最多,其次是淋巴细胞和单核细胞,嗜酸性粒细胞仅有少数,嗜碱性粒细胞极少,并且此类细胞在玳瑁的白细胞分类计数中为零。玳瑁红细胞数量为(346.7±68.4)×103个/μl,比绿海龟红细胞含量少,绿海龟为(403.3±170.6)×103个/μl;玳瑁白细胞及血栓细胞数分别为(7.7±1.9)×103个/μl和(9.6±2.2)×103个/μl,绿海龟分别为(7.3±2.8)×103个/μl和(7.5±3.7)×103个/μl。

法国留尼汪岛绿海龟

法国留尼汪岛（Réunion Island）位于印度洋南部，马达加斯加（Madagascar）东海岸，曾是产卵海龟的重要栖息地。集约化捕捞，引进卵掠食者（老鼠、猪、狗等），都市化建设海岸等使海龟活动数量显著减少。1986～2002年仅观察到4例，都没有确定品种。

人工培育幼年绿海龟的卫星追踪试验

2011年6月—2012年2月期间,在3只人工培育的幼年绿海龟背甲上安装微型卫星追踪器,通过全球Argos系统开展追踪监测,旨在研究海龟洄游路线以及海流、海水叶绿素浓度等因子对洄游的影响。结果表明,试验幼龟洄游方向与同期海流趋同,洄游路线与历年产卵后母龟大体相似;洄游平均速度为0.2~1.8 km·h^(-1),洄游距离68~949 km;觅食场海水叶绿素浓度为1~2 mg·m^(-3)。揭示南海台湾至海南近岸海域间可能存在绿海龟洄游通道,绿海龟的洄游可能与食性及海流有关,开展增殖放流应充分考虑季节、海流等因子的影响。

健康与患病绿海龟外周血细胞变化的观察与比较

关于龟鳖动物外周血细胞结构的研究,国内外已有较多的报道,但龟鳖疾病状态下外周血细胞病理变化的研究甚少[1-4],国内仅见中华鳖腐皮病血细胞病理变化的研究[5-6]。绿海龟（Chelonia mydas）是我国Ⅱ级重点保护野生动物,

人工养殖的幼年绿海龟甲状腺结构与功能的研究（英文）

观察了绿海龟甲状腺显微和超微结构特点,不仅说明绿海龟甲状腺具有和其他爬行动物相似的组织结构,而且幼体绿海龟甲状腺的组织结构和细胞超微形态特点也表现出明显的年周变化特点。通过化学发光法测定了人工养殖的8～20月龄绿海龟血清甲状腺激素的含量,结果表明:绿海龟血清T_3(三碘甲状腺氨酸)浓度最高峰出现在7月,而生长速度最快的月份却是9月,滞后2个月;血清T_4(四碘甲腺原氨酸)最高值出现在10月;全年环境温度(气温、水温)与绿海龟血清中T_3、T_4浓度变化皆成近似平行的单峰曲线。结论:绿海龟全年生长速度、甲状腺细胞形态结构和甲状腺激素分泌水平具有一定的节律性。监测甲状腺激素可以对分诊、监测健康恢复和评估放生海龟的准备工作有用。

圈养绿海龟的筑巢行为和巢址选择特征

绿海龟(Chelonia mydas)是国际濒危物种,为我国一级保护野生动物,巢址的选择对绿海龟繁衍后代极为关键,研究筑巢行为可为其种群恢复及保护提供必要的科学依据。目前,国内外对绿海龟巢址选择的研究并不多见,也不全面,仍有许多未知之处,如沙滩树木对产卵的影响等。由于我国野外上岸产卵的绿海龟极度稀少,很难通过野外种群深入了解它们的筑巢行为,故2019—2020年间,采用红外线视频监控技术研究了11只人工养殖的雌性绿海龟的119次筑巢行为,发现96%筑巢位置位于树木区,仅有4%出现在裸沙区;树木区中80%筑巢及88%产卵行为均集中在隐蔽区域,说明绿海龟明显偏好于植被下产卵,尤其喜好温度、湿度和隐蔽性相对较好的区域。此外,绿海龟每次产卵通常会经多次上岸、多次筑巢以寻找合适产卵点,另约有25%的产卵点是它们的弃址,皆揭示绿海龟对巢址具有选择能力。

绿海龟源溶藻弧菌的分离鉴定及药敏分析

【目的】腐皮病是绿海龟(Chelonia mydas)龟苗培育中的常见病,传染性极强,发病率和死亡率高。为确定病因及治疗方法,从病龟鳍状肢的腐皮组织中分离病原菌。【方法】从症状明显的稚龟四肢病灶中分离纯化得到疑似病原菌,编号CMRT91026,开展形态特征、生理生化特性、16SrRNA鉴定和系统发育树构建及相关药物敏感试验。【结果】该菌能在TCBS培养基上生长,菌落呈黄色,为革兰氏阴性短杆菌;在1%NaCl葡萄糖磷酸盐胨水、蔗糖、甘露糖和赖氨酸脱羧酶上的生化特性均显示阳性,并且在3%~10%NaCl胨水均能生长;与NCBI上的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)同源性达100%。药敏结果显示,该菌对恩诺沙星、萘啶酸、左氧氟沙星、米诺环素、头孢吡肟和头孢曲松敏感;对多西环素、氟苯尼考、妥布霉素、大观霉素、诺氟沙星和氨曲南呈中介;对新霉素、复方新诺明、阿莫西林、庆大霉素、丁胺卡那霉素等15种药物有耐药性。【结论】该菌株鉴定为溶藻弧菌,对喹诺酮类药物(如恩诺沙星)、四环素类药物(如米诺环素)及头孢类(如头孢曲松)等药物较为敏感。试验结果为绿海龟稚龟溶藻弧菌病的诊断及病害防控提供了一定参考。

绿海龟稚龟高密度养殖越冬技术初报

多年的研究数据表明,每年9月份后出壳的稚龟个体较小,在12月前平均体重少于70g,占死亡总数的90%以上。原因是稚龟冬季的摄食能力下降,个体较小的稚龟体质差,没有足够的能量御寒。而采用加温和药物预防措施效果不佳。2004年,我们采取绿海龟高密度养殖方法,按照绿海龟的自然生活习性,从改善水质和食物,增强稚龟体质入手,使其越冬前体重迅速增加到100g以上,御寒能力增强,可有效保证稚龟顺利过冬,成活率可达90%以上。

绿海龟稚龟的人工饲养

暂养绿海龟稚龟是提高其成活率,保护其种群资源的有效途径。本文阐述了绿海龟稚龟的人工饲养与疾病防治技术。