将增强的绿色荧光蛋白 ( enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因插在 HCMV( hum ancytom egolovirus)启动子下游 ,构建了表达质粒 p CA13 - e G,用脂质体 L ipofectin介导分别转染 He L a细胞、Vero细胞 ,仅通过细胞传代 ,就获...将增强的绿色荧光蛋白 ( enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因插在 HCMV( hum ancytom egolovirus)启动子下游 ,构建了表达质粒 p CA13 - e G,用脂质体 L ipofectin介导分别转染 He L a细胞、Vero细胞 ,仅通过细胞传代 ,就获得了能稳定高效表达 EGFP的绿色细胞 .比较发现 ,质粒 p CA13 - e G转染后 ,产生能高效表达 EGFP的 He L a细胞其比率高于 Vero细胞 ;EGFP高效表达对 Vero细胞的毒性大于对 He L a细胞的毒性 .本研究表明 ,绿色细胞轮廓清晰 ,由于其特有的性质 ,在用于细胞的形态观察、细胞分裂等研究时会有所作为 .展开更多
目的制备并用绿色荧光标志骨髓间充质干细胞(BM⁃MSC),观察其对博来霉素所致大鼠肺纤维化损伤的影响。方法60只雄性SD大鼠随机分为5组,A组于气管内注入生理盐水,B、C、D、E组于气管内注入5 mg/kg博来霉素0.1 ml。建模后1 d,A、B组经尾静...目的制备并用绿色荧光标志骨髓间充质干细胞(BM⁃MSC),观察其对博来霉素所致大鼠肺纤维化损伤的影响。方法60只雄性SD大鼠随机分为5组,A组于气管内注入生理盐水,B、C、D、E组于气管内注入5 mg/kg博来霉素0.1 ml。建模后1 d,A、B组经尾静脉注射生理盐水1.0 ml,C组经尾静脉注射1.0 ml BM⁃MSC(1.0×106细胞),D组尾静脉注射1.0 ml BM⁃MSC(5.0×10^(5)细胞),建模后8 d,再给1.0 ml BM⁃MSC(5.0×10^(5)细胞)。E组尾静脉注射1.0 ml BM⁃MSC(1.0×107细胞)。建模后28、42 d处死各组一半大鼠,留取肺组织。行病理学检查,对HE染色切片评定肺组织肺泡炎程度,对Masson染色切片评定肺组织纤维化程度;测定肺组织的转化生长因子⁃β1(TGF⁃β1)、羟脯氨酸(HYP)、基质金属蛋白酶⁃2(MMP⁃2)和组织金属蛋白酶抑制剂⁃1(TIMP⁃1)的表达水平,分析TGF⁃β1、HYP、MMP⁃2/TIMP⁃1与肺泡炎程度及肺纤维化程度评分的相关性。结果A组肺泡结构正常,无明显的炎症或纤维化改变,B组博来霉素可致肺泡结构严重紊乱,大量胶原纤维沉积,与B组比较,C、D、E组注射BM⁃MSC后肺泡炎性和肺纤维化程度较轻。与A组比较,B组肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分、TGF⁃β1、HYP、MMP⁃2/TIMP⁃1水平增高(均P<0.05),MSC治疗后的C、D、E 3组可使上述指标下降(均P<0.05)。肺组织TGF⁃β1与肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分相关系数r=0.82、0.89,HYP与肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分相关系数r=0.86、0.92,MMP⁃2/TIMP⁃1与肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分相关系数r=0.83、0.92,均存在正相关(均P<0.05)。结论BM⁃MSC可减低博来霉素致肺纤维化损伤,较高剂量和分次移植效果较好,其机制与移植细胞长期存活无关,可能与下调TGF⁃β1水平、改善MMP/TIMP失衡有关。展开更多
文摘将增强的绿色荧光蛋白 ( enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因插在 HCMV( hum ancytom egolovirus)启动子下游 ,构建了表达质粒 p CA13 - e G,用脂质体 L ipofectin介导分别转染 He L a细胞、Vero细胞 ,仅通过细胞传代 ,就获得了能稳定高效表达 EGFP的绿色细胞 .比较发现 ,质粒 p CA13 - e G转染后 ,产生能高效表达 EGFP的 He L a细胞其比率高于 Vero细胞 ;EGFP高效表达对 Vero细胞的毒性大于对 He L a细胞的毒性 .本研究表明 ,绿色细胞轮廓清晰 ,由于其特有的性质 ,在用于细胞的形态观察、细胞分裂等研究时会有所作为 .
文摘目的制备并用绿色荧光标志骨髓间充质干细胞(BM⁃MSC),观察其对博来霉素所致大鼠肺纤维化损伤的影响。方法60只雄性SD大鼠随机分为5组,A组于气管内注入生理盐水,B、C、D、E组于气管内注入5 mg/kg博来霉素0.1 ml。建模后1 d,A、B组经尾静脉注射生理盐水1.0 ml,C组经尾静脉注射1.0 ml BM⁃MSC(1.0×106细胞),D组尾静脉注射1.0 ml BM⁃MSC(5.0×10^(5)细胞),建模后8 d,再给1.0 ml BM⁃MSC(5.0×10^(5)细胞)。E组尾静脉注射1.0 ml BM⁃MSC(1.0×107细胞)。建模后28、42 d处死各组一半大鼠,留取肺组织。行病理学检查,对HE染色切片评定肺组织肺泡炎程度,对Masson染色切片评定肺组织纤维化程度;测定肺组织的转化生长因子⁃β1(TGF⁃β1)、羟脯氨酸(HYP)、基质金属蛋白酶⁃2(MMP⁃2)和组织金属蛋白酶抑制剂⁃1(TIMP⁃1)的表达水平,分析TGF⁃β1、HYP、MMP⁃2/TIMP⁃1与肺泡炎程度及肺纤维化程度评分的相关性。结果A组肺泡结构正常,无明显的炎症或纤维化改变,B组博来霉素可致肺泡结构严重紊乱,大量胶原纤维沉积,与B组比较,C、D、E组注射BM⁃MSC后肺泡炎性和肺纤维化程度较轻。与A组比较,B组肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分、TGF⁃β1、HYP、MMP⁃2/TIMP⁃1水平增高(均P<0.05),MSC治疗后的C、D、E 3组可使上述指标下降(均P<0.05)。肺组织TGF⁃β1与肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分相关系数r=0.82、0.89,HYP与肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分相关系数r=0.86、0.92,MMP⁃2/TIMP⁃1与肺泡炎程度评分、肺纤维化程度评分相关系数r=0.83、0.92,均存在正相关(均P<0.05)。结论BM⁃MSC可减低博来霉素致肺纤维化损伤,较高剂量和分次移植效果较好,其机制与移植细胞长期存活无关,可能与下调TGF⁃β1水平、改善MMP/TIMP失衡有关。
