荧光定量RT-PCR检测神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA的表达

目的MYCN基因表达对神经母细胞瘤的治疗及预后评估有指导意义,目前国内对于MYCN基因mRNA的定量检测未见报道,该研究拟采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ(SYBRGREENⅠ)实时检测的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞MYCN基因mRNA的表达,并对其可行性及实用性进行研究,力争探索出微量瘤标本的MYCN基因mRNA定量检测的可行方法。方法提取神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞总RNA,采用SYBRGREENI实时检测的RT-PCR检测其MYCN基因mRNA的表达,并用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,将MYCN基因的mRNA拷贝数与GAPDH的拷贝数相除,结果为单细胞MYCN基因mRNA的表达水平。结果反应标准曲线有良好的相关性(R2>0.99),PCR产物特异,神经母细胞瘤细胞系LA-N-5MYCN基因mRNA的表达水平为17.4±1.2。结论只要严格控制PCR反应条件,SYBRGREENⅠ定量RT-PCR法可以作为一种良好的定量PCR方法对神经母细胞瘤细胞系LA-N-5MYCN基因mRNA的表达进行检测,此方法为临床微量神经母细胞瘤瘤组织的MYCN基因mRNA的定量检测提供了可能。