短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响

RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷酸甘油醛脱氢酶短双链干扰RNA (siGAPDH )分别同绿荧光蛋白(Greenfluorescentprotein ,GFP)表达载体 (pEGFP C1Vector)用脂质体转染试剂LipofectamineTM2 0 0 0共转染鸡胚盘细胞 ,并于转染后 36h在荧光显微镜下观察转染和干扰效果。对细胞绿荧光蛋白表达率的方差分析结果显示 ,不同处理组间差异达极显著水准 ,其中GFP组和GFP +siGAPDH组均同GFP +siGFP组差异极显著 ,GFP组同GFP +siGAPDH组差异不显著。实验结果说明 ,siGFP能特异、有效地敲低细胞绿荧光蛋白的表达。同线虫、真菌、拟南芥、水螅、锥虫、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等其它生物体一样 ,鸡胚盘细胞中也存在短双链干扰RNA (siRNA)

以绿荧光蛋白基因为报告基因的广宿主启动子探针载体的构建和应用

将以绿荧光蛋白基因（ ｇｆｐ） 的ｃＤＮＡ 为模板，用人工合成引物经ＰＣＲ 扩增获得的０－９ｋｂＤＮＡ 片段克隆到表达载体ｐＥＴ１１Ｃ 上构建成ｇｆｐ 表达载体ｐＨＮ１１５ 。从ｐＨＮ１１５ 上切下的不含启动子，但保留了ＳＤ 序列的ｇｆｐ 基因经克隆载体ＳＫ（ ＋ ） 和ｐＩＪ２９２５ 亚克隆后再克隆到广谱稳定性质粒ｐＴＲ１０２ 上构建成广谱、稳定、可视的启动子探针载体ｐＨＮ１２７ 。并用它从费氏中华根瘤菌ＨＮ０１ 的总ＤＮＡ 中成功地钓出组成型和诱导型表达的启动子。

重组腺相关病毒作为目标基因转移视网膜的载体的可行性研究(英文)

目的:探讨重组腺相关病毒基因(recombinant adeno-associ-ated virus gene,rAAV)载体转导绿荧光蛋白基因(green fluorescent protein,gfp)基因至视网膜的可行性。方法:18只家兔随机选取一眼玻璃体内注射rAAV-gfp,对侧眼作为对照。分别于注射后3,7,14d摘除眼球进行视网膜铺片观察视网膜的荧光。结果:家兔玻璃体注射rAAV-gfp后视网膜细胞浆内可见荧光点,提示gfp基因被有效转导至视网膜并进行荧光表达。结论:rAAV是一个可靠、简便易行的目标基因转移视网膜的载体。

GFP转基因小鼠骨髓间充质干细胞纯化方法的研究

目的：应用两种不同方法培养纯化绿荧光蛋白（GFP）转基因小鼠骨髓间充质干细胞,以探求提高GFP小鼠骨髓间充质干细胞纯化效率的方法。方法：取4~6周龄GFP小鼠股骨全骨髓,采用贴壁法进行体外培养。待细胞融合至约80%,将细胞分为两组,分别采用常规法和改良法进行消化传代。荧光显微镜下观察各组细胞荧光状态及形态学特征,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面标志物及绿荧光蛋白表达率,体外诱导观察其成骨、成脂能力。结果：贴壁法获得数量较多,形态多样的原代细胞。随着传代次数的增加,细胞形态一致性不断增高。与传统方法相比,改良法在不影响细胞增殖、分化潜能,不影响其GFP表达率的前提下,可以更早获得纯度较高的细胞。结论：改良法可提高纯化小鼠骨髓间充质干细胞效率,为其用于进一步研究工作提供基础。

报告基因系统的研究进展

综述氯霉素转乙酰酶 (CAT)、β 半乳糖苷酶 (β gal)、β 葡萄糖苷酸酶 (p GUS)、分泌型碱性磷酸酶 (SEAP)、荧光素酶(luc)、绿荧光蛋白 (GFP)等报告基因系统研究与应用进展 ;简要介绍主要报告基因分析系统商品化试剂盒的研制及其应用范围和优缺点。

溶杆菌SNNU513基因gfp标记及在玉米根部定殖

溶杆菌属细菌在植物病害生物防治中有着广阔的应用潜力。本文以本实验室从中药材远志分离筛选的溶杆菌属新菌株Lysobacter sp.SNNU513为材料,筛选出高效制备该菌株感受态细胞Inoue法,电击转化条件为场强20 kV/cm、电脉冲时间5 ms时可将含绿色荧光蛋白基因gfp的质粒pGLO导入该菌株感受态细胞中,重组菌SNNU513-pGLO能高效、稳定表达绿色荧光蛋白基因,与出发菌株的生长特性、抑菌活性等生物学特性差异不显著。将成功构建的重组菌SNNU513-pGLO用于检测该菌株在玉米根部的定殖规律,结果表明,定殖量从表皮到韧皮部有明显减少趋势。