黄连素对结肠平滑肌细胞膜钙激活钾通道和延迟整流钾通道的影响

目的 研究黄连素对结肠平滑肌细胞膜钙离子激活钾通道 (IK(Ca) )和延迟整流钾通道 (IK(V) )的影响以初步探讨其治疗运动性腹泻的机制。方法 酶解法急性分离单个豚鼠结肠平滑肌细胞 ,运用膜片钳方法检测 10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素对结肠平滑肌细胞膜IK(Ca) 和IK(V) 的影响。结果 10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素可抑制豚鼠单个结肠平滑肌细胞膜IK(Ca) (P <0 0 1) ,当阶跃刺激为 +80mV时 ,其IK(Ca) 分别为生理盐水对照组的 (6 8 2 0± 5 17) % ,(5 5 89± 1 6 1) % ,(4 8 0 8± 2 4 5 ) % (P <0 0 1) ;10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素可抑制豚鼠单个结肠平滑肌细胞膜IK(V) (P <0 0 1) ,当阶跃刺激为 +80mV时 ,其IK(V) 分别为生理盐水对照组的 (77 0 6± 6 4 2 ) % ,(6 8 6 7± 6 79) % ,(6 1 0 7±7 72 ) % (P <0 0 1)。结论 Ber能抑制豚鼠结肠平滑肌钙离子激活钾通道和延迟整流钾通道的开放 ,这可能是其治疗运动性腹泻的机制之一。

快速激活延迟整流钾离子通道a亚基F129I突变致长QT综合征机制研究

目的:通过对1例长QT综合征2型患者疑似致病突变KCNH2(F129I)细胞电生理学研究,探究其细胞电生理学发病机制。方法:采用目标区域捕获高深度测序技术进行候选基因突变筛查;以脂质体转染技术通过HEK293细胞表达可疑致病突变。应用全细胞膜片钳技术记录HERG通道电流。结果:候选基因测序发现KCNH2基因第385核苷酸位点T>A杂合子错义突变,导致第129位密码子由苯丙氨酸变为异亮氨酸(F129I),进一步细胞膜片钳研究发现F129I突变型IKr电流密度显著减小,峰值电流抑制率约为野生型的86%。共转染野生型与F129I结果显示IKr电流显著恢复,与野生型差异无统计学意义。结论:本研究通过细胞电生理学研究证实患者携带KCNH2(F129I)致LQT2发生机制为HERG转运障碍,导致IKr功能减弱。

人心肌细胞缓慢激活延迟整流钾电流细胞模型的建立

目的建立稳定表达人心肌细胞缓慢激活延迟整流钾电流(IKs)的细胞模型。方法编码IKs通道α亚单位的KCNQ1基因及β亚单位的KCNE1基因共转染HEK 293细胞,潮霉素B筛选,电生理学及药理学方法鉴定。结果KCNQ1/KCNE1基因被成功转入HEK 293细胞,KCNQ1/KCNE1电流与人心肌IKs电流具有相似的电流特性;hKCNQ1/hKCNE1通道反转电位与细胞外钾离子浓度呈线性关系;选择性IKs通道阻断剂Chromanol 293B对KCNQ1/KCNE1电流具有明显而可逆的抑制作用,其IC50(+40 mV)为9.1μmol/L;无钾细胞外液可以增加KCNQ1/KCNE1电流幅度,+40 mV时电流幅度增加(28.6±2.0)%(P<0.01,n=8),但对其动力学特性无明显影响。结论已经成功构建稳定表达人心肌KCNQ1/KCNE1通道蛋白的HEK 293细胞系,其电生理学特性和药理学特性与人心肌IKs相似,可以作为研究人心肌IKs的细胞模型。

CD1小鼠胃肠道快速延迟性整流性钾通道基因的分布

目的:研究快速延迟性整流性钾通道基因(ether-a-go-go-relatedgene,ERG)mRNA及相关蛋白在正常小鼠胃肠道的表达及不同部位分布的差异性.方法:用原位杂交、RT-PCR和免疫组化技术检测CD1小鼠胃、空肠、回肠和结肠组织ERGmRNA及相关蛋白的分布.结果:三种方法显示胃、空肠、回肠和结肠组织均有ERG阳性表达,阳性细胞主要分布在肌层,少量分布在黏膜、浆膜.胃和结肠ERG阳性表达明显高于回肠和空肠,具有显著性差异(4.30±0.95,3.60±0.70vs2.70±0.82,2.30±1.06;P<0.05).结论:ERG在CD1小鼠胃肠道有阳性表达,并在胃肠道不同部位的表达存在差异性.

豚鼠M细胞缓慢激活型延迟整流钾电流对缺血的反应

目的:研究缺血对豚鼠心室M细胞缓慢激活型延迟整流钾通道电流（Iks）的影响。方法:利用全细胞膜片钳技术观察豚鼠心室M细胞Iks,利用不同成分浴槽液模拟细胞正常及缺血环境,观察Iks尾电流锋值的变化情况。结果:指令电压≥0mV时,缺血组电流显著小于正常组,P<0.05;指令电压小于0mV时,两组间无显著性差异,P>0.05。结论:缺血时M细胞Iks显著减弱,可能会增加心室壁电活动不均一性,促使心律失常的发生.

羧甲基壳聚糖对大鼠单一心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的作用

目的 探讨羧甲基壳聚糖 (CMCS)对心血管作用的机制。方法 利用膜片钳全细胞记录方式 ,双脉冲方波刺激 ,首先给一个时程为 2 0 0ms ,保持电位 - 6 0mV ,去极化到 +30mV的条件脉冲 ,间隔 2 0ms后 ,再给予波宽 12 0 0ms的方波刺激 ,保持电位- 6 0mV ,刺激电压从 - 40mV～ +5 0mV ,步阶电压10mV。结果 CMCS抑制IKur,当其浓度为 1和 2g·L- 1时 ,指令电位 +5 0mV的电流值分别由给药前的 ( 1.8± 0 .7)和 ( 2 .0± 0 .6 )nA下降到 ( 1.6± 0 .6 )(n =12 ,P <0 .0 1)和 ( 1.5± 0 .5 )nA (n =7,P <0 .0 1)。其他指令电位下的IKur的改变也符合此趋势。增加刺激频率及指令电压IKur的变化均不显著 ,提示CMCS对IKur的抑制作用不具有电压依赖性和频率依赖性。结论 CMCS可抑制大鼠单一心房肌细胞IKur。

温度对豚鼠心肌细胞快激活延迟整流钾电流的调节

快激活延迟整流钾电流(I kr)是心肌细胞复极化的主要电流,抑制I kr可使动作电位时程延长,引起早后除极,致心律失常的发生。编码人类心肌细胞I krα亚单位的基因为hERG(human ether-a-go-go-related gene,或KCNH2)[1]。该基因突变可导致遗传性长QT综合征-2 LQTS-2,而许多抗心律失常药物及非抗心律失常药物对hERG通道的过度抑制是获得性长QT综合征的主要发病机制[2-3]。将hERG基因转染至中国仓鼠卵母细胞(CHO)上发现hERG电流及其门控特性受温度的影响较大[4]。本实验观察在不同实验温度下心肌细胞Ikr电流的大小以及门控特性,为进一步研究心肌细胞I kr提供依据。

人类eag相关基因编码的钾通道Ikr与长QT综合征

人类eag相关基因(HERG)编码快速激活的延迟整流钾通道(Ikr)的α亚基、Ikr电流主要参与心肌动作电位的复极过程。HERG发生突变或药物作用于Ikr都可诱发长QT综合征。后者的发病机制及治疗方法和措施是目前临床研究的热点。

钾通道在大鼠支气管平滑肌张力调控中作用的研究

目的 :探讨延迟整流钾通道 (Kv) ,高电导钙激活钾通道 (BKCa)和ATP敏感钾通道 (KATP)在大鼠支气管平滑肌张力调控中的作用。方法 :以特异性钾通道阻断剂为工具 ,采用体外等长张力测定观察钾通道对静息和收缩状态下支气管张力的影响。结果 :①KV阻断剂 4 aminopyridine(4 AP)诱发大鼠支气管平滑肌产生浓度依赖性收缩反应 ,而BKCa阻断剂tetraethylammonium(TEA)和KATP阻断剂 glibenclamide(Glib)对其无影响。②去除上皮对 4 AP诱发大鼠支气管平滑肌收缩反应无影响 ,而钙通道阻断剂nifedipine对其有显著抑制效应。③在 0 .1mmol/L组胺或 50mmol/LKCl诱发支气管平滑肌收缩之前或之后 ,加入TEA(1 ,5mmol/L)或 0 .1mmol/L 4 AP均显著增强二者诱发的收缩反应 ;而Glib(1 0 μmol/L)对其无明显影响。 结论 :Kv参与大鼠支气管平滑肌静息张力的调控 ,而BKCa和KATP对其无影响。

盐酸关附甲素对豚鼠和大鼠心肌细胞钾通道的阻断作用

目的用膜片钳全细胞记录法观察盐酸关附甲素(GFA)对分离的单个豚鼠心室肌细胞缓慢激活型延迟整流钾电流(IKs),大鼠内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)的影响。方法用急性酶解法分离获得单个豚鼠和大鼠心室肌细胞。用标准的全细胞膜片钳技术记录IKs、IK1、Ito离子通道电流,观察不同浓度的GFA对豚鼠心室肌细胞IKs,大鼠心室肌细胞IK1、Ito的影响。结果50,150,500μmol/LGFA使IKs尾电流(IKs,tail)最大峰值电流密度分别降低11.4%±3.32%、23.3%±7.36%、36.7%±4.99%,P<0.05;使IK1稳态电流密度分别降低5.1%±0.6%、7.5%±0.9%、7.2%±0.9%;50,500μmol/LGFA使Ito最大峰值电流密度分别降低6.1%±0.64%、8.6%±1.13%。结论GFA对IKs具有浓度依赖性阻滞作用,这可能是其延长动作电位时程而对静息电位影响不大的电生理基础,是其抗心律失常作用的机制之一。

3种钾通道在哮喘豚鼠气道高反应中的作用

目的:探讨钙激活钾通道(KCa)、延迟整流型钾通道(Kdr)和ATP敏感型钾通道(KATP)在哮喘豚鼠气 道高反应中的作用。方法:采用离体气管环张力实验,观察加入特异性钾通道阻断剂后,与不加阻断剂相比气管环 对组胺反应的量效曲线的差异。结果:(1)加入KCa阻断剂TEA后,对照组气管环对组胺的反应变化不显著,而哮喘 组气管环对10-4mol／L、10-3mol／L组胺的收缩反应均显著低于不加TEA的气管环(P<0．01),量效曲线明显下移; (2)加入Kdr阻断剂4-AP后,对照组气管环对10-3mol／L组胺的最大收缩反应明显下降(P<0．05),组胺的量效曲线 下移,哮喘组气管环对10-4mol／L、10-3mol／L组胺的收缩反应均低于不加4-AP的气管环(P<0．01),且下降程度较 对照组大(P<0．05),量效曲线明显下移;(3)加入KATP阻断剂glibenclamide后,对照组和哮喘组气管环对组胺的量效 曲线与不加glibenclamide的气管环相比变化均无明显差异。结论:在豚鼠哮喘模型中,KCa和Kdr活性的降低在气道高 反应的发生中起介导作用,KATP作用不明显。

HERG基因转染HEK293细胞及其编码通道电流的记录

目的建立HERG基因在HEK293细胞稳定表达的方法。方法利用Lipofectamine2000将pCDNA3.0-HERG转染进入HEK293细胞,通过G418筛选阳性克隆细胞系,采用免疫荧光细胞化学方法检测该蛋白的表达,用全细胞膜片钳技术测定HERG基因介导的快速激活延迟整流钾电流(Ikr)。结果免疫荧光细胞化学检测证实转染HEK293细胞中HERG通道蛋白的表达,膜片钳全细胞实验记录到Ikr。结论该方法有效地将HERG基因转染进入HEK293细胞,并稳定表达HERG通道蛋白及介导Ikr。

胃肠动力药西沙比利对表达于HEK293细胞的人ether-a-go-go相关基因2通道的影响

目的：研究胃肠动力药西沙比利对于在 HEK293细胞异源性表达的人 ether-a-go-go 相关基因2（human ether-a-go-go related gene 2,hERG2）通道性质的影响。方法用 Lipofectamine 2000将 hERG2（AF311913）瞬时转染至 HEK293细胞,使其表达hERG2通道,利用全细胞膜片钳技术记录 hERG2电流。加入西沙比利（终浓度分别为0.001,0.01,0.1,1.0,10.0μmol/ L）,分别记录加药前和加药后2~8 min 的 hERG2电流,分析西沙比利浓度和作用时间对此通道电流的影响。结果西沙比利各浓度实验组中,hERG2时间依赖性电流和尾电流幅度均下降。在去极化电压为＋20 mV 时,随西沙比利浓度升高,电流抑制率逐渐增加。西沙比利的抑制作用随时间延长逐渐增强,西沙比利浓度为1μmol/ L 时,电流在8 min 内完全消失。结论西沙比利对HEK293细胞表达的 hERG2通道的时间依赖性电流和尾电流均有抑制作用,该抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性,即浓度越高,时间越长,抑制效果越明显,直至电流降低至稳态或消失。

心房颤动患者心房组织延迟整流钾通道基因表达的研究

目的探讨心房颤动(AF)患者心房组织延迟整流钾通道(Kv1．5、HERG、KvLQT1通道) 基因表达的变化。方法以窦性心律组(SR组)为对照,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),以三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参照,检测35例风湿性心脏瓣膜病患者右心耳组织Kv1．5、HERG、Kv- LQT1通道的mRNA表达量。结果和SR组相比,Kv1．5钾通道mRNA表达在慢性房颤组(CAF组)下降显著,有统计学意义(P<0．05),在阵发性房颤组(PAF组)差异无统计学意义(P>0．05);HERG钾通道和KvLQT1钾通道mRNA表达CAF组和PAF组差异均无统计学意义(P>0．05)。结论Kvl．5钾通道转录水平下调可能是相应超速延迟整流钾电流(Ikur)重构的分子基础,其基因表达异常是AF电重构的重要环节;HERG钾通道和KvLQT1钾通道在基因转录水平差异无统计学意义,与AF模型快速延迟整流钾电流(Ikr)和缓慢延迟整流钾电流(Iks)无变化相符。

心房颤动患者乙酰胆碱依赖性钾通道和快速延迟整流钾通道基因表达的研究

目的研究心房颤动(AF)患者心房组织中乙酰胆碱依赖性钾通道(Kach)和快速延迟整流钾通道(Kr)的基因表达。探讨AF时心房组织Kach和Kr的mRNA表达改变及其意义。方法自20例因风湿性心脏病或先天性心脏病接受外科手术的患者,于术中采取的右心耳标本分为2组,窦性心律(SR)组14例,慢性AF组6例,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术,检测心房组织Kach和Kr基因表达。结果心房组织中Kir34(Kach的一种成分)和KrmRNA的表达,与SR组051±005相比AF组029±005下调43%,差异有显著性(P<0001),而KrmRNA水平在SR组056±003和AF组057±003之间无明显改变,差异无显著性(P>005)。结论房颤患者KachmRNA表达下调,可能是心房肌细胞IKach密度减弱的分子基础。Kr转录水平无明显改变。

人类快速延迟整流性钾通道基因与基质金属蛋白酶-9在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的观察人类快速延迟整流性钾通道基因（HERG1）表达的HERG1蛋白和基质金属蛋白酶（MMP）-9在胃癌组织中的表达和相关性，探讨两者与胃癌预后的关系。方法应用免疫组织化学法[链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法]、反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）技术及Western blot方法检测80例胃癌组织标本及对应正常胃黏膜组织中的HERG1蛋白和MMP-9的表达，并进行回顾性随访。结果免疫组织化学、RT-qPCR、Western blot分析HERG1、MMP-9在胃癌组织中的阳性表达率分别为55%，60%；HERG1蛋白表达与淋巴结转移，远处转移关系密切；MMP-9的表达与胃癌的浸润程度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移明显相关（P=0.000），而与性别、肿瘤大小、部位无明显相关。结论HERG1蛋白和MMP-9的过度表达与胃癌的发生发展有关，在肿瘤侵袭、转移过程中起重要作用。

房颤冷冻球囊消融术对调控编码超速激活延迟整流钾通道蛋白的影响

目的探讨房颤冷冻球囊消融术对调控编码超速激活延迟整流钾通道蛋白(KCNA5)miRNA的影响,寻找可能的miRNA调控干预靶点,为房颤的治疗提供新思路。方法选取2017年1月~2019年10月新疆维吾尔自治区人民医院接受冷冻球囊消融术后随访3个月无复发患者作为研究对象,分别于术前、术后抽取患者外周血进行全基因组测序,将术前测序作为对照组,术后测序作为试验组,比较两组miRNA表达差异,并通过mirbase、miranda、targetscan3个数据库进行靶基因分析,对存在差异的miRNA进行实时定量逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法验证。结果全基因组测序显示,两组miRNA表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中has-miR-134-5p等15个miRNAs术后下调,has-miR-1255a等6个miRNAs术后上调;调控超速激活延迟整流钾通道蛋白的miRNAs经过逆转录聚合酶链式反应验证提示试验组KCNA5表达较对照组下调[(0.398±0.060)vs(1.000±0.035)],差异有统计学意义(P<0.05),且与Western Blot检测趋势一致。结论冷冻球囊消融术影响了房颤离子流的动态平衡,调控编码超速激活延迟整流钾通道蛋白的hsa-miR-4433b-3p等miRNAs有可能为房颤新的生物标识物和潜在的治疗靶标。

风湿性心脏病合并慢性心房颤动右心耳1.5通道mRNA和蛋白表达的研究

目的观察超速延迟整流性钾通道(kv1.5通道)在风湿性心脏病合并慢性心房颤动(AF)患者右心耳组织中的基因表达变化,探讨其变化在AF的发病与维持机制中的作用。方法采用RT-PCR和Westernblot技术检测风湿性心脏病合并心房颤动患者的右心耳组织中1.5通道mRNA和蛋白的表达情况。结果右心耳心房肌细胞kv1.5通道mRNA表达水平心房颤动组比窦性心律组明显减低(P<0.05);kv1.5通道蛋白表达水平亦比窦性心律组明显减低(P<0.05),两者具有一致性。结论慢性心房颤动时1.5通道mRNA和蛋白的表达比窦性心律时表达明显减低,可能为心房细胞阻止电重构而进行自身适应的结果。

心脏瓣膜病合并心房颤动右心耳超速延迟整流性钾通道mRNA和蛋白表达的变化

近年研究发现，心房电重构是心房颤动（房颤）的发病与维持的基础，多种离子通道基因表达调控变化及相应离子电流变化参与其中。超速延迟整流性钾通道（kv1．5）在心房中表达为IKur，在心室中不表达，在形成心房动作电位中起重要作用。

慢性心房颤动患者心房肌mink亚单位基因mRNA水平的定量检测

目的:心房颤动是目前最为常见的快速性心律失常之一。mink是心肌细胞延迟整流钾通道(Iks)的重要辅助亚单位,在Iks发挥正常功能中起着重要的作用,同时参与心肌细胞其它离子通道电流的调控。本研究采用实时荧光定量PCR技术通过对房颤时mink基因mRNA水平进行定量研究,探讨mink在房颤中的作用和潜在调控机制。方法:①16例风湿性心脏病(rheumaticheartdisease,RHD)患者分为2组:窦性心律组(SR组)8例、房颤心律组(AF组)8例,取其常规切除的右心耳组织作为研究对象;②提取心房肌组织总RNA,通过RT-PCR和TA克隆技术构建含有目的基因片段的质粒标准品;③以GAPDH为内参照基因,采用SYBRGreenⅠ法实时荧光定量PCR技术检测慢性心房颤动和窦性心律患者mink基因mRNA水平。结果:①标准曲线和熔解曲线:标准曲线线性关系良好,相关系数R2>0.99。熔解曲线呈明显单峰状,退火温度与预测值基本一致;②SR组和AF组mink/GAPDH比值分别为0.1890±0.0721(n=8)和0.1413±0.0954(n=8),AF组mink基因mRNA水平低于SR组,P<0.05。结论:与窦性心律患者相比,心房颤动患者mink基因明显下调,mink基因表达量的改变可能参与房颤重构的分子基础。