豚鼠M细胞缓慢激活型延迟整流钾电流对缺血的反应

目的:研究缺血对豚鼠心室M细胞缓慢激活型延迟整流钾通道电流（Iks）的影响。方法:利用全细胞膜片钳技术观察豚鼠心室M细胞Iks,利用不同成分浴槽液模拟细胞正常及缺血环境,观察Iks尾电流锋值的变化情况。结果:指令电压≥0mV时,缺血组电流显著小于正常组,P<0.05;指令电压小于0mV时,两组间无显著性差异,P>0.05。结论:缺血时M细胞Iks显著减弱,可能会增加心室壁电活动不均一性,促使心律失常的发生.

G蛋白激活的内向整流型钾通道4基因研究进展

G蛋白激活的内向整流型钾通道4(GIRK4)是G蛋白偶联内向整流型钾通道家族成员之一,由KCNJ5编码,广泛分布于哺乳动物心、脑等组织器官。近年研究发现,GIRK4基因异常表达与心房纤颤相关,而且可能与肥胖、代谢综合征等众多其他临床疾病的发生、发展密切相关,阐明GIRK4基因在临床疾病中的病理生理机制对探讨一些临床疾病新的诊治思路具有重要的开拓性意义。

人类eag相关基因编码的钾通道Ikr与长QT综合征

人类eag相关基因(HERG)编码快速激活的延迟整流钾通道(Ikr)的α亚基、Ikr电流主要参与心肌动作电位的复极过程。HERG发生突变或药物作用于Ikr都可诱发长QT综合征。后者的发病机制及治疗方法和措施是目前临床研究的热点。

氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流的影响

目的观察氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法酶消化法急性分离Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定IK。加用不同浓度(10、30、100、300、1000μmol/L)氯胺酮后,计算IK抑制率,建立氯胺酮的浓度-效应曲线,选择30 μmol/L氯胺酮作IK 稳态激活(及失活)曲线。结果10、30、100、300、1 000μmol/L氯胺酮对IK的抑制率分别为(10±4)%、(19±4)%、(31±5)%、(50±7)%、(54±8)%。IC50为(100±18)μmol/L,Hill系数为1.33±0.48。激活曲线的半数最大激活膜电位(V1/2)(1.82±0.20)mV上升到(9.30±1.03)mV(n=8,P<0.05),K从(20.4±2.3)mV移动到(16.6±4.2)mV(P>0.05);失活曲线的V1/2从(-29±4)mV下降到(-73±6) mV(P<0.01),K从(26±6)mV上升到(53±11)mV(P<0.01)。30 μmol/L氯胺酮使IK的稳态激活曲线向去极化方向明显移动;使IK的稳态失活曲线向超极化方向明显移动。结论氯胺酮对IK通道有抑制作用,氯胺酮的对中枢神经系统的作用可能与IK抑制有关。

Yotiao蛋白在心律失常中的生物学功能研究进展

Yotiao蛋白是A型激酶锚定蛋白(AKAP) 9基因的表达产物,属于AKAP家族成员,是调控缓慢激活延迟整流钾通道(IKs)亚基磷酸化功能的重要蛋白之一。随着基因分子生物学和全外显子测序技术的发展,越来越多的心律失常被证实与基因和遗传因素有关。许多严重的心律失常(心房颤动、长QT综合征、Brugada综合征等)均与编码心脏钾离子通道的基因突变相关。Yotiao蛋白直接与心脏组织的IKs通道KCNQ1亚基结合,并通过招募蛋白激酶A、磷脂酶1、腺苷酸环化酶等重要蛋白激酶形成大分子传导复合体,特异性地调节细胞底物磷酸化过程中的各种信号转导通路。

下调长链非编码RNA-钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1表达逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药的研究

目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(KCNQ1OT1)在骨肉瘤顺铂(DDP)耐药发生中的作用及机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测KCNQ1OT1在亲代细胞及耐药细胞中表达。针对长链非编码RNA-KCNQ1OT1基因序列体外合成小干扰RNA(siRNA),脂质体法将siRNA转染至人骨肉瘤细胞,采用WST-1检测两组细胞顺铂半数抑制浓度(IC50),Transwell小室检测干扰KCNQ1OT1后对肿瘤迁徙及侵袭的影响情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测上皮-间质转化(EMT)相关分子的表达。所有结果采用GraphPad Prism 7.0(GraphPad Software Inc,La Jolla,CA)及SPSS 22.0软件(SPSS,Chicago,IL,USA)处理。Student’s t检验进行统计分析。结果骨肉瘤顺铂耐药细胞MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为(17.960±0.153)、(7.725±0.183)μmol/L,显著高于亲代细胞的IC50值[(5.074±0.159)、(2.633±0.219)μmol/L,t=101.148、30.903,P<0.01]。MG63顺铂耐药细胞株(MG63/DDP)和143B顺铂耐药细胞株(143B/DDP)中KCNQ1OT1的相对表达量分别为6.830±0.105、6.284±0.465,与亲代细胞比较(3.081±0.167,2.014±0.216),差异有统计学意义(t=22.917、11.722,P<0.01)。干扰KCNQ1OT1表达后可抑制骨肉瘤细胞143B/DDP迁移及侵袭能力,WST-1检测干扰KCNQ1OT1后MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为(8.363±0.089)、(3.947±0.093)μmol/L,与耐药细胞株比较,差异有统计学意义(t=-93.911、-31.878,P<0.01)。耐药细胞比较亲代细胞钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达下调,钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Slug表达上调,干扰KCNQ1OT1后,耐药细胞的E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vimentin、Slug表达下调。结论KCNQ1OT1可能通过调控EMT促进骨肉瘤耐药进程发生。

心肌细胞的钾通道电流

心肌细胞的钾通道电流是复杂的,具有多样性,如果按整流现象来分类,大致可分为两大类:(1)外向整流电流,例如瞬时外向钾电流(I_(to):I_(to1)、I_(to2))与延迟整流钾电流(I_k:、I_(kr)、I_(KS)、I_(kp))。(2)内向整流钾通道电流,例如:内向整流 K^+电流(I_(k1))、ATP 敏感的 K^+电流(I_(K-ATP))和 ACh 激活的 K^+电流(I_(K-ACh))。一般说,内向整流K^+电流(I_(k1))主要调节静息电位,而外向整流钾通道电流主要控制动作电位时程。

豚鼠左心室不同区域细胞Iks电流对缺血反应的差异

目的:研究缺血时豚鼠左心室心内、外膜细胞及M细胞缓慢激活延迟整流钾通道电流（Iks）的变化特性。方法:利用全细胞膜片钳技术观察豚鼠左心室心内、外膜细胞及M细胞Iks变化,利用不同成分浴槽液模拟细胞正常及缺血环境,观察Iks尾电流锋值的变化情况.结果:缺血时,三层细胞Iks均小于正常状态;指令电压小于0 mV时,三层细胞Iks同步减小,减少率无显著性差异,P>0.05。指令电压≥0mV时,M细胞Iks减少程度明显高于心内、外膜细胞,P<0.05;而心内、外膜细胞减少率无显著性差异,P>0.05。结论:缺血时左心室心内、外膜细胞及M细胞Iks减弱,而M细胞Iks减弱更为明显,这可能会增加心室壁电活动不均一性,诱发心律失常。

长QT综合征KCNQ1基因突变筛查方法

目的 研究中国人长 QT综合征 ( long QT syndrome,L QTS)与编码缓慢激活延迟整流钾通道基因 ( postassium voltage- gated channel,KQT- like subfamily member1,KCNQ1)突变的关系。方法 根据心电图 T波的特征对 31个家系进行基因分型的初步预测。对 10个预测为 L QT1家系的家庭成员 ,用聚合酶链反应 -单链构像多态性 ( polymerase chain reaction- single strand conformation polymorphism,PCR- SSCP)方法进行KCNQ1基因 16个外显子及剪接位点的筛查 ,SSCP异常者进行 DNA测序。为避免遗漏心电图表现不典型的 L QT1,同时也为了进行方法学比较 ,对其它 2 1个非 L QT1家系只对先证者进行16个外显子的 PCR和 DNA直接测序。对测序有异常者 ,分析其家系成员相应外显子的疾病分离情况。若异常只存在于患者 ,则检查该异常在 5 0个正常对照者中的情况。结果 ( 1)在心电图预测分型为 L QT1的家系中发现了位于第 5外显子的 S2 77L( 1个家系 )和 G30 6 V( 1个家系 ) 2个错义突变。另外发现了 3个多态性 ,分别为 4 35 C→ T( I14 5 I) ( 7个家系 )、16 32 C→ A ( S5 4 6 S) ( 1个家系 )、IVS1+9C→ G ( 3个家系 )。( 2 )在心电图分型预测为非 L QT1的先证者中只发现了 1个剪接突变 IVS1+5 G→A( 2个家系 )和 1?

葛根素对大鼠心室肌细胞动作电位的影响

目的:从电生理角度探讨葛根素抗心律失常的可能机制。方法:采用膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞动作电位(AP)、转染的人胚胎肾细胞缓慢延迟整流钾电流(IKs),观察加药前、后葛根素对AP和IKs的影响。结果:0.01、0.1、1 mmol/L葛根素可浓度依赖性地延长动作电位时程,分别使APD50从(71.8±11.8)ms延长至(86.9±10.7)ms、(100.5±14.1)ms和(123.6±25.4)ms;使APD90从(164.6±21.4)ms延长至(188.3±11.5)ms、(221.6±25.7)ms和(278.7±38.2)ms(n=6,均P<0.05),而对RMP、APA和APD20无显著影响。此外,0.01、0.1、1 mmol/L葛根素对IKs抑制率分别为(17.8±2.5)%、(40.4±1.9)%和(60.9±3.2)%(n=6,均P<0.05)。结论:葛根素可能通过抑制IKs来延长动作电位时程,发挥抗心律失常作用。

牛磺酸镁配合物对获得性长QT综合征模型的抗心律失常作用研究

目的研究牛磺酸镁配合物(TMCC)对获得性长QT综合征(LQTS)模型的抗心律失常作用及作用机制。方法采用Langendorff逆行主动脉灌流酶解法,急性分离获得豚鼠单个心室肌细胞;建立表达KCNQ1/KCNE1基因的HEK293细胞模型。色原烷醇293B(5μmol/L)用来建立LQTS模型,采用全细胞膜片钳技术记录TMCC(0.01、0.10、1.00 mmol/L)对正常和LQTS模型豚鼠心室肌细胞动作电位和缓慢激活延迟整流外向钾通道(IKs)电流的影响。结果色原烷醇293B可以显著延长50%和90%复极化动作电位持续时间(APD50和APD90),0.01、0.10、1.00 mmol/L TMCC可以显著减弱色原烷醇293B延长APD50和APD90的作用(P<0.05、0.01)。TMCC(0.01、0.10、1.00 mmol/L)对抗色原烷醇293B对IKs电流的抑制作用,减弱色原烷醇293B对I-V曲线的下移,0.1、1.0 mmol/L浓度组显著减弱色原烷醇293B对IKs电流的抑制作用(P<0.01),呈现对抗LQTS的作用。结论TMCC通过缩短动作电位复极时程,增大被抑制的IKs电流,发挥一定的抗LQTS的作用。