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刚地弓形虫缓殖子期特异抗原BSR4的重组表达与免疫特性的初步研究
被引量:
2
1
作者
陈兴智
郭凯
+5 位作者
陈勇
刘丽丽
沈继龙
焦玉萌
方强
孙新
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期170-173,共4页
目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并...
目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化。分别以慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠血清和健康小鼠血清为一抗,用蛋白质印迹(Western blottting)鉴定BSR4重组蛋白的免疫反应性。用3H-TdR掺入法检测慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠脾淋巴细胞对不同浓度BSR4重组蛋白的特异性增殖水平,计算刺激指数(SI)。以BSR4重组蛋白为抗原,用ELISA法检测急性(抗弓形虫IgG-IgM+)和慢性(抗弓形虫IgG+IgM-)弓形虫病患者血清,以及健康人血清,各20份,评判该蛋白的免疫反应性。结果重组质粒pET28a(+)-BSR4经IPTG诱导后表达重组蛋白BSR4,经变性、复性和纯化后获得相对分子质量(Mr)45 000的可溶性蛋白。Western blotting分析结果显示,该蛋白能被慢性弓形虫感染小鼠血清识别。脾淋巴细胞增殖试验表明,1、5和25μg/ml重组蛋白BSR4刺激感染弓形虫小鼠脾淋巴细胞的SI分别为1.13、0.88和1.17,显著高于未感染组(分别为0.46、0.24和0.49,均P<0.01)。ELISA检测结果显示,BSR4抗原能被慢性弓形虫病患者血清(IgG+IgM-)特异性识别(20/20),而不能被急性弓形虫病患者血清(IgG-IgM+)识别(0/20)。结论重组BSR4蛋白具有特异的免疫原性和免疫反应性。
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关键词
刚地弓形虫
缓殖子表面抗原相关蛋白4
重组表达
免疫原性
免疫反应性
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职称材料
题名
刚地弓形虫缓殖子期特异抗原BSR4的重组表达与免疫特性的初步研究
被引量:
2
1
作者
陈兴智
郭凯
陈勇
刘丽丽
沈继龙
焦玉萌
方强
孙新
机构
蚌埠医学院病原生物学教研室
安徽医科大学病原生物学教研室
出处
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期170-173,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划项目(973计划)(No.2010CB530001)
安徽省教育厅重点资助项目(No.KJ2012A201)~~
文摘
目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化。分别以慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠血清和健康小鼠血清为一抗,用蛋白质印迹(Western blottting)鉴定BSR4重组蛋白的免疫反应性。用3H-TdR掺入法检测慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠脾淋巴细胞对不同浓度BSR4重组蛋白的特异性增殖水平,计算刺激指数(SI)。以BSR4重组蛋白为抗原,用ELISA法检测急性(抗弓形虫IgG-IgM+)和慢性(抗弓形虫IgG+IgM-)弓形虫病患者血清,以及健康人血清,各20份,评判该蛋白的免疫反应性。结果重组质粒pET28a(+)-BSR4经IPTG诱导后表达重组蛋白BSR4,经变性、复性和纯化后获得相对分子质量(Mr)45 000的可溶性蛋白。Western blotting分析结果显示,该蛋白能被慢性弓形虫感染小鼠血清识别。脾淋巴细胞增殖试验表明,1、5和25μg/ml重组蛋白BSR4刺激感染弓形虫小鼠脾淋巴细胞的SI分别为1.13、0.88和1.17,显著高于未感染组(分别为0.46、0.24和0.49,均P<0.01)。ELISA检测结果显示,BSR4抗原能被慢性弓形虫病患者血清(IgG+IgM-)特异性识别(20/20),而不能被急性弓形虫病患者血清(IgG-IgM+)识别(0/20)。结论重组BSR4蛋白具有特异的免疫原性和免疫反应性。
关键词
刚地弓形虫
缓殖子表面抗原相关蛋白4
重组表达
免疫原性
免疫反应性
Keywords
Toxoplasma gondii
BSR
4
Recombinant expression
Immunogenicity; Immunoreactivity
分类号
R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]
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作者
出处
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被引量
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1
刚地弓形虫缓殖子期特异抗原BSR4的重组表达与免疫特性的初步研究
陈兴智
郭凯
陈勇
刘丽丽
沈继龙
焦玉萌
方强
孙新
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
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