槲皮素通过下调缓激肽受体B1表达减轻糖尿病大鼠神经病理性疼痛

目的:研究槲皮素通过下调缓激肽受体B1(BDKRB1)表达减轻糖尿病大鼠神经病理性疼痛的机制。方法:60只大鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病神经病理性疼痛(DNP)大鼠模型,采用随机数表法平均分为5组:模型组、槲皮素(100 mg/kg)组、BDKRB1过表达质粒组、空载质粒组、槲皮素(100 mg/kg)+BDKRB1过表达质粒组,另选12只大鼠腹腔注射等剂量生理盐水作为对照组。各组大鼠以药物分组干预处理后,检测大鼠机械性刺激痛觉、热刺激痛觉与冷刺激痛觉,比较各组机械性缩足阈值、冷刺激抬足时间、热敏潜伏期;免疫组织化学染色检测大鼠脊髓背根神经节淋巴细胞浸润情况,比较各组淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)阳性细胞比例;试剂盒测量大鼠血清炎症介质IL-17、环氧化酶-2(COX-2)、IL-18水平;RT-qPCR、Western blot分别检测大鼠脊髓背根神经节BDKRB1 mRNA及蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠机械性缩足阈值、热敏潜伏期显著降低(P<0.05),冷刺激抬足时间、LFA-1阳性细胞比例、血清IL-17、COX-2及IL-18水平、BDKRB1mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组、槲皮素+BDKRB1过表达质粒组分别比较,槲皮素组大鼠机械性缩足阈值、热敏潜伏期均升高(P<0.05),冷刺激抬足时间、LFA-1阳性细胞比例、血清IL-17、COX-2及IL-18水平、BDKRB1 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05);BDKRB1过表达质粒组大鼠机械性缩足阈值、热敏潜伏期均降低(P<0.05),冷刺激抬足时间、LFA-1阳性细胞比例、血清IL-17、COX-2及IL-18水平、BDKRB1 mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);空载质粒组大鼠各指标均无显著变化(P>0.05)。结论:槲皮素通过下调BDKRB1表达抑制炎症,减少淋巴细胞浸润,减轻糖尿病大鼠神经病理性疼痛症状。

尤瑞克林对大鼠缺血-再灌注后缓激肽受体B1和B2表达的影响

目的观察不同剂量尤瑞克林对大脑中动脉闭塞(MCAO)的缺血-再灌注(I/R)SD大鼠缓激肽受体B1(B1R)、缓激肽受体B2(B2R)表达的影响。方法应用改良后Zea Longa线栓方法建立SD大鼠右侧MCAO模型,缺血2 h时拔栓模拟缺血-再灌注,将制备成功的25只SD大鼠按随机抽样法分为假手术组、I/R模型组(I/R+等渗盐水组)、尤瑞克林低剂量治疗组(I/R+LDP组)、尤瑞克林中等剂量治疗组(I/R+MDP组)、尤瑞克林高剂量治疗组(I/R+HDP组),每组5只,术后30 min首次给予尤瑞克林(I/R+LDP组:3.50×10-3 PNAU/kg;I/R+MDP组:8.75×10-3 PNAU/kg;I/R+HDP组:17.50×10-3 PNAU/kg)或等渗盐水尾静脉注射,连续注射7 d、每日定时注射1次,7 d后取材,运用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测梗死灶边缘区域B1R、B2R的mRNA相对表达水平,血管性血友病因子(vWF)免疫荧光测定梗死边界区域微血管密度。结果(1)B1R mRNA表达:与I/R+等渗盐水组比较,I/R+LDP组、I/R+MDP组、I/R+HDP组B1R的mRNA表达水平均上调[(0.34±0.05)、(0.35±0.04)、(0.47±0.03)比(0.23±0.05),均P<0.05];与I/R+LDP组及I/R+MDP组比较,I/R+HDP组B1R的mRNA表达水平均上调(均P<0.05)。(2)B2R mRNA表达:与假手术组比较,I/R+等渗盐水组B2R的mRNA表达水平上调[(0.33±0.01)比(0.23±0.02),P<0.05]。与I/R+等渗盐水组比较,I/R+LDP组、I/R+MDP组、I/R+HDP组B2R的mRNA表达水平均上调[分别为(0.49±0.02)、(0.52±0.04)、(0.71±0.03),均P<0.05];与I/R+LDP组及I/R+MDP组比较,I/R+HDP组B2R的mRNA表达水平均上调(均P<0.05)。(3)微血管密度:与假手术组比较,I/R+等渗盐水组的微血管计数明显增多[(169±6)比(74±12),P<0.01];与I/R+等渗盐水组比较,I/R+LDP组、I/R+MDP组、I/R+HDP组的微血管计数均明显增多[分别为(240±9)、(252±9)、(349±17),均P<0.01];与I/R+LDP组及I/R+MDP组比较,I/R+HDP组微血管计数均明显增多(均P<0.01)。结论一定剂量的尤瑞克林上调MCAO大鼠B1R、B2R表达,发挥促血管再生的作用,且高剂量的尤瑞克林对血管新生作用效果更为明显。

缓激肽B1受体在严重烫伤大鼠内脏血管通透性变化中的作用

目的探讨严重烫伤大鼠内脏血管通透性的变化及缓激肽B1受体在其过程中的作用。方法成年SD大鼠90只,体质量250～300g,分为正常对照组(N组)、假烫伤组(S组)、单纯烫伤组(B组)、假烫伤+缓激肽B1受体特异性抑制剂组(SI组)和烫伤+缓激肽B1受体特异性抑制剂组(BI组)。S组仅补液不烫伤,B组和BI组大鼠均造成30%Ⅲ度烫伤并补液后,分别于伤后0、3、6、12、24h和48h取肺、心、肾、小肠,通过伊文思蓝(Evan’sBlue,EB)法测定各脏器血管通透性变化。结果与S组比较,B组大鼠各脏器组织中EB含量显著增加,在伤后3h达高峰,24h内均处于较高水平,伤后48h内基本恢复到正常水平;静脉注射缓激肽B1受体特异性抑制剂后,BI组与各时相点单纯烫伤组比较,各脏器EB含量显著降低。结论缓激肽B1受体特异性抑制剂可有效降低严重烫伤大鼠伤后主要脏器血管通透性。

缓激肽B1受体1098A/G多态性对ACEI降压药物疗效的影响

目的探讨缓激肽B1受体第3外显子1098A/G等位基因多态性在原发性女性高血压病患者中分布频率及其多态性与血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)降压疗效的关系。方法 150名原发性女性高血压病患者给予卡托普利治疗4周,记录治疗前后的血压水平。采用聚合酶链反应 (PCR)结合限制性内切酶检测缓激肽B1受体基因型。结果本研究中三种基因型AA、GA、GG频率分别为78．5％、19．6％、1．9％;ACEI治疗后AA和GA+GG基因型组收缩压分别下降(25．21±13． 69)mmHg与(34．50±12．56)mmHg,二组间比较有统计学意义(P<0．05)。结论缓激肽B1受体 1098A/G多态性与原发性女性高血压患者服用ACEI类药物的收缩压降低相关,携带G等位基因的患者卡托普利降压疗效优于野生型携带者。

缓激肽B_1受体在卡托普利抑制心脏成纤维细胞增殖中的作用

目的:探讨缓激肽(BK)B1受体在ACEI类药物卡托普利(captopril)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖中的作用及其可能机制。方法:经差速贴壁法培养新生大鼠CFs,随机给予AngⅡ、captopril、B2受体阻断剂icatibant和B1受体阻断剂des-Arg10,Leu9-kallidin进行干预。采用四氮唑盐(MTT)比色法测细胞数目,流式细胞仪技术(FCM)检测细胞周期,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定培养CFs细胞上清液中NO含量和细胞内cGMP水平。结果:与空白对照组比较,AngⅡ10-7mol/L孵育细胞48h后可显著升高CFsS期细胞百分率和MTT比色法测定的CFs吸光度(A490nm)值(P<0.01);Captopril10-5mol/L可明显降低AngⅡ刺激的CFsS期细胞百分率和A490nm值升高(均P<0.05),显著促进CFsNO和cGMP生成,该作用可被icatibant(10-6mol/L)部分阻断,同时阻断B1和B2受体可进一步减弱captopril的作用。结论:Captopril抑制AngⅡ诱导的CFs增殖作用部分是由BK经其B2受体介导的;同时阻断BKB1和B2受体可进一步减弱captopril抗CFs增殖效应,B1受体在B2受体阻断情况下可能起部分代偿作用,抑制CFs生长,该作用与NO、cGMP生成有关。

缓激肽受体B1R对SD大鼠阴茎勃起功能影响的实验研究

目的:研究缓激肽受体B1R对大鼠阴茎勃起功能的影响。方法:通过腹腔注射B1受体激动剂[Des-Arg9]-Bradykinin与B1受体抑制剂Lys-(des-Arg9,Leu8)-Bradykinin,观察各组大鼠阴茎勃起功能,通过HE染色和Masson染色观察大鼠阴茎组织形态变化及纤维化水平的变化,通过Western-blot检测大鼠阴茎组织TGF-β1、TNF-α与IL-6等炎症因子的表达情况。结果:(1)B1受体激动剂显著抑制大鼠阴茎勃起功能,并升高阴茎胶原纤维/肌原纤维比值;而B1受体抑制剂显著提升大鼠阴茎勃起功能,并降低阴茎胶原纤维/肌原纤维比值;(2)B1受体激动剂显著升高大鼠阴茎TGF-β1、TNF-α与IL-6蛋白表达水平,而B1受体抑制剂降低大鼠阴茎TGF-β1、TNF-α与IL-6蛋白表达水平。结论:B1受体可能通过炎症因子、阴茎组织纤维化影响阴茎勃起功能。

糖尿病对大鼠脑缺血再灌注后缓激肽B1和B2受体表达及作用的影响

目的糖尿病基础上发生脑缺血再灌注损伤后,缓激肽B1受体(bradyldnin B1 receptor,B1R)和缓激肽B2受体(bradykinin B2 receptor,B2R)表达及作用的研究尚少。文中旨在观察比较非糖尿病和糖尿病大鼠脑缺血再灌注后B1R和B2R的表达差异及作用变化。方法构建非糖尿病大鼠和2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型,各41只,测试大鼠体重和生化指标。按照随机数字表法分别将8只非糖尿病大鼠及8只2型糖尿病大鼠分为2组:非糖尿病对照组和非糖尿病脑I/R 24 h组,糖尿病对照组和糖尿病脑I/R 24 h组,每组4只。实时荧光定量PCR检测再灌注24 h后B1R和B2R的表达。另将33只非糖尿病大鼠及33只2型糖尿病大鼠以随机数字表法各分为4组:假手术组(n=6)、等渗盐水组(n=9)、B1R拮抗剂组(n=9)和B2R拮抗剂组(n=9),I/R 24 h后,采用NSS评估神经功能缺损程度,TTC染色观察脑梗死体积,TUNEL染色测定细胞凋亡,Fluoro-Jade C染色检测神经元变性。结果 41只糖尿病大鼠造模后3、7、14 d空腹血糖[(23.45±5.01)、(23.71±4.87)、(22.72±4.11)mmol/L]较非糖尿病大鼠[(5.77±0.75)、(6.05±0.69)、(7.15±1.09)mmol/L]明显增加(P<0.05);14 d时血胆固醇[(4.59±3.43)mmol/L]、胰岛素[(67.26±12.02)pmol/L]较非糖尿病大鼠[(1.58±0.37)mmol/L、(25.34±4.88)pmol/L]明显升高(P<0.05),而三酰甘油水平差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病大鼠脑I/R 24 h后脑组织中B1R mRNA水平较非糖尿病大鼠升高更加明显(P<0.01),而B2R mRNA水平则相对下降(P<0.05)。非糖尿病B2R拮抗剂组NSS评分、梗死体积百分比、损伤和凋亡细胞数目较等渗盐水组明显减少(P<0.05);糖尿病B1R拮抗剂组NSS评分、梗死体积百分比、损伤和凋亡细胞数目较等渗盐水组明显减少(P<0.05)。结论非糖尿病大鼠脑I/R损伤诱导了B2R mRNA的显著上调,抑制B2R有效地减少脑梗死体积及减轻组织细胞损伤;糖尿病大鼠的脑I/R损伤诱导了B1R mRNA表达上调,B1R拮抗剂取代B2R拮抗剂发挥神经保护作用。

子宫内膜异位症疼痛与缓激肽B1受体阻断剂的关系

子宫内膜异位症(EMs)是指有功能的子宫内膜异位在子宫腔外,疼痛是其最常见的临床症状。目前,EMs疼痛的发病机制尚不明确。缓激肽是目前已知最强的致痛剂,而缓激肽B1受体是维持炎症反应中渗出及疼痛持续发生的主要因素之一。近年对缓激肽B1受体阻断剂在炎症和疼痛等多个方面的研究发现,其不仅能抑制炎症反应,并且有明显缓解疼痛的效果。对EMs疼痛以及缓激肽B1受体阻断剂在疼痛方面的研究做一综述。

电针对糖尿病周围神经痛大鼠脊髓背角缓激肽B1受体和磷酸化蛋白激酶C的影响

目的:观察电针对糖尿病周围神经痛(DPNP)大鼠空腹血糖、热痛阈、脊髓背角缓激肽B1受体(B1R)和磷酸化蛋白激酶C(p-PKC)的影响。方法:高脂高糖饲养联合腹腔注射STZ构建DPNP大鼠模型,选取足三里穴、昆仑穴予以电针干预,每日1次,每次30min,持续7d。检测各组大鼠空腹血糖和热痛阈,Western Blot检测大鼠腰段脊髓背角B1R和p-PKC的蛋白表达水平。结果:第49天后,与正常组比较,模型组空腹血糖显著升高(P<0.01),热痛阈显著降低(P<0.01);电针干预后,与模型组比较,电针组热痛阈显著提高(P<0.01),B1R和p-PKC的蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论:电针能显著下调DPNP大鼠脊髓背角B1R和p-PKC的蛋白表达,该作用可能参与电针缓解DPNP的过程。

缓激肽B1受体与疼痛

缓激肽B1受体(bradykinin 1 receptors,B1Rs)是与Gq蛋白相偶联的受体。正常状态下,B1R除了在神经系统中(如脊髓背角浅层和感觉神经节)有少数表达外,其他机体组织中几乎不存在。在炎症或者神经受损的情况下,脊髓背角浅层和感觉神经节B1R表达量大大上升,参与炎性疼痛和神经病理性疼痛的产生和维持。近年来的研究表明,B1R在糖尿病性神经病理疼痛的发病中起着重要的作用。阻断B1R能有效抑制糖尿病诱发的热痛觉过敏和冷觉及触觉超敏。此外,B1R和癌症痛的发生也有密切关系,所以,对B1R的研究可能会为治疗这些临床顽症提供新的靶点。

缓激肽B1受体在大鼠急性心肌梗死心肌中的表达及依那普利和氯沙坦对其的影响

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)大鼠中缓激肽B1(BDKB1R)的表达及依那普利氯沙坦药物治疗对其的影响。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。将60只大鼠随机分为假手术组10只,AMI组30只,干预组20只。AMI组分别于6h、24h、3w时取心肌梗死组织,分为6hAMI组、24hAMI组、3w AMI组,每组10只。将干预组分为3w依那普利干预组(A组)10只、3w氯沙坦干预组(B组)10只。分别采用免疫组织化学法检测AMI区BDKB1R蛋白,RT-PCR法检测BDKB1R mRNA的表达。结果:各组大鼠梗死区心肌BDKB1RmRNA和蛋白质的表达均差异有统计学意义,梗死后6h梗死区心肌BDKB1R mRNA和蛋白的表达增加,在24h时达到高峰,3w时下降。3wAMI组和A组、B组BDKB1RmRNA和蛋白的表达仍高于假手术组,但A组和B组高于3wAMI组。结论:心肌梗死后BDKB1R的表达增加,依那普利和氯沙坦可上调其表达,可能是其在心肌梗死中起到保护心肌作用的机制之一。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症模型小鼠BK/BKB1R、PGF2α水平的影响

目的探讨补肾温阳化瘀方干预子宫内膜异位症痛经的作用机制。方法将75只BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组与西药组,每组15只。除假手术组外,其余各组小鼠均采用手术移植法复制子宫内膜异位症痛经模型。造模同时中药高、低剂量组分别每日予补肾温阳化瘀方61.67、15.42g/kg和戊酸雌二醇0.5 mg/kg,西药组每周2次予孕三烯酮0.4 mg/kg和戊酸雌二醇0.5mg/kg。于造模12天腹腔注射缩宫素后观察各组小鼠扭体反应,测量异位灶体积,检测小鼠血清血管舒缓激肽(BK)、前列腺素F2α(PGF2α)含量,免疫组化法和western blotting法检测子宫和异位灶缓激肽B1受体(BKB1R)蛋白表达,RT-PCR法检测子宫和异位灶BKB1R mRNA的表达。结果造模第12天,除假手术组外,其余各组小鼠均成功诱发扭体反应并见异位灶。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组与西药组扭体潜伏期均明显延长、扭体次数显著减少、异位灶体积减小(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组、西药组血清BK、PGF2α含量显著下降,子宫及异位灶BKB1R蛋白及其mRNA表达显著降低(P<0.01),且中药高剂量组子宫内膜异位灶BKB1R mRNA明显低于西药组(P<0.01)。结论补肾温阳化瘀方能有效防治子宫内膜异位症,其机制可能与降低血清BK及PGF2α含量、抑制BKB1R蛋白及其mRNA的表达有关。

小胶质细胞B1R在糖尿病性神经病理性痛中的作用

糖尿病是损害人类健康的一种常见疾病,其最常见的并发症为糖尿病性神经病理性痛。近年来研究发现,小胶质细胞在糖尿病性神经病理性痛的形成中有重要作用。糖尿病性神经病变发生后,诱导小胶质细胞产生缓激肽B1受体(kinin B1 receptors,B1R),进而促使小胶质细胞的激活、迁移,最终导致糖尿病性神经病理性痛产生。该文综述了小胶质细胞B1R在糖尿病性神经病理性痛中的作用。

抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎治疗研究进展

抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎(AAV)是一种以中小血管坏死性血管炎为特征的危及生命的自身免疫性疾病。目前采用的治疗策略为大剂量糖皮质激素联合免疫抑制剂环磷酰胺或利妥昔单抗。总缓解率为70%~90%,但复发率很高,且激素引起的治疗相关副作用决定死亡率和长期生活质量。预防复发,同时减少不良事件的发生是AAV治疗的主要目标。最新研究表明阻断缓激肽B1受体及抑制脾酪氨酸激酶对AAV的治疗结果可能产生重大影响。本文综述了AAV的最新研究进展,为降低AAV的复发率和死亡率、提高患者生活质量探讨新的治疗手段。