密码子优化的牛精蛋白基因在大肠杆菌中的表达

以PCR的方法得到牛精蛋白基因组基因 ,去其内含子 ,得到牛精蛋白cDNA ,克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PE。利用大肠杆菌偏好的编码精氨酸的密码子CGT将野生型牛精蛋白基因中编码精氨酸的稀有密码子 (AGA或AGG)替换掉 ,通过基因合成得到密码子优化的牛精蛋白基因 ,将其克隆入原核表达载体pGEX 2T ,组装成表达载体pGEX 2T PS。将这两个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,同样条件下 ,野生型牛精蛋白基因无法得到表达 ,密码子优化的牛精蛋白基因能够得到良好的表达 ,表达产物约占细菌总蛋白的 18%。将表达蛋白纯化 ,进行DNA—蛋白结合实验 ,发现其能与DNA发生非特异性的结合。