一种新的编码霍乱毒素的丝状噬菌体CTAKΦ

目的 探讨介导霍乱弧菌毒素基因水平转移的一种独特的遗传结构。方法 从O139群霍乱弧菌菌株FJ9712 9上清中分离出丝状噬菌体颗粒CTAKΦ ,并进行电镜观察。从丝状噬菌体颗粒CTAKΦ中纯化出DNA ,并进行链型分析。对pCTAK进行酶谱分析。用ctxAB、zot引物对pCTAK进行PCR扩增检测 ,用RS1探针对pCTAK进行Southernblot检测 ;用pCTAK转化DH5α和IEM10 1得到DX2 9和 432 9,将pCTAK克隆于pUC18载体并转入DH5α得到UD2 9,用GM1 ELISA检测DX2 9、432 9、UD2 9的CT表达。对pCTAK的ctxAB、zot基因片段进行测序 ,并用DNASTAR软件和BLAST算法 ,在国际互联网上对测序结果进行序列分析。结果 发现和分离了一种编码霍乱毒素的质粒pCTAK ,它以稳定的高拷贝数存在于 1株天然的O139霍乱弧菌FJ9712 9中 ;酶谱分析发现其明显不同于CTX元件酶谱 ,在CTX元件中相当保守的酶切位点 :BglⅡ、EcoRⅤ、PstⅠ、EcoRⅠ ,在pCTAK中没有切点。ctxAB、zot引物对pCTAK的PCR扩增检测呈阳性 ,RS1探针杂交呈阳性 ;pCTAK的ctxAB、zot基因序列与已报道的序列有很高的同源性。pCTAK能直接或经载体转化DH5α和IEM10 1并表达CT。从FJ9712 9培养上清中分离出丝状噬菌体颗粒CTAKΦ ,电镜观察并计算其直径大小为 7nm左右。其全基因组大小为 8.5kb ,为?