缝隙连接结合蛋白2在胰腺癌相关成纤维细胞中表达和对胰腺癌侵袭、转移的影响

目的探究缝隙连接结合蛋白2(GJB2)在胰腺癌相关成纤维细胞(CAF)的表达和对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法收集河南省人民医院39例胰腺癌标本和其对应癌旁组织,培养原代CAF和正常胰腺成纤维细胞(NF)以及胰腺癌类器官。测序分析CAF与NF基因表达差异。免疫组化染色进行GJB2表达评分,根据病理结果将标本分为T分期>2组和T≤2组,N>0组和N=0组,有神经浸润组和无神经浸润组。采用t检验评估不同分组GJB2表达评分差异,免疫组化染色进行GJB2表达评分,根据病理结果将标本分为T分期>2组和T≤2组,N>0组和N=0组,有神经浸润组和无神经浸润组。使用t检验评估不同分组GJB2表达评分差异,分析GJB2在CAF中表达量与患者预后相关性。设计GJB2过表达序列并构建载体,转染NF,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后NF中GJB2表达量。将GJB2过表达组设为实验组(OE-NF),转染空载质粒NF设为对照组(OE-NC),分别与胰腺癌细胞、胰腺癌类器官共培养,Transwell实验和侵袭胶实验,采用t检验评估两组细胞影响下胰腺癌细胞的转移能力和侵袭能力差异。结果测序结果显示GJB2在CAF表达量高于NF(log2FoldChange:-5.37 pval:1.34e-04<0.05),免疫组织化学结果显示GJB2在T分期>2组表达量(11.310±0.221)较T≤2组(9.261±0.542)明显升高,差异有统计学意义(t=3.99,P<0.01)。N>0组表达量(10.950±0.249)较N=0的组(9.313±0.669)升高,差异有统计学意义(t=2.857,P<0.05)。神经浸润组(11.600±0.193)较无神经浸润组(9.625±0.442)升高,差异有统计学意义(t=4.563,P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果显示GJB2高表达组患者3年总生存期明显低于低表达组[风险比(HR)=2.50(1.26~4.96),P<0.01]。Transwell迁移实验中OE-NF组穿出数量(20.200±2.417)多于OE-NC组(6.600±1.288,t=4.966,P<0.01),且Transwell侵袭实验中OE-NF组(343.80±19.440)引导肿瘤细胞穿出数量多于OE-NC组(66.380±3.914,t=13.99,P<0.01)。结论GJB2在CAF中高表达且与患者预后相关,并且可促进胰腺癌细胞侵袭和迁移。