苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑内缝隙连接蛋白Cx43和Cx32表达的影响

目的:研究苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑内缝隙连接蛋白Cx43和Cx32表达的影响。方法:40只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、苦参素治疗组、苦参素预防组4组,每组10只。模型组、苦参素治疗组和预防组大鼠分4点在四肢足垫皮下注射用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的抗原乳剂(0.5 mL/只),诱导EAE模型。苦参素预防组于免疫后第1天起腹腔注射苦参素注射液250 mg/kg,1次/d;苦参素治疗组于免疫后第11天起腹腔注射等量的苦参素注射液,1次/d;正常组和模型组于免疫后第1天起腹腔注射等体积生理盐水,1次/d。每天进行神经功能评分。免疫后第18天处死动物,取脑组织,HE和勒克斯光蓝(LFB)染色观察病理组织学改变,免疫荧光法检测脑内Cx43和Cx32蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠神经功能评分增加,脑组织内有大量的炎性细胞浸润和髓鞘脱失,Cx43蛋白表达水平升高,Cx32表达降低(P均<0.05)。与模型组比较,苦参素治疗组和预防组的神经功能评分降低(P<0.05),脑内炎性细胞浸润和髓鞘脱失减轻(P均<0.05),Cx43蛋白表达水平降低(P<0.05),Cx32蛋白表达升高(P<0.05),且苦参素预防组的作用优于治疗组(P<0.05)。结论:苦参素可能通过调节中枢神经系统(CNS)缝隙连接蛋白Cx43和Cx32的表达,减轻CNS脱髓鞘程度,从而对EAE大鼠起到一定的防治作用。

实验性内囊出血后脊髓前角缝隙连接对肌痉挛的影响(英文)

目的观察大鼠实验性脑出血后皮层运动诱发电位(motorevokedpotential,MEP)和脊髓前角运动神经元中缝隙连接蛋白Cx32的改变。以了解脑出血后肌痉挛发生过程中脊髓运动神经元缝隙连接(gapjunction,GJ)对肌痉挛的影响。方法采用大鼠自体血缓慢注入右侧内囊后肢制备大鼠脑内囊出血致肌痉挛模型,应用电生理学方法检测皮层运动诱发电位,应用免疫组化方法观察脊髓前角运动神经元连接蛋白Cx32的改变。结果大鼠右侧内囊出血后右侧MEP波幅较左侧显著降低(P<0.01),出血1周以后病灶侧MEP波幅较出血前均显著降低(P<0.01);MEP潜伏时右侧显著延长,与左侧比较差异非常显著(P<0.01),内囊出血1周以后,MEP潜伏时均明显延长,与出血前比较差异显著(P<0.01)。脑出血后第1周,左侧脊髓灰质前角缝隙连接蛋白Cx32显著升高,同时动物肌痉挛状态明显加重。结论内囊定向的脑出血模型引起内囊损伤侧MEP波幅明显降低、潜伏时延长,一定程度上反映了脊髓束的损伤情况和功能状态,与此同时使脊髓前角运动神经元缝隙连接数量增多,导致神经元兴奋性的同步作用增强,这可能是肌痉挛产生的重要原因。

缝隙连接增强肿瘤坏死因子-α的肝细胞毒性

【目的】观察缝隙连接(GJ)功能改变对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)肝细胞毒性的影响。【方法】使用3种不同的方法:(1)GJ抑制剂预处理;(2)高低密度接种细胞;(3)小分子RNA转染抑制缝隙连接蛋白32(Cx32)表达等3种不同的方法抑制GJ的功能,观察不同浓度TNF-α作用不同时间后对肝细胞毒性的影响。【结果】TNF-α的肝细胞毒性呈浓度和时间依赖性;抑制剂预处理后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低(P<0.01);低密度接种细胞(细胞间无GJ形成)时,TNF-α的肝细胞毒性较高密度接种细胞(细胞间有GJ形成)明显降低(P<0.01);抑制Cx32的表达后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低(P<0.01)。【结论】抑制由Cx32组成的GJ的功能后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低,Cx32的表达对于TNF-α的肝细胞毒性作用具有重要的作用。

针刺“长强”穴对自闭症模型大鼠学习记忆能力和前额叶皮层缝隙连接相关蛋白表达的影响

目的:观察针刺"长强"穴对自闭症模型大鼠学习和记忆能力及对前额叶皮层缝隙连接相关蛋白(CX)表达的影响,探讨针刺"长强"穴改善自闭症大鼠学习记忆能力的可能机制。方法:Wistar孕鼠予以腹腔注射丙戊酸钠后所产子代,经睁眼试验、游泳试验筛选后,确定为自闭症大鼠模型,随机挑选30只,分为长强组、非穴组、模型组,每组10只,正常Wistar大鼠子代随机挑选10只作为空白组。长强组针刺"长强",每次1min,10d为1个疗程,干预3个疗程;非穴组取胁下非经非穴点针刺。采用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测大鼠前额叶皮层CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达。结果:自闭症模型组幼鼠睁眼时间在出生后14d(PN 14)、PN 15、PN 16较空白组晚(P<0.05),游泳能力在PN 13和PN 15时较空白组低下(P<0.05)。治疗前长强组、非穴组、模型组逃避潜伏期及平均速度与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后长强组较模型组及非穴组明显改善(P<0.05)。与空白组比较,模型组CX 43、CX32、CX 36蛋白的表达显著降低(P<0.05);治疗后,长强组CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达显著高于模型组和非穴组(P<0.05)。结论:针刺"长强"穴能通过提高前额叶皮层CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达来改善自闭症模型大鼠学习和记忆能力。