海洋小单孢菌产生的缩肽类化合物rakicidins抗肿瘤活性研究

研究海洋小单孢菌产生的缩肽类化合物rakicidins的体内外抗肿瘤活性。Rakicidin B1、A和B对人结肠癌(HCT-8)细胞有很强的抑制作用,在乏氧培养条件下的抑制作用更强,分别是各自在常氧条件下的15、26和14倍。在移植了HCT-8肿瘤细胞的斑马鱼模型中,B和B1两化合物能显著抑制肿瘤生长。因此,rakicidin B(包括B1)值得进一步作为抗肿瘤药物加以研发。

缩肽类化合物rakicidins体内外抗艰难梭菌活性研究

目的研究海洋小单孢菌产生的缩肽类化合物rakicidins的体内外抗厌氧菌活性。方法微量肉汤稀释法测定rakicidins对厌氧菌的最小抑菌浓度(MIC);小鼠艰难梭菌感染相关性腹泻动物模型评价rakicidin Bx的治疗效果。结果 rakicidin A、B、B1及rakicidin Bx对艰难梭菌等革兰阳性厌氧菌有很强的抑制作用,MIC值0.125~0.25μg/m L。Rakicidin Bx对艰难梭菌感染的小鼠的保护作用虽略不及万古霉素和菲达霉素,但是停药后其与菲达霉素一样均未见复发。结论 Rakicidin Bx值得作为抗艰难梭菌感染的候选药物进行研发。

基于HPLC-QTOF-MS的环缩肽类rakicidins质谱裂解规律初探

目的和方法采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(HPLC-QTOF-MS)联用技术,建立了色谱分离、质谱检测的方法,对rakicidin同系物进行碰撞解离研究,推测其质谱裂解规律。结果获得rakicidins在正离子模式下的质谱裂解规律。结论该质谱裂解规律可应用于rakicidin及其同系物的快速结构解析、定量分析和药动学研究,以及应用于高通量、快速、高效筛选微生物来源的rakicidin类似物。

环缩肽类rakicidins的研究进展

环缩肽类rakicidins于1995年被首次发现具有抗肿瘤活性至今,已被陆续发现在乏氧条件下对肿瘤细胞具有更强的选择抑制活性、抗肿瘤干细胞活性及抗厌氧菌活性等,具有进一步研究的价值。本文对rakicidins的发现、菌源、结构特征、活性、化学合成、生物合成、作用机制、构效关系等报道内容进行综述,分析研究方向,以期为后续研究者提供一些帮助。

PGE1对慢性肾衰患者血管舒缩肽类物质的影响及其临床意义探讨

目的了解前列腺素E1（Prostaglandirl E1，PGE1）对慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）患者血管舒缩肽的影响及其临床意义。方法将47例cRF患者随机分为常规治疗组（23例）和前列腺素E1（PGE1）治疗组（24例）。常规治疗组给予低蛋白饮食、能量及维生素，血压高者口服降压药，血糖高者给予普通胰岛素，贫血者给予促红细胞生成素、糖酐亚铁片及对症治疗。PGE1治疗组在常规治疗组的治疗基础上给予PGE1，10ug／次／d，14d为一疗程。并对两组治疗前后的血管舒缩肽类物质[一氧化氮（N0）、内皮素（ET）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1a（6-Keto-F1a）]及尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）、临床疗效进行比较。结果两组治疗后NO、6-Keto—F1a均显著升高，ET、TXB2／6-Keto—F1a及BUN、Scr均显著降低，两组治疗后均较治疗前有所改善（其中常规治疗组P〈0．05、PGE，治疗组P〈0．01）。两组间比较，PGE1治疗组明显优于常规治疗组（P〈0．05），PGE-治疗组的总有效率显著优于常规治疗组（P〈0．05），TXB2两组治疗前后均变化不显著。结论PGE，能通过对CRF患者的血管舒缩肽类物质的调节改善患者肾功能，从而发挥对CRF的治疗作用。

微生物来源的缩肽类化合物enopeptin A的研究(Ⅰ)：菌种选育及发酵工艺研究

Enopeptin A是一种缩酚酸肽类化合物,具有抗菌、抗病毒等生物活性。以本实验室保藏的链霉菌SIIA-H7264为出发菌,通过紫外(UV)照射、甲基磺酸乙酯(EMS)诱变、亚硝基胍(NTG)诱变以及常压室温等离子体(ARTP)诱变,获得1株高产突变株A-21,其发酵产物Enopeptin A的产量较出发菌株提高了3倍。对发酵条件、发酵培养基组分进行单因素及响应面优化试验,最终Enopeptin A的产量达到1750μg/m L,较初始工艺提高了2.98倍。

不同严重程度IgA肾病患者血管内皮细胞生长因子和内皮缩血管肽-1水平的变化及意义

目的探讨不同严重程度IgA肾病患者血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮缩血管肽-1(ET-1)水平变化及其临床意义。方法选择74例Ig A肾病患者和30例健康者,采用免疫组化法检测肾组织中的VEGF及其受体、ET-1及其受体,采用ELISA检测血清和尿液中VEGF和ET-1的水平,并观察不同尿蛋白浓度水平下及不同严重程度Ig A肾病治疗有效后血清和尿液中VEGF和ET-1的水平。结果 (1)不同严重程度Ig A肾病患者的蛋白尿、血肌酐、收缩压和舒张压均显著高于健康者(P<0.05);并且随着损伤程度的增加各指标显著增加(P<0.05);(2)随着肾小管间质损伤程度的增加IgA肾病患者肾组织、血清和尿液中的VEGF和ET-1以及肾组织中的VEGF受体和ET受体的表达水平显著增加(P<0.05);(3)不同24 h内尿蛋白水平患者间肾组织、血清和尿液中的VEGF和ET-1水平差异有统计学意义(P<0.05);血清和尿液中VEGF和ET-1水平均较治疗前显著降低(P<0.05)。结论 IgA肾病患者肾组织的VEGF及其受体和ET-1及其受体表达增强,血清和尿液中的VEGF和ET-1水平增加,不同严重程度患者治疗有效后其血清和尿液中VEGF和ET-1水平显著降低。VEGF和ET-1可以作为诊断Ig A肾病和评价治疗效果的潜在指标。

内皮缩血管肽A受体拮抗剂ETP-508对内皮缩血管肽1诱导的心肌细胞肥厚的作用

目的观察内皮缩血管肽(ET)A受体拮抗剂ETP-508对ET-1诱导的心肌细胞肥厚的作用。方法心肌细胞用ET-1(10nmol·L-1)或ET-1+ETP-508(10μmol·L-1)处理24h,分别采用光学显微镜、[3H]亮氨酸掺入、激光扫描共聚焦显微镜和RT-PCR技术方法观察ETP-508对心肌细胞表面积、蛋白质合成、肌原纤维肌节重新组装和基因表达的影响。结果ET-110nmol·L-1诱导心肌细胞表面积和[3H]亮氨酸掺入增加,胚胎基因心钠素和肌球蛋白轻链2的mRNA表达增加,肌原纤维节重新形成;ETP-50810μmol·L-1可显著抑制ET-1诱导的心肌细胞表面积和[3H]亮氨酸掺入增加,抑制率分别达56%和46%;并显著减弱肌原纤维节的重新形成和胚胎基因的再表达。结论ETP-508对ET-1诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚有显著的阻断作用。

脑内八肽缩胆囊素水平与提高针刺镇痛疗效的机制研究

目的:探讨八肽缩胆囊素(CCK-8)对抗电针对大鼠尾核中痛反应神经元放电和测量甩尾潜伏期(TFL)痛阈的同时影响。方法:本实验以大鼠尾核中痛兴奋神经元(PEN)和痛抑制神经元(PIN)电变化及辐射热照大鼠尾所引起TFL三者为指标,观察了电针、CCK-8对同时记录PEN或PIN电活动和TFL的影响。结果:①辐射热照大鼠尾可使63个PEN平均放电的净增值(NIV)增加了(285.89±11.58)%或42个PIN平均放电NIV下降了(81.60±8.14)%的同时发生甩尾反射,表现出辐射热致疼痛效应。②电针双侧“足三里”15min后,19个PEN平均放电的抑制率为66.30±10.82%,而平均TFL的延长率是(76.74±9.93)%或12个PIN的平均抑制时程(ID)缩短了(51.45±9.58)%,同时使TFL延长了(77.68±11.38)%,即呈现出电针的镇痛效应。③脑室注射CCK-8(10ng)能同时对抗电针所引起PEN放电的抑制或PIN的ID缩短和TFL的延长作用。结论:CCK-8的抗电针镇痛作用在中枢痛反应神经元电活动和整体行为反射水平上是协同一致的。提示PEN和PIN的电活动作为疼痛和镇痛指标是确实可行的。

环缩酚肽抑制小鼠血管增殖性视网膜病变的研究

【目的】观察两种环缩酚肽的衍生物(Hep-A)和(Hep-B)对氧诱导的血管增殖性视网膜病变的抑制作用。【方法】将鼠龄为7d(P7)的C57BL/6幼鼠置于体积分数75%的氧气箱中连续生活5d,建立氧诱导的血管增殖性视网膜病变模型。在12d(P12)幼鼠回到正常大气环境中,同时开始给小鼠皮下注安慰剂(第1组,n=23)、Hep-A10mg/kg(第2组,n=22)、或者Hep-B10mg/kg(第3组,n=22),每天两次,持续5d。在17d(P17)取鼠眼进行冰冻切片和GSA(griffoniasimplicifolialectinB4)染色,或作荧光素灌注和视网膜平铺片,用图象分析软件定量计算视网膜无灌注区和新生血管的面积。【结果】病理检测视网膜新生血管面积:第一组为(0.51±0.08)mm2/鼠(n=7);第2组为(0.11±0.01)mm2/鼠(n=8);第3组为(0.16±0.02)mm2/鼠(n=8)。视网膜平片检测视网膜新生血管面积:第1组为(1.36土0.02)mm2/眼(n=32),第2组为(0.19±0.01)mm2/眼(n=28),第3组为(0.07±0.01)mm2/眼(n=28);视网膜平片检测视网膜无灌注区面积:第1组为(2.33±0.08)mm2/眼,第2组为(1.08±0.09)mm2/眼,第3组为(1.22±0.11)mm2/眼。经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜新生血管的面积和视网膜无灌注区的面积,均明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】两种环缩酚肽衍生物均能强效?

环缩酚肽抑制视网膜表达VEGF及PECAM基因和血管增生

【目的】观察两种环缩酚肽衍生物(Hep-A和Hep-B)对氧诱导的小鼠视网膜表达血管内皮生长因子(VEGF)和细胞黏附分子(PECAM；ICAM-1；VCAM-1)基因的影响及血管增生的变化。【方法】建立氧诱导的血管增殖性视网膜病变模型，12d开始给小鼠皮下注安慰剂(第1组，n=7)、Hep-A 10 mg／kg(第2组，n=6)或者Hep-B 10 mg／kg(第3组，n=6)，每天两次。5d后取出左侧眼，分离视网膜并抽提RNA，用荧光定量PCR测出上述基因含量，并分别求出每个靶基因与标准基因S16含量的比率；右眼经心脏荧光素灌注后取眼球做视网膜平铺片，用图像分析软件定量计算视网膜新生血管的面积。【结果】视网膜中VEGF／S16的mRNA比率为：第1组(0.554±0.050)，第2组(0.355±0.037)，第3组(0.287±0.051)；PECAM／S16为：第1组(2.050±0.249)，第2组(1.228±0.153)，第3组(1.027±0.210)。经ANOVA分析，第2组和第3组分别与第1组比较，视网膜中VEGF基因表达分别减少36％和48.2％(P=0.001)；PECAM基因表达分别减少40.1％(P＜0.05)和49.9％(P＜0.01)；而VCAM-1和ICAM-1表达无明显差异。视网膜平片检测视网膜新生血管面积：第1组为(1.06±0.03)mm^2／眼，第2组为(0.17±0.01)mm^2／眼，第3组为(0.11±0.01)mm^2／眼；经ANOVA分析，第2组和第3组分别与第1组比较，视网膜新生血管的面积明显减少(P＜0.001)。【结论】两种环缩酚肽衍生物均抑制氧诱导的小鼠视网膜表达VEGF和PECAM基因，并抑制其形成视网膜新生血管。

八肽缩胆囊素调节脂多糖诱导ECV-304细胞核转录因子-κB表达的受体机制研究

目的探讨八肽缩胆囊素(CCK 8)调节脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞核转录因子κB(NFκB)表达的受体机制。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV 304;用溶剂(生理盐水)、LPS、CCK 8、CCK受体(CCK R)非特异性拮抗剂丙谷胺、CCK A受体(CCK AR)特异性拮抗剂CR 1409、CCK B受体(CCK BR)特异性拮抗剂CR 2945分别或联合刺激ECV 304细胞1 h。用蛋白质免疫印迹法(W esternb lot)检测NFκB p65蛋白表达;用免疫细胞化学技术检测NFκB p65蛋白核移位。结果与溶剂对照组比较,LPS可诱导ECV 304细胞NFκB p65蛋白核移位,且其表达明显上调;CCK 8可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的核移位及表达上调;CCK受体拮抗剂可翻转CCK 8的上述抑制效应,其中CR 1409、CR 2945、丙谷胺作用依次增强。结论CCK AR和CCK BR参与介导了CCK 8对LPS诱导ECV 304细胞NFκB表达的抑制作用,其中CCK BR的作用比CCK AR稍强。

八肽缩胆囊素对脂多糖诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氮合酶表达变化的抑制作用

目的探讨八肽缩胆囊素（CCK-8）对脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氯合酶（iNOS）表达变化的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞。用0．01、0．1和1mg／L LPS处理2～24h，用生理盐水、10mol／LCCK-8和0．1mg／L LPS＋10^-8、10^-7、10^-8mol／L CCK-8处理16h；用比色法检测培养液中一氧化氮（NO）含量、细胞NOS活性，免疫细胞化学及蛋白质免疫印迹法检测iNOS蛋白表达。结果与生理盐水处理的对照组比较，LPS诱导培养液NO含量增多、细胞NOS活性增高、iNOS蛋白表达上调；CCK-8剂量依赣性抑制LPS的上述效应。而单独作用对iNOS蛋白表达、NOS活性和NO含量均无明显影响。结论CCK-8可以明显抑制LPS引起ECV-304细胞iNOS蛋白表达上调。减少NO生成。

环六缩酚肽化合物体外抑制人肺癌细胞增殖活性及其机制的研究

目的检测3种环六缩酚肽化合物对人肺部肿瘤细胞增殖活性的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法腐败菌素B,pseudodestruxin C和pullularin C在3种浓度100,10和1μmol/L分别作用于人非小细胞肺癌细胞(A549和QC-56)和人小细胞肺癌细胞(PC-6和QG-90),MTT比色法检测细胞存活率,计算IC_(50)。腐败菌素B,pseudodestruxin C和pullularin C在浓度1μmoL/L时作用于A549细胞24h,双荧光素酶报告基因检测系统检测p53报告基因(pG53-Luc)、bax报告基因(pGBax-Luc)、核因子-kB报告基因(Igk-Luc)和激活T细胞核因子报告基因(NFAT-Lue)的表达。结果 pullularin C对4种实验用人肺癌细胞均显示极强的抑制作用,强于阳性对照药物顺铂;而结构相似的化合物腐败菌素B和pseudodestruxin C对实验用人肺部肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性。结论环六缩酚肽化合物pullularin C对人肺癌细胞的增殖具有较强的抑制活性,并且1μmol/L.pullularinC可明显诱导A549细胞内p-53和bax基因转录的表达,推测pullularin C对人肺肿瘤细胞增殖的抑制作用可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。

新发现的内源性缩血管多肽—偶联因子6

偶联因子 6 (Couplingfactor 6 ,CF6 )是线粒体ATP合酶的一个亚单位 ,它由 76个氨基酸组成。在线粒体内CF6 是一个重要的能量转运物质。近年发现CF6 亦存在于血管内皮细胞膜上并且由其释放进入血液循环。循环血液中的CF6 是一个强烈的血管收缩肽 ,能抑制胞浆磷脂酶A2 的活性 ,减少质膜花生四烯酸释放 ,从而影响前列环素I2 (PGI2 )合成 ,是迄今已知的体内唯一的内源性PGI2 合成抑制因子。CF6 在高血压发病中可能具有重要意义。

环六缩酚肽抑制人前列腺癌细胞增殖活性及作用机制研究

目的研究从微生物次生代谢产物中纯化的3种环六缩酚肽对人前列腺癌细胞(PC-3)增殖的抑制作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法 MTT比色法检测细胞增殖抑制率;TUNEL技术检测PC-3细胞凋亡;Western印迹技术检测Bax和caspase-3蛋白的表达变化。结果 MTT法实验结果显示10μmol·L-1浓度的Pullularin C对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);TUNEL检测结果显示1μmol·L-1浓度的PullularinC处理组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组(P<0.01);Western blot分析结果显示由Pullularin C处理的PC-3细胞中的Bax和caspase-3的表达与对照组相比有明显的增加(P<0.05)。结论 Pullularin C具有极强的抑制人前列腺癌细胞增殖作用,并可诱导其凋亡。Pullularin C诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bax和caspase-3介导。

新的缩血管肽——内皮素

自Furchgott(1980)发现内皮松弛因子(EDRF)以来,血管内皮在维持血管张力和调节血压中的作用受到重视。Yanagisawa(1988)用细胞培养的方法首先从猪主动脉内皮细胞中分离出一种具有缩血管活性的物质,定名为内皮素(Endothelin,ET)。近两年来。