CGRP对辣椒素致痛大鼠热刺激缩足反射潜伏期的影响

目的:通过测大鼠的PWTL,探讨CGRP对辣椒素致痛大鼠热痛觉过敏的影响。方法:雌性SD大鼠48只,体重200～220g,随机分为6组,每组都为8只,A组:正常对照组;B组:生理盐水组;C组:大腿背侧坐骨神经干周围注射辣椒素组;D组:腹腔注射生理盐水+大腿背侧坐骨神经干周围注射辣椒素组;E组:腹腔注射CGRP+大腿背侧坐骨神经干周围注射辣椒素组;F组:腹腔注射CGRP_(8-37)+大腿背侧坐骨神经干周围注射辣椒素组。分别在注射前及注射后10、20、30、40、50、60 min进行热板实验。结果:辣椒素组,大鼠的PWTL比实验前明显缩短(P<0.05),给予CGRP干预后,大鼠的PWTL与实验前和单独注射辣椒素组相比明显缩短(P<0.05),给予CGRP受体竞争性拮抗剂CGRP_(8-37)干预后,发现大鼠的PWTL较CGRP干预组明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CGRP能促进辣椒素致痛大鼠痛阈降低、痛觉过敏,而CGRP_(8-37)能对抗这种伤害效应。

TRPA1在大鼠骨癌痛机械性痛觉过敏及温度异常性疼痛中的作用

目的采用Walker256乳腺癌细胞注入大鼠胫骨髓腔构建骨癌痛模型,探讨TRPA1是否参与骨癌痛的发生与发展。方法12只雌性SD大鼠,随机分为假手术组(胫骨接种0.9%氯化钠注射液10μl)和骨癌痛模型组(胫骨接种Walker256肿瘤细胞10μl),每组6只,分别检测术前1d及术后3d、5d、7d、9d、11d、13d、14d两组大鼠机械性缩足阈值及温度缩足潜伏期变化。术后第14天对各组大鼠行X线及病理切片检查,westernblot法检测两组大鼠TRPA1蛋门表达情况。另10只雌性SD大鼠,随机分为骨癌痛+TRPA1拮抗剂(A967079)组10mg/kg10μl、骨癌痛+0.9%氯化钠注射液组10μl,每组5只,分别检测给药前1h、给药后2h、4h、6h、8h机械性缩足阈值及温度缩足潜伏期变化。结果术后14d大鼠行X线及HE病理切片检测,骨癌痛大鼠肿瘤生长,出现异肿瘤细胞,成功建立骨癌痛模型。术后14d,与假手术组大鼠相比,骨癌痛组大鼠体质量、机械性缩足反射阈值、热痛潜伏期、冷痛潜伏期显著降低(P均<0.01),TRPA1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。模型建立第7天时应用TRPA1拮抗剂A967079对骨癌痛大鼠进行干预,2~4h时骨癌痛大鼠机械性痛敏升高(P均<0.01);给药后4~6h热痛潜伏期升高(P均<0.01)。结论TRPA1对骨癌痛模型机械性痛觉过敏及温度异常性疼痛可能有介导作用。

长期高脂、高糖、高盐饮食对大鼠热和机械痛阈的影响

目的:观察长期高脂、高糖、高盐饲料饲养对正常大鼠热痛阈和机械痛阈的影响。方法:5周龄雄性SD大鼠30只,体重(100±5)g,随机分为高脂、高糖、高盐饲养组为A组(n=20)和正常饲养组为B组(n=10)。两组大鼠每日摄食、饮水不限。第1,10,20,30,40,50,60,70,120天时测量两组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(the fasting insulin,FINS)、热刺激缩足反应潜伏期(paw withdrawal thermallatency,PWTL)、机械刺激缩足反应阈值(pawwithdrawal mechanical threshold,PWMT)、体重、血压。结果:(1)A、B组大鼠空腹血糖均没有发生变化。(2)A组大鼠空腹血清胰岛素在20、30、40、50、60、70、120d明显升高,比较有明显差异(P<0.05),B组大鼠没有明显变化;(3)A组大鼠PWTL在70d以后出现明显下降(P<0.05),B组大鼠PWTL没有明显变化;(4)A组大鼠PWMT在60d出现明显下降(P<0.05),B组大鼠PWMT没有明显变化;(5)A组大鼠血压在20、30、40、50、60、70、120d明显高于B组,比较有明显差异(P<0.05);(6)A组大鼠体重与B组大鼠体重同时升高,在70d以后出现明显差异(P<0.05)。结论:高脂、高糖、高盐饲料饲养大鼠可以导致大鼠高血压,高胰岛素血症和胰岛素抵抗现象(饲养20d后)。在高脂、高糖、高盐饲料喂养下大鼠出现热痛敏(70d)和机械痛敏(60d),但与高血压、高胰岛素以及胰岛素抵抗现象不同时程出现。

大鼠坐骨神经电损伤后的实验性痛定量检测

目的:对大鼠坐骨神经电损伤后疼痛行为进行定量检测,探索周围神经电损伤后出现的感觉功能障碍。方法:成年雄性SD大鼠56只,随机分成假手术组、电损伤65 V、75 V、100 V、125 V、150 V和坐骨神经慢性压榨(CCI)组,共7组,每组8只大鼠。分别于术后1、2、4周对大鼠后足进行热痛敏和机械痛敏定量检测。结果:和对照组相比65 V和75 V组表现出明显的机械缩足反射阈值减小,125 V组1周时机械缩足反射阈值减小,而2周和4周时则明显增大。150 V组1周机械缩足反射阈值无明显变化,2周和4周时明显增大。100 V、125 V和150 V均表现为热刺激缩足反射潜伏期延长。CCI组不论机械还是热刺激,其缩足反射阈值均减小。结论:坐骨神经电损伤可引起大鼠机械性痛阈值和热痛阈值的改变,其中较低电压损伤组大鼠机械性痛阈值减小,而较高电压组大鼠机械刺激阈值和热刺激阈值反而增高,说明较高电压可能导致坐骨神经的感觉传导功能完全受损。

实验性高血糖对大鼠病理性痛反应的影响

目的:研究实验性高血糖大鼠血糖变化对病理性痛反应的影响。方法:用链脲佐菌素制造高血糖大鼠模型,并以生理盐水处理大鼠做为对照。在大鼠后足注入蜜蜂毒,观察其自发痛、持续性热刺激缩足反应潜伏期和机械刺激缩足反应阈值的变化。结果:在高血糖状态下,左足底注射蜜蜂毒引起大鼠持续性自发缩足反射的次数增加;对于病理性痛反应,与基础水平比较,热刺激和机械刺激缩足反应阈值均降低(P<0.05),但是实验组大鼠和生理盐水组大鼠热刺激的反应性比较无差异(P>0.05),实验组大鼠机械刺激缩足反应阈值较生理盐水组大鼠降低(P<0.05)。结论:高血糖大鼠皮下注射蜜蜂毒诱导外周组织局部炎症后,可引起大鼠的持续性自发缩足反射增强和热及机械痛敏。

骨癌痛大鼠钠通道Nav1.8的表达与行为学变化

目的观察钠通道Nav1.8在Walker256乳腺癌细胞所致胫骨骨癌痛大鼠背根神经节(DRG)及丘脑中的表达变化,探讨Nav1.8与癌痛的相关性。方法将Wistar大鼠随机分为癌痛组(n=15)和假手术组(n=15)。在癌痛组大鼠胫骨内注入密度为107/m L的Walker256乳腺癌细胞,建立骨癌痛模型;假手术组在大鼠胫骨内注入相同体积的生理盐水。术后8、11、14、17、21 d评估机械性异常性疼痛和热痛觉过敏。造模21d进行影像学检查后,取其DRG及丘脑组织,荧光实时定量RT-PCR观察Nav1.8 mRNA在DRG和丘脑中的表达变化,免疫荧光观察Nav1.8蛋白在DRG中的表达。结果癌痛组大鼠术后各时间点出现了明显的机械性痛觉过敏,机械性缩足阈值与术前和假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);术后癌痛组热刺激缩足反射潜伏期无显著变化,与术前及假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Nav1.8 mRNA在手术侧DRG及手术对侧丘脑中的表达明显上调(P<0.05);手术对侧DRG和同侧丘脑中的Nav1.8 mRNA与假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Nav1.8的表达上调与大鼠骨癌痛的发生有一定关系。

自发性高血压大鼠降压前后的痛阈改变

目的：研究自发性高血压大鼠降压前后的机械痛阈和热痛阈改变.方法：15只自发性高血压大鼠在实验 d 4～11肌注利血平注射液（1 μg·kg^-1·d^-1）.血压、机械刺激缩足反应阈值和热刺激缩足反应潜伏期作为观察指标.结果：自发性高血压大鼠经利血平降压治疗后血压明显下降约 50 mmHg 左右,机械痛阈和热痛阈均降低（P＜0.05）.结论：自发性高血压可能对自发性高血压大鼠的伤害性感受系统存在可逆的结构和（或）功能影响.

GSK3抑制剂氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠痛觉敏感性的影响

目的:探讨氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠(KO鼠)痛觉敏感性的影响及机制。方法:8周龄KO鼠及野生型(WT鼠)小鼠第1天测定热刺激缩足反射潜伏期(paw withdraw thermal latency,PWTL)值作为基础痛阈,第2～5天腹腔注射氯化锂后测定PWTL值,第6天给药后取脊髓腰骶膨大段组织,通过免疫组化及Western blot检测实验小鼠脊髓GSK3β和P-GSK3β水平的变化。结果:KO鼠的PWTL值比WT鼠明显升高。使用氯化锂后,KO鼠PWTL值恢复至WT鼠水平。KO鼠脊髓P-GSK3β表达较WT鼠明显减少。使用氯化锂后,KO鼠脊髓P-GSK3β表达增多。结论:KO鼠热痛觉敏感性降低。KO鼠脊髓P-GSK3β表达减少可能是KO鼠热痛觉敏感性降低的原因之一;氯化锂可能通过增加脊髓中P-GSK3β的表达而改善KO鼠热痛觉敏感性。

Fmr1基因敲除对小鼠的痛觉敏感性的影响

目的探讨4周龄和8周龄Fmr1基因敲除小鼠(KO鼠)的痛觉敏感性的变化。方法分别挑选4周龄和8周龄的Fmr1基因敲除小鼠(KO)和野生型小鼠(Wild Type,WT)各20只,雌、雄各半,共80只,应用PL-200热刺痛仪测定小鼠后肢热痛阈值,进行统计分析。结果 4周龄和8周龄KO鼠的痛阈均比同周龄WT鼠的痛阈增高。结论 Fmr1基因敲除导致痛觉敏感性下降。

siRNA下调SCN9A表达对慢性炎性痛模型大鼠疼痛的影响

目的探讨siRNA靶向下调SCN9A表达对慢性炎性痛模型大鼠疼痛行为学的影响。方法将18只雄性SPF级SD大鼠随机分成3组,每组6只。空白组不作任何处理,模型组、干预组于右后足皮下给予0.1 mL完全弗氏佐剂建立慢性炎性痛模型,模型组于蛛网膜下腔注射空白慢病毒载体,干预组于蛛网膜下腔注射SCN9A siRNA慢病毒载体(LV-SCN9A-RNAi)。于建模前及建模后1 d、2 d、5 d、8 d、12 d观察大鼠右后肢机械刺激缩足反射阈值(PMWT)和热刺激缩足反射潜伏期(PWTL)。于建模后第13天处死大鼠,取L_(4)~L_(5)背根神经节组织,采用RT-PCR、Western blot检测SCN9A mRNA及蛋白表达水平,同时Western blot检测L_(4)~L_(5)脊髓OX42、GFAP蛋白表达水平。结果各组大鼠建模前PMWT、PWTL比较差异均无统计学意义(P>0.05),模型组、干预组建模后各时间点PMWT、PWTL均明显低/短于空白组(P<0.05)。干预组建模后2 d、5 d、8 d、12 d的PMWT、PWTL明显高/长于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预组SCN9A mRNA表达水平高于空白组,低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预组SCN9A、GFAP、OX42蛋白表达水平高于空白组,低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论蛛网膜下腔注射LV-SCN9A-RNAi可抑制大鼠背根神经节SCN9A表达,从而有效改善慢性炎性痛模型大鼠的疼痛及疼痛行为学。

GSK3抑制剂氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠的痛觉敏感性的影响

目的探讨氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠(KO鼠)的痛觉敏感性的影响及机制。方法 8周龄KO小鼠第1天测定热刺激缩足反射潜伏期(PWTL)值,作为基础痛阈,第2、3、4、5天连续腹腔注射氯化锂,给药30 min后测定PWTL值,第6天给药30 min后取腰骶膨大段脊髓组织,通过免疫印迹技术检测KO及WT鼠脊髓水平的GSK3β和P-GSK3β的变化。结果8周龄KO鼠的痛阈均比同周龄WT鼠的痛阈高。使用氯化锂后,KO鼠痛阈下降,且与WT鼠相比差异无统计学意义。8周龄KO鼠脊髓腰骶膨大段后角边缘层及胶状质的P-GSK3β的表达较WT鼠明显减少。使用氯化锂后,KO鼠脊髓腰骶膨大段后角边缘层及胶状质的P-GSK3β的表达增多,而WT鼠的变化不明显。8周龄KO鼠及WT鼠脊髓腰骶膨大段后角边缘层及胶状质的GSK3β的表达在用药前后均无明显改变。结论 KO鼠热痛觉阈值增高,热痛觉敏感性降低。KO鼠腰骶膨大段脊髓后角的P-GSK3β表达减少可能是KO鼠热痛觉敏感性降低的原因之一;氯化锂可能通过增加脊髓后角中的P-GSK3β的表达而改善KO的鼠热痛觉敏感性。

帕瑞昔布钠不同时间给药对大鼠神经病理性疼痛控制的影响

目的观察不同时间点鞘内给予帕瑞昔布钠对大鼠腰5脊神经结扎加切断(L5 SNL)引起的神经病理性疼痛的防治效果。方法取雄性SD大鼠36只,随机分为6组:正常对照组(NC组):未经任何处理;L5SNL模型组(L5SNL组):神经损伤后即予0.9%NaCl 20μL,12 h/次,共6次;假手术对照组(SC组):仅暴露但不损伤L5脊神经,其余操作同L5SNL组;预处理组(PT组):神经损伤前30 min,单次予帕瑞昔布钠200μg;早期处理组(ET组):神经损伤后即刻予帕瑞昔布钠200μg,12 h/次,共6次;晚处理组(LT组):神经损伤后第7 d开始予帕瑞昔布钠200μg,12 h/次,共6次。采用测试50%机械刺激撤足阈值(50%PMWT)和热刺激撤足潜伏值(PTWL)的方法,观察大鼠造模前1 d、给药后第3、7、14、21、28 d机械痛阈和热痛阈的变化。结果与L5SNL模型组相比,PT和ET组大鼠左足(损伤侧)各时间点的50%PMWT、PTWL均显著升高(P<0.01),ET组效果更佳,可达到NC组正常水平(P>0.05);而LT组大鼠50%PMWT、PTWL值无明显升高(P>0.05);造模后大鼠右足(非损伤侧)的50%PMWT、PTWL也会不同程度降低。帕瑞昔布预防性和早期处理均可有效抑制50%PMWT、PTWL降低程度(P>0.05,P<0.01),其中ET组大鼠相应阈值与NC组相比较无统计学差异(P>0.05)。结论帕瑞昔布钠在神经损伤前预防性处理和损伤后早期处理,对脊神经结扎后大鼠热痛敏和机械痛敏有显著的镇痛和预防作用,而对已经形成的慢性神经病理性疼痛,使用帕瑞昔布钠则无明显的治疗效果。

帕瑞昔布钠不同方式预先给药对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响

目的通过鞘内、腹腔、损伤神经周浸润3种不同给药方式,探讨帕瑞昔布钠预先给药对L5脊神经结扎大鼠神经病理性疼痛行为学的影响。方法成年SD雄性大鼠30只,随机分5组:假手术组(SC组)、模型组(SNL组)、帕瑞昔布钠鞘内注射400μg组(IT组)、腹腔8 mg/kg组(IP组)和神经周围浸润400μg组(PI组),每组6只。各给药组大鼠均在神经结扎前30 min经上述不同途径给予帕瑞昔布钠进行预先给药。监测术前1 d,术后3、7、10、14、21 d各组大鼠双侧后肢的50%机械缩足反应阈值(50%PMWT)和热刺激缩足反应潜伏期(PTWL)。结果单次给予鞘内400μg、腹腔8 mg/kg、神经周浸润400μg帕瑞昔布钠预先给药均可有效抑制大鼠神经结扎损伤后神经病理性疼痛的形成,与SNL组相比,3个给药组大鼠损伤侧(左)各时间点的50%PMWT、PTWL均明显升高(P<0.05);其中IT组升高最为明显,分别与IP组及PI组相比,各值差异均有统计学意义(P<0.05),而IP与PI两组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。除SC组外,其他各组非损伤侧(右)在造模后也出现了50%PMWT、PTWL不同程度的短期降低,鞘内给予400μg帕瑞昔布钠可效抑制其PTWL的降低程度。结论 3种给药方式的帕瑞昔布钠预先给药对脊神经结扎后大鼠热痛敏和机械痛敏的形成均有一定程度的抑制作用,其中以鞘内预先给药的效果最佳,神经周围浸润给药与腹腔给药效果相似。

实验性血压变化对基础痛阈的影响

目的 :观察左侧肾动脉结扎大鼠血压变化对热痛阈和机械痛阈影响的时程。方法 :将 16只动物分为 3组 :假手术组、肾动脉结扎组和肾动脉结扎 +肌注利血平组 ,每天在一定时间检测动脉收缩压 (BP)、热刺激缩足反应潜伏期 (PWTL )和机械刺激缩足反应阈值 (PWMT) ,并作定量分析。结果 :1假手术组 BP,PWTL和 PWMT均未发生明显变化 (P>0 .0 5 )。 2肾动脉结扎组大鼠血压在术后第 1天开始升高 ,第 3天达峰值 ,并维持在高血压水平 (112± 6 vs 16 0± 8m m Hg) ,平行观察显示 PWTL和 PWMT均随动脉收缩压升高而降低 ,提示发生了热和机械痛敏现象。 3利血平降压治疗后动脉收缩压虽然降至正常范围 ,但热痛敏和机械痛敏却未被翻转。结论

Nec-1鞘内注射抑制炎性反应对大鼠外周神经病理性疼痛的影响

目的分析程序性坏死特异性抑制剂(Nec-1)鞘内注射抑制炎性反应对大鼠外周神经病理性疼痛的影响。方法选取45只雄性SD大鼠为研究对象,将45只大鼠按照随机数字表法分为对照组、损伤组、损伤给药组,每组15只。对照组为空白组不做任何处理,损伤组给予坐骨神经损伤,损伤给药组给予坐骨神经损伤,并在术后5 d给予Nec-1鞘内注射治疗,分别于术前1 d,术后1、3、5、7、10、12、14 d观察3组大鼠热刺激缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)。术后14 d采用酶联免疫吸附试验检测所有大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平,将所有大鼠麻醉处死,取L_(4)~L_(6)段脊髓背角,使用Western blot法检测大鼠混合系激酶区域样蛋白(MLKL)、受体相互作用蛋白(RIP)1、RIP3水平。结果3组大鼠术前1 d TWL、MWT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组术前1 d与术后1、3、5、7、10、12、14 d TWL、MWT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。损伤组TWL、MWT术后1、3、5、7、10、12、14 d明显下降,与术前1 d比较,差异有统计学意义(P<0.001)。损伤给药组术后1、3、5 d TWL、MWT较术前1 d明显下降,给药后出现升高,术后7、10、12、14 d TWL、MWT较术后1、3、5 d明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。MLKL、RIP1、RIP3水平在对照组、损伤给药组、损伤组依次升高,两两比较,差异有统计学意义(P<0.001)。TNF-α、IL-1β、IL-6水平在对照组、损伤给药组、损伤组中依次升高,两两比较,差异有统计学意义(P<0.001)。结论Nec-1鞘内注射可以对大鼠外周神经病理性疼痛产生积极影响,还可有效抑制脊髓背角细胞的坏死性凋亡,降低大鼠炎症因子水平。

Gi蛋白介导MrgC受体对CFA炎症痛的抗痛觉过敏作用

通过观察完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)炎症痛大鼠对伤害性热刺激的缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)变化,探讨Gi蛋白是否介导MrgC受体(Mas-related gene C receptors,MrgC)对炎症痛的抗痛觉过敏作用.结果显示,椎管内给予MrgC受体激动剂BAM8-22(bovine adrenal medulla 8-22,BAM8-22)能明显延长CFA炎症鼠在24 h和48 h时的缩足反射潜伏期基础值,并显著增强24h时的抗伤害作用.椎管内预先给予百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)能抑制Gi蛋白的功能.在给予PTX7 d后,初次给予BAM8-22并不能延长CFA炎症鼠24 h时的缩足潜伏期基础值,但在24 h时再次注射BAM8-22时,能显著增强其抗伤害作用和48 h时的缩足潜伏期基础值.以上结果说明在CFA炎症痛模型中,预先给予PTX能抑制BAM8-22的抗痛觉过敏作用,但重复再次给予BAM8-22能恢复Gi蛋白的功能.表明Gi蛋白及其相关信号通路介导MrgC受体在炎症痛中的抗痛觉过敏作用.