缩醛磷脂酰胆碱和缩醛磷脂酰乙醇胺的制备及其对氧自由基的清除作用

为探索猪心脏中缩醛磷脂酰胆碱(plas-PC)和缩醛磷脂酰乙醇胺(plas-PE)的制备方法并评价其对氧自由基的清除能力,以猪心脏为原料,经总磷脂提取、磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)柱层析分离、碱水解制备缩醛磷脂、硅酸柱层析等过程,研究了缩醛磷脂酰胆碱和缩醛磷脂酰乙醇胺的制备方法,并采用超氧阴离子自由基、羟自由基抑制法评价了其抗氧化活性。结果表明,在优化层析条件下,获得的PC纯度为93·5%,产率为36·3%;PE的纯度为91·6%,产率为18·5%。以硅酸为介质进行分步洗脱,获得的plas-PC和plas-PE的纯度为90·2%和92·5%,含磷量为1·67mg/mL和2·18mg/mL,基于总磷脂的产率为3·3%和4·3%。10·0mg/mLplas-PE和plas-PC对超氧阴离子自由基及羟自由基抑制率分别为46·10%、39·11%和33·39%、31·01%。

豚鼠组织中缩醛磷脂酰乙醇胺生物合成能力的比较

目的:探讨豚鼠不同组织中缩醛磷脂酰乙醇胺生物合成能力及其生理意义。方法:使用[3H]-乙醇胺作为原料物,经腹膜内注射至豚鼠体内,检查该标记物在含乙醇胺的缩醛磷脂中在不同组织内的合成能力。结果:显示标记乙醇胺进入缩醛磷脂的能力具有组织特异性,在心脏和大脑中合成能力最强,分别占41%和40%,肾脏居中,占25%。合成能力最低的是肝脏,仅占9%。结论:心脏和大脑是合成缩醛磷脂酰乙醇胺的主要器官,这与它们的重要生理功能相吻合。

缩醛磷脂酰乙醇胺对羟自由基所致脑线粒体损伤影响的实验研究

目的探讨缩醛磷脂酰乙醇胺(P-Et)对羟自由基所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用及机制。方法采用改良蔗糖梯度离心法分离脑线粒体,利用Fe2++维生素C系统产生羟自由基诱导大鼠脑线粒体损伤,并采用不同浓度P-Et处理。测定线粒体肿胀度、膜流动性、膜磷脂含量、呼吸功能、线粒体呼吸酶等。结果羟自由基可造成线粒体肿胀、膜磷脂水平及膜流动性下降、能量代谢抑制等,终浓度为0.03、0.06、0.12、0.24、0.48mmol/L的P-Et处理后上述损伤显著减轻。结论P-Et对羟自由基所致大鼠脑线粒体损伤具有保护作用,机制与减少自由基对线粒体膜的损伤、抑制脂质过氧化等有关。

冰岛刺参缩醛磷脂和醚磷脂对神经生长因子诱导PC12细胞的促神经分化作用

目的:分离纯化冰岛刺参(Cucumaria frondosa)中的缩醛型磷脂酰乙醇胺(plasmenylethonoamine,pPE)和烷氧型磷脂酰胆碱(plasmanylcholine,aPC),并对其促进神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PC12)细胞分化的神经营养作用进行探究。方法:以冰岛刺参为原料,通过柱层析分离法提取pPE和aPC,并通过液相色谱-质谱联用法测定其纯度;分析冰岛刺参pPE和aPC对PC12细胞存活率和分化率的影响,并统计分析细胞轴突长度和数目的变化;进一步通过实时荧光定量聚合酶链式反应、免疫荧光技术等方法检测PC12分化细胞中突触素和生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP-43)的表达量,明确冰岛刺参pPE和aPC对PC12细胞突触生长及分化的影响。结果:制备获得的冰岛刺参pPE和aPC纯度分别为91.0%和89.1%,两种不同结构的磷脂均可显著提高PC12细胞的分化率(P<0.05),通过促进突触素和GAP-43的表达促进细胞轴突生长,pPE的作用效果优于aPC。结论:体外细胞实验结果表明冰岛刺参pPE和aPC能显著促进PC12神经细胞分化及突触生长,且具有浓度依赖性和构效性。但详细的作用机制仍需进一步研究。