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基于缺口酶的链置换等温扩增技术 被引量:5
1
作者 邓世琼 董娟 +3 位作者 陈刚毅 杜凤 邹家尉 唐卓 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1080-1085,共6页
传统的链置换等温扩增技术中需要加入修饰的底物,为了解决这一技术难题,实现常规底物下的链置换等温扩增技术,采用缺口酶Nt.BstNBI代替传统链置换等温扩增技术中的限制性内切酶,通过优化两种酶的比例、反应温度、反应时间、两种原装buf... 传统的链置换等温扩增技术中需要加入修饰的底物,为了解决这一技术难题,实现常规底物下的链置换等温扩增技术,采用缺口酶Nt.BstNBI代替传统链置换等温扩增技术中的限制性内切酶,通过优化两种酶的比例、反应温度、反应时间、两种原装buffer的比例、buffer中的离子浓度等反应条件和引物浓度、引物序列以及引物前端保护序列的长度,最终建立了一种新型的链置换等温扩增技术.该方法可以检测到2 pmol/L的质粒DNA.扩增反应在15-30 min即可完成,并且产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行直接检测.本研究建立的基于缺口酶的链置换等温扩增技术较之传统方法更加简便、快捷、环保且价格低廉,具有非常强的实际应用潜力,特别适用于现场检测. 展开更多
关键词 缺口酶 等温扩增 剪切 链置换扩增
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缺口酶Cas9 D10A和Cas9 H840A在大肠杆菌基因组编辑中的应用
2
作者 韦佳妤 吴方 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1677-1691,共15页
目前Ⅱ型CRISPR/Cas9工具被广泛应用于基因组编辑中,利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术对大肠杆菌(Escherichia coli)基因组进行编辑,可应用于代谢工程及细菌耐药性等研究领域中。利用单缺口核酸酶Cas9 nickase(Cas9n)工具对宿主细胞基因... 目前Ⅱ型CRISPR/Cas9工具被广泛应用于基因组编辑中,利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术对大肠杆菌(Escherichia coli)基因组进行编辑,可应用于代谢工程及细菌耐药性等研究领域中。利用单缺口核酸酶Cas9 nickase(Cas9n)工具对宿主细胞基因进行修饰,可降低由于双链断裂对宿主带来的毒性。但目前利用CRISPR/Cas9n对大肠杆菌基因组编辑的研究较少,不利于缺口酶Cas9 D10A和Cas9 H840A在大肠杆菌基因组编辑的应用。本研究在前人报道的细菌双质粒Cas9基因编辑系统(pCas/pTarget)基础上,通过分子突变的方法构建缺口酶Cas9突变体质粒pCas-D10A和pCas-H840A,以及携带修复模板或无修复模板的靶向大肠杆菌sseA基因的质粒pTargetT-△sseA(993 bp)和pTargetT-△sseA,系统研究了两种缺口酶编辑大肠杆菌内源性基因sseA的有效性和效率。在稳定表达pCas质粒的MG1655菌株中转入携带修复模板的pTargetT-△sseA(993 bp)质粒,通过菌落PCR及DNA测序方法验证基因编辑的有效性和效率,同时用醋酸铅试纸生化方法对敲除sseA基因的菌株进行功能验证。同时,将不含修复模板的pTargetT-△sseA质粒转入含有pCas的MG1655菌株中,通过平板菌落计数检测编辑效率。实验结果表明,在有修复模板和无修复模板两种系统中,Cas9 D10A和Cas9 H840A均可以编辑大肠杆菌内源性基因sseA,两者编辑效率基本一致,但都低于Cas9-WT的编辑效率。相对于野生型Cas9、Cas9 D10A或Cas9 H840A编辑大肠杆菌基因组时具有更小的细菌毒性。本研究为后续发展大肠杆菌的基因组编辑技术提供了一定的研究基础和新的研究思路。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9n 大肠杆菌 基因编辑 sseA 缺口酶
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质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体 被引量:7
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作者 伍金林 韦红 +1 位作者 吴仕孝 刘官信 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期148-150,共3页
目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病... 目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果:质粒Gap-LCR-ELISA可检测出6型CT,并与其他病原体无交叉反应,其最低检测限为2.5个原体(elementarybodiesEB)比PCR敏感10倍。结论:质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度,适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 质粒 缺口-连接链反应-联免疫吸附法
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缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染 被引量:2
4
作者 伍金林 韦红 +2 位作者 吴仕孝 钟晓云 余加林 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期10-13,共4页
目的:用缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)法检测重庆地区孕妇沙眼衣原体感染,以了解围生期沙眼衣原体(CT)的感染现状。方法:以512名孕妇首段尿(FVU)及配对宫颈刮片为研究对象,按照扩大金标准,采用质粒探针和外膜蛋白探针G... 目的:用缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)法检测重庆地区孕妇沙眼衣原体感染,以了解围生期沙眼衣原体(CT)的感染现状。方法:以512名孕妇首段尿(FVU)及配对宫颈刮片为研究对象,按照扩大金标准,采用质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染。结果:①孕妇的CT感染呈很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出。②Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的敏感性分别为90.48%和71.43%(P<0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈刮片和FVU两种标本的敏感性分别为97.62%和90.48%(P>0.05),特异性均为100%。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围生期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度敏感特异的、适合于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 尿 缺口-连接链反应-联免疫吸附法 孕妇
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质粒缺口-连接酶链反应-ELISA法检测重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体感染及基因分型 被引量:2
5
作者 伍金林 韦红 +1 位作者 吴仕孝 钟晓云 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期280-282,共3页
目的:用质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法研究重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体(CT)感染的现状及流行的主要基因型别,为其疫苗的研制提供分子流行病学依据。方法:以512例孕妇的首段尿(FVU)及其配对新生儿的鼻咽拭子为标本,用质粒Gap... 目的:用质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法研究重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体(CT)感染的现状及流行的主要基因型别,为其疫苗的研制提供分子流行病学依据。方法:以512例孕妇的首段尿(FVU)及其配对新生儿的鼻咽拭子为标本,用质粒Gap-LCR-ELISA法检测CT感染者,对阳性母、婴配对标本DNA行omp1-VS4-PCR扩增,产物行双链DNA直接测序并作基因分型。结果:所检重庆地区孕妇CT感染率为7.42%,母婴垂直传播率为15.79%,以阴道分娩为主要传播途径。6对阳性母婴配对标本的CT基因序列一致,其中5对为E型,1对为H型,再次证实了CT的垂直传播途径。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法可用于围生期无症状CT感染孕妇的大规模流行病学调查。重庆地区围生期CT流行型别仍以E型为主。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 质粒缺口-连接链反应-联免疫吸附法 感染 围生期 基因分型
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应用连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA 被引量:1
6
作者 韦红 刘官信 《重庆医学》 CAS CSCD 2003年第12期1648-1649,共2页
目的 建立检测沙眼衣原体感染的具有高度敏感性和特异性的缺口 连接酶链反应 酶联免疫吸附测定法。方法 根据CT主要外膜蛋白稳定区设计 2对互补探针并分别对其两端标记生物素和地高辛 ,对 6种CT标准株、鹦鹉热衣原体标准株和其他细菌... 目的 建立检测沙眼衣原体感染的具有高度敏感性和特异性的缺口 连接酶链反应 酶联免疫吸附测定法。方法 根据CT主要外膜蛋白稳定区设计 2对互补探针并分别对其两端标记生物素和地高辛 ,对 6种CT标准株、鹦鹉热衣原体标准株和其他细菌进行Gap LCR反应并以ELISA和EB染色电泳检测扩增产物以比较两者的检测限度。 结果 Gap LCR可检出 6种CT标准株并不与其他细菌发生交叉反应 ,ELISA可检出 1 0fgDNA模板的扩增产物 ,较EB电泳法敏感 1 0倍。结论 Gap LCR ELISA是一高度敏感特异的检测CT感染的核酸扩增技术 。 展开更多
关键词 缺口—连接链反应—联免疫吸附法 沙眼衣原体 核酸扩增技术
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大鼠梗阻性胆管炎细胞免疫功能降低及中药锦红片的影响 被引量:14
7
作者 章学林 张静喆 +2 位作者 顾宏刚 马恩伟 朱培庭 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第18期2050-2053,共4页
目的:探讨梗阻性胆管炎大鼠细胞免疫功能降低的发生机制及清热通下中药锦红片的影响.方法:♂SD大鼠24只建立急性梗阻性胆管炎模型,随机分为模型组(n=8)、锦红片治疗组(n=8)和单纯胆管梗阻组(n=8),检测血浆IL-2,CD_3^+,CD_4^+,CD_8^+,内... 目的:探讨梗阻性胆管炎大鼠细胞免疫功能降低的发生机制及清热通下中药锦红片的影响.方法:♂SD大鼠24只建立急性梗阻性胆管炎模型,随机分为模型组(n=8)、锦红片治疗组(n=8)和单纯胆管梗阻组(n=8),检测血浆IL-2,CD_3^+,CD_4^+,CD_8^+,内毒素,胸腺指数,胸腺细胞凋亡指数及电镜下观察胸腺的超微结构及凋亡.结果:模型组IL-2,CD_3^+,CD_4^+和胸腺指数显著低于治疗组和单纯胆管梗阻组(IL-2:28.5±3.0 ng/L vs 33.9±3.6 ng/L,39.6±2.2 ng/L,P<0.05,P<0.01;CD_3^+:54.5%±5.5% vs 70.7%±4.8%,66.3%±7.1%,均P<0.01;CD_4^+:34.5%±8.3% vs 44.2%±3.3%,44.5%±4.2%,均P<0.01:胸腺指数:0.89±0.18 vs 1.10±0.13.1.12±0.24,均P<0.05),CD_8^+3组间没有统计学差异,血浆内毒素和凋亡指数明显高于治疗组和梗阻组(内毒素:0.85±0.14 Eu/mL vs 0.53±0.10 EU/mL,0.49±0.11 EU/mL,均P<0.01;凋亡指数:25.7±5.1 vs 15.8±5.5.9.0±3.1.P<0.05,P<0.01),模型组胸腺可见较多典型的凋亡细胞,结果显示经中药干预治疗后,免疫功能、内毒素血症和胸腺细胞凋亡有所改善,接近单纯胆管梗阻组水平.结论:梗阻性胆管炎大鼠存在免疫功能降低,胸腺细胞异常凋亡.锦红片对维持免疫机能的稳定有积极的意义. 展开更多
关键词 中药锦红片 梗阻性胆管炎 胸腺 细胞免疫 凋亡 联免疫法 末端脱氧核苷酸转移缺口标记
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TUNEL法原位检测心肌细胞凋亡的改进 被引量:18
8
作者 董小莉 谭宁 +2 位作者 符永恒 邓宇珺 孙凯亮 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1038-1040,共3页
目的:脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)是检测细胞凋亡的常用方法,但以往仍有TUNEL假阳性率高的报道。本实验目的在于探讨应用TUNEL检测心肌细胞凋亡时增强其特异性的方法。方法:缺血再灌注心肌组织的石蜡切片(2μm... 目的:脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)是检测细胞凋亡的常用方法,但以往仍有TUNEL假阳性率高的报道。本实验目的在于探讨应用TUNEL检测心肌细胞凋亡时增强其特异性的方法。方法:缺血再灌注心肌组织的石蜡切片(2μm)和冰冻切片(3μm)进行TUNEL染色。分为石蜡切片HE染色组,石蜡切片常规TUNEL组,冰冻切片改良TUNEL组。石蜡切片常规TUNEL组完全按照试剂盒说明书进行,光学显微镜下观察;冰冻切片改良TUNEL组使用荧光素(FITC)标记的dUTP及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DA-PI)双重荧光染色,在共聚焦显微镜下观察。结果:TUNEL改良法凋亡背景清晰,阳性细胞主要分布在缺血再灌注损伤区域,其凋亡检出率与石蜡切片HE染色相比无显著差异(P>0.05);常规TUNEL组凋亡背景清晰度较差,非缺血再灌注损伤区域亦有大量阳性细胞出现,其凋亡率明显高于石蜡切片HE染色(P<0.01)。结论:冰冻切片改良TUNEL法可能是更适宜研究SD大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的方法。 展开更多
关键词 心肌细胞凋亡 冰冻切片 脱氧核糖核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法
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Fluoro-Jade B染色与TUNEL比较检测乙醇诱导神经细胞凋亡 被引量:1
9
作者 刘红亮 王靖凯 +3 位作者 邓锦波 胡磊 张路 刘彬 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期356-359,共4页
目的:建立利用Fluoro-Jade B(FJ-B)染色检测乙醇诱导PC12细胞及小鼠海马脑片上神经细胞凋亡的方法并与TUNEL比较.方法:利用不同浓度的乙醇分别诱导PC12细胞和小鼠海马脑片上神经细胞凋亡,用FJ-B染色检测神经细胞凋亡,同时用TUNEL检测进... 目的:建立利用Fluoro-Jade B(FJ-B)染色检测乙醇诱导PC12细胞及小鼠海马脑片上神经细胞凋亡的方法并与TUNEL比较.方法:利用不同浓度的乙醇分别诱导PC12细胞和小鼠海马脑片上神经细胞凋亡,用FJ-B染色检测神经细胞凋亡,同时用TUNEL检测进行比较,从凋亡率、单位面积阳性细胞数的统计结果分析、实验过程等方面评价2种方法的优缺点.结果:2种方法检测结果显示乙醇处理组与对照组相比差异有统计学意义,2种方法相同组间对比分析差异无统计学意义.结论:FJ-B染色与TUNEL在检测乙醇对神经细胞凋亡影响的结果无差异;且FJ-B染色更适合在脑片上检测神经细胞的凋亡. 展开更多
关键词 Fluoro-Jade染色 脱氧核糖核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法 海马脑片 凋亡检测
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C-myc基因表达及细胞凋亡在脂溢性角化病皮损中的意义 被引量:3
10
作者 杜镇 海艺贝 +3 位作者 冯世军 王艳心 王成 李保强 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第11期41-44,共4页
目的观察脂溢性角化病(SK)中C-myc基因表达及细胞凋亡情况,探讨脂溢性角化病的发病机制。方法对66例脂溢性角化病皮损及10例正常皮肤组织采用免疫组织化学法检测C-myc基因表达及原位细胞凋亡检测(TUNEL)法检测细胞凋亡情况。结果两组性... 目的观察脂溢性角化病(SK)中C-myc基因表达及细胞凋亡情况,探讨脂溢性角化病的发病机制。方法对66例脂溢性角化病皮损及10例正常皮肤组织采用免疫组织化学法检测C-myc基因表达及原位细胞凋亡检测(TUNEL)法检测细胞凋亡情况。结果两组性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05);SK组皮损区C-myc基因阳性细胞数百分比(21.94±19.45)%与对照组(0%)相比增加(P<0.05);66例SK皮损中有52例C-myc基因表达阳性,对照组中均无阳性表达,两组阳性率差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL凋亡检测中SK组的凋亡指数(53.01±31.97)与对照组(33.50±23.86)比较,差异无统计学意义(P>0.05);Spearman相关性分析显示,C-myc基因在SK皮损中阳性细胞百分比与SK皮损中细胞凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05)。结论 C-myc基因参与脂溢性角化病的发生发展,脂溢性角化病皮损中细胞凋亡有所增加。该结果对研究其发病机制有一定的指导意义。 展开更多
关键词 脂溢性角化病 免疫组织化学 C-MYC基因 脱氧核糖核苷酸末端转移介导的缺口末端标记
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TUNEL染色结合细胞形态学特点鉴别急性胰腺炎时腺泡细胞的死亡方式 被引量:1
11
作者 胡洋洋 周春华 +2 位作者 窦文欢 凤辉 王少峰 《世界华人消化杂志》 CAS 2015年第20期3259-3264,共6页
目的:通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick labeling,TUNEL)染色检测大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)中腺泡细胞的死亡情况,探讨TUNEL染色阳性细胞的形态与细胞死亡方式之间的关系.方法:大... 目的:通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick labeling,TUNEL)染色检测大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)中腺泡细胞的死亡情况,探讨TUNEL染色阳性细胞的形态与细胞死亡方式之间的关系.方法:大鼠随机分为ANP组和假手术组(sham operation,SO),每组6只,利用4%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)模型,对两组大鼠胰腺组织进行病理学观察并采用TUNEL技术对胰腺组织切片进行染色,光镜下观察TUNEL染色阳性细胞的形态学表现.结果:对比假手术组,ANP组大鼠胰腺组织出现典型的AP样病理改变,同时可见大量的TUNEL染色阳性腺泡细胞.阳性细胞之间的形态学特点各异,其中既有细胞呈凋亡表现,如核固缩和核破裂伴凋亡小体形成;也有细胞呈坏死表现,如核膨胀、核溶解以及胞质空泡化.两种细胞死亡方式的形态学表现之间存在显著差异.结论:AP时,TUNEL染色并不能很好地区分腺泡细胞的坏死与凋亡,但其联合阳性染色细胞的形态学特征可初步鉴别两种细胞死亡方式. 展开更多
关键词 急性胰腺炎 脱氧核糖核苷酸末端转移介导的缺口末端标记 凋亡 坏死
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肝胆管癌中bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的研究 被引量:6
12
作者 单长民 刘同慎 马云 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期405-409,共5页
目的 探索细胞凋亡及相关基因在体内肝胆管癌发生中所起的作用。 方法 用mRNA原位杂交技术和免疫组织化学方法 ,检测了肝胆管癌中bcl 2和bax基因表达 ;利用TUNEL法检测其细胞凋亡 ; 结果 肿瘤中bcl 2表达增强 ,癌旁组织中bax表达增... 目的 探索细胞凋亡及相关基因在体内肝胆管癌发生中所起的作用。 方法 用mRNA原位杂交技术和免疫组织化学方法 ,检测了肝胆管癌中bcl 2和bax基因表达 ;利用TUNEL法检测其细胞凋亡 ; 结果 肿瘤中bcl 2表达增强 ,癌旁组织中bax表达增强 ,癌旁组织中凋亡细胞增加 ; 结论 bcl 2基因激活后 ,抑制bax的作用及基因表达 ,可能使细胞的增殖加快 ,肿瘤发生 ; 展开更多
关键词 BAX基因 细胞凋亡 原位杂交 免疫组织化学 BCL-2基因 脱氧核糖核酸末端转移介导的缺口末端标记法 肝胆管癌
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用质粒Gap-LCR-ELISA法检测孕妇尿中沙眼衣原体 被引量:3
13
作者 伍金林 韦红 +2 位作者 吴仕孝 钟晓云 余加林 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期523-525,共3页
目的:研究孕妇尿液中对质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法检测沙眼衣原体(CT)产生抑制作用的物质及其去除方法,以提高该方法检测无症状孕妇CT感染的灵敏度。方法:对181份孕妇首段尿(FVU)进行全面尿化学分析后,采用CT标准株“Spik... 目的:研究孕妇尿液中对质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法检测沙眼衣原体(CT)产生抑制作用的物质及其去除方法,以提高该方法检测无症状孕妇CT感染的灵敏度。方法:对181份孕妇首段尿(FVU)进行全面尿化学分析后,采用CT标准株“Spike”法(铆钉法),对出现Gap—LCR—ELISA抑制的标本用多因素非条件Logistic回归分析与抑制作用相关的成分,在进行一系列去抑制处理后比较各方法的转阳率。结果:孕妇FVU对质粒Gap-LCR-ELISA检测CT的抑制率为6.08%(11/181),其中白细胞和磷酸盐结晶与抑制作用相关;对FVU作-70℃~37℃快速冻融2次的预处理可使90.91%的假阴性转为阳性,并对模板无明显降解作用。结论:孕妇尿液中确有对Gap—LCR—ELISA产生抑制作用的物质存在,可通过改良标本预处理的方法降低其所致的假阴性。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 尿 孕妇 质粒缺口-连接链反应-联免疫吸附法 抑制物
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乳腺癌组织中p51基因的表达及其意义 被引量:1
14
作者 杨开颜 俞康 +2 位作者 李剑敏 黄卡特 周韧 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2006年第3期249-251,共3页
背景与目的:研究p51基因与乳腺癌的关系。材料与方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(Terminaldeoxynucleotidyltransferasebiotin-dUTPnickendlabeling,TUNEL)、RT-PCR等技术检测乳腺癌组织p51基因的表达及其与细胞... 背景与目的:研究p51基因与乳腺癌的关系。材料与方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(Terminaldeoxynucleotidyltransferasebiotin-dUTPnickendlabeling,TUNEL)、RT-PCR等技术检测乳腺癌组织p51基因的表达及其与细胞凋亡、激素受体的关系。结果:乳腺癌(45例)组织p51基因表达(46.7%)高于良性乳腺病变(35例)组织(11.4%);淋巴结转移阳性者p51基因表达(90.5%)明显高于阴性者(8.3%);p51基因表达与雌激素、孕激素受体无相关性(P>0.05);p51基因表达阳性的肿瘤细胞凋亡率与阴性细胞差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P51基因表达增多可能与乳腺癌发病及转移有关。 展开更多
关键词 P51基因 乳腺癌 凋亡 末端脱氧核苷酸转移介导的dUTP缺口末端标记 反转录-PCR
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混合尿液质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染 被引量:1
15
作者 伍金林 韦红 吴仕孝 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》 CAS 2007年第4期194-196,共3页
目的建立高效的围生期沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)流行病学调查批处理方法--混合尿液(pooling urine)质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(gap-ligase chain reaction-en-zyme linked immunoabsorbent assay,gap-LCR-ELISA... 目的建立高效的围生期沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)流行病学调查批处理方法--混合尿液(pooling urine)质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(gap-ligase chain reaction-en-zyme linked immunoabsorbent assay,gap-LCR-ELISA)。方法比较质粒gap-LCR-ELISA对不同体积孕妇尿液混合库(4×,6×,8×,10×)及单份样本(1×)检出CT感染的灵敏度和特异度。结果质粒gap-LCR-ELISA检测4,6,8,10人份混合尿样中的CT感染均可达到100%的特异度,灵敏度分别为95%,85%,70%和65%,各组实验成本下降的比例均超过40%。结论4人份孕妇混合尿液质粒gap-LCR-ELISA的检测效能,等同于对单份标本的独立检测,为该法最适宜的标本混合策略,在大规模流行病学调查中具有应用价值。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 质粒 缺口-连接链反应-联免疫吸附法 尿
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大鼠脑损伤后氨基胍的神经保护作用 被引量:6
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作者 倪衡建 何志贤 +2 位作者 张志军 杨学峰 胡燕 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期346-350,共5页
目的探讨大鼠脑损伤后诱导性一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂———氨基胍(AG)的神经保护作用。方法采用大鼠额叶锐器损伤模型,将SD大鼠随机分成氨基胍(AG)治疗组和生理盐水(NS)对照组。用生物化学方法检测NO含量;RT-PCR法及免疫组织化学染色... 目的探讨大鼠脑损伤后诱导性一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂———氨基胍(AG)的神经保护作用。方法采用大鼠额叶锐器损伤模型,将SD大鼠随机分成氨基胍(AG)治疗组和生理盐水(NS)对照组。用生物化学方法检测NO含量;RT-PCR法及免疫组织化学染色方法观察iNOSmRNA和iNOS阳性细胞表达变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。将两组结果进行比较。结果AG治疗组创伤区及周边NO含量、iNOSmRNA和iNOS阳性细胞表达量较NS组明显降低,凋亡细胞数量也相应明显减少。结论AG能选择性地抑制iNOS表达,减少NO过量产生,从而减少细胞凋亡,发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 额叶损伤 氨基胍 神经保护 诱导性一氧化氮合 末端脱氧核苷酸转移介导的原位缺口末端标记法(TUNEL) 逆转录聚合连反应 免疫组织化学 大鼠
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重组人钙调素对小鼠胚胎发育及凋亡的影响
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作者 章汉旺 李慧 《生殖医学杂志》 CAS 2007年第4期264-268,共5页
目的探讨外源重组人钙调素(rhCAM)对小鼠早期胚胎体外发育及凋亡的影响。方法小鼠超促排卵,收集2-细胞胚胎置于含不同浓度rhCAM的IVF-30培养液中,观察并记录胚胎形态,TUNEL法检测囊胚细胞数及囊胚细胞凋亡情况。结果20μg/ml rhCAM组的... 目的探讨外源重组人钙调素(rhCAM)对小鼠早期胚胎体外发育及凋亡的影响。方法小鼠超促排卵,收集2-细胞胚胎置于含不同浓度rhCAM的IVF-30培养液中,观察并记录胚胎形态,TUNEL法检测囊胚细胞数及囊胚细胞凋亡情况。结果20μg/ml rhCAM组的胚胎体外培养48、72 h的囊胚形成率和孵化囊胚率均高于对照组,该组体外培养72 h囊胚细胞凋亡指数显著低于对照组。200μg/ml rhCAM组的胚胎囊胚形成率低于对照组,凋亡指数显著高于对照组。结论一定浓度的rhCAM可促进胚胎体外发育并可抑制胚胎细胞的凋亡。 展开更多
关键词 胚胎 钙调素 凋亡 脱氧核糖核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法
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构建游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡模型验证球形脂联素的拮抗作用 被引量:6
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作者 赵红莉 严励 +4 位作者 程桦 叶建红 周嘉 李志臻 傅祖植 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第19期111-113,i003,共4页
目的:构建游离脂肪酸(棕榈酸)诱导胰岛细胞凋亡模型,并观察球形脂联素对胰岛细胞凋亡的拮抗作用。方法:实验于2004-15/2005-30在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。构建游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡模型及分组:采用小鼠胰岛... 目的:构建游离脂肪酸(棕榈酸)诱导胰岛细胞凋亡模型,并观察球形脂联素对胰岛细胞凋亡的拮抗作用。方法:实验于2004-15/2005-30在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。构建游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡模型及分组:采用小鼠胰岛素瘤细胞株βNIT-1,取对数生长期的细胞,按1×105个/孔的密度接种于6孔板,细胞生长至80%融合时将随机细胞分为3组,每组3孔,分别为对照组,棕榈酸组,棕榈酸+球形脂联素组。3组培养基均含5g/L的牛血清白蛋白、体积分数为0.03胎牛血清及体积分数为0.01的无水乙醇;棕榈酸组又加含有终浓度为500μmol/L棕榈酸;棕榈酸+球形脂联素组又加终浓度为500μmol/L棕榈酸和0.5mg/L脂联素。处理48h后终止实验。采用Hochest33342和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测棕榈酸诱导胰岛细胞凋亡率和凋亡指数及脂联素处理后脂性凋亡的改善情况。结果:①经Hochest33342染色检测3组小鼠胰岛素瘤细胞株βNIT-1细胞凋亡指数明显不同(F=300.270,P<0.05),棕榈酸组明显高于对照组犤(12.40±1.57)%,(2.05±0.59)%犦,说明500μmol/L棕榈酸可成功构建胰岛细胞凋亡模型,经脂联素处理后凋亡指数明显降低犤(12.40±1.57)%,(3.87±0.93)%犦,说明球形脂联素组对胰岛细胞凋亡有拮抗作用。②经脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测小鼠胰岛素瘤细胞株βNIT-1细胞凋亡指数3组明显不同(F=191.221,P<0.05),棕榈酸组明显高于对照组犤(26.33±5.6)%,(2.32±0.78)%犦,说明500μmol/L棕榈酸可成功构建胰岛细胞凋亡模型,经脂联素处理后凋亡指数明显降低犤(2.32±0.78)%,(4.90±0.82)%,P<0.05犦说明球形脂联素组对胰岛细胞凋亡有拮抗作用。结论:①Hoescht染色法及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法结果均表明在体积分数为0.03胎牛血清、5g/L的牛血清白蛋白的Dulbecco改良的Eagle培养液条件下加入终浓度为500μmol/L棕榈酸处理细胞48h可成功构建胰岛细胞凋亡的细胞模型。②球形脂联素可拮抗胰岛细胞的脂性凋亡,从而发挥了其调节糖脂代谢的作用。 展开更多
关键词 胰岛细胞凋亡 脱氧核糖核酸末端转移介导的缺口末端标记法 游离脂肪酸 拮抗作用 脂联素 球形 模型验证 中山大学附属第二医院 细胞凋亡模型 mol/L 牛血清白蛋白 细胞凋亡指数 NIT-1 瘤细胞株 体积分数 棕榈酸 胎牛血清
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信号转导分子smad4基因表达抑制体外培养人血管平滑肌细胞的增殖
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作者 闫承慧 申景岭 +5 位作者 金焰 王柏秋 王哲 张贵寅 李璞 傅松滨 《中国临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期58-59,i002,共3页
目的:探讨细胞内转化生长因子β信号通路中信号转导分子Smad4与平滑肌细胞的增殖关系。方法:实验于2003-08/10在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。①取体质量200g左右的健康雄性SD大鼠,常规胶原酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞... 目的:探讨细胞内转化生长因子β信号通路中信号转导分子Smad4与平滑肌细胞的增殖关系。方法:实验于2003-08/10在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。①取体质量200g左右的健康雄性SD大鼠,常规胶原酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞。用体积分数为0.2和0.05(去血清培养)胎牛血清和的Dulbecco改良的Eagle培养基,37℃,体积分数0.05CO2进行培养,2.5g/L胰酶消化传代。血管平滑肌细胞经锥虫蓝染色,存活细胞数在98%以上。形态学上出现典型的“峰和谷”样生长状态,抗平滑肌特异α-肌动蛋白免疫组织化学染色阳性。取3~8代细胞用于实验。②观察项目:转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力的检测应用流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法凋亡检测试剂盒完成。smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因(p16、细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E)和细胞凋亡基因(半胱天冬酶2和半胱天冬酶3)表达变化应用免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测。结果:①转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法测定结果:smad4基因过表达调控人血管平滑肌细胞增殖能力下降DNA合成前期细胞明显增加[(72.33±4.35)%],正常培养细胞DNA合成前期细胞数相对较少[(45.88±1.58)%]。②smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测结果:转染后细胞凋亡能力增加;细胞周期抑制基因p16表达增加,细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E表达下降,凋亡相关基因半胱天冬酶2和半胱天冬酶3表达增加。结论:smad4基因对血管平滑肌细胞增殖能力的抑制作用主要通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的发生而实现。转化生长因子β信号传导通路对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用除了能够有效阻滞细胞周期的演进外,还能够诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 SMAD4基因 信号转导分子 脱氧核糖核酸末端转移介导的缺口末端标记法 人血管平滑肌细胞 体外培养 表达抑制 细胞增殖能力 细胞周期调控 转化生长因子β 流式细胞分析仪 血管平滑肌细胞增殖 免疫组织化学染色 免疫组化方法
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TUNEL法检测重组vMIP-Ⅱ对SIV感染模型淋巴细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 刘宏艳 孙晗笑 《四川医学》 CAS 2005年第3期246-248,共3页
目的 探讨TUNEL技术检测的vMIP -Ⅱ对SIV感染的猴淋巴组织中淋巴细胞凋亡的影响是否与其引起的感染淋巴组织中细胞的增殖有关。方法 取 3个剂量组的vMIP -Ⅱ注射治疗后的SIV感染模型的淋巴组织标本 ,用TUNEL法检测每个剂量组动物模型... 目的 探讨TUNEL技术检测的vMIP -Ⅱ对SIV感染的猴淋巴组织中淋巴细胞凋亡的影响是否与其引起的感染淋巴组织中细胞的增殖有关。方法 取 3个剂量组的vMIP -Ⅱ注射治疗后的SIV感染模型的淋巴组织标本 ,用TUNEL法检测每个剂量组动物模型淋巴细胞凋亡率。结果 vMIP -Ⅱ治疗的 3个剂量组与实验对照组相比、组间相比细胞凋亡率无显著性差异 (P >0 . 0 5 )。结论  3个剂量组的vMIP Ⅱ对SIV感染后的猴淋巴组织淋巴细胞凋亡无影响 ,但药物剂量与细胞凋亡率却呈负相关。 展开更多
关键词 末端脱氧核糖核酸转移介导的原位缺口末端标记 vMIP-Ⅱ SIV 凋亡
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