广西梧州地区泰国缺失型α地中海贫血的研究

目的:探讨广西梧州地区泰国缺失型α地中海贫血患者的血液表型特征、基因诊断和产前诊断情况。方法:采用免疫磁珠法提取广西梧州地区17 526例地中海贫血筛查阳性患者的基因组DNA,采用4种缺失型α地中海贫血引物(--^(SEA)、-α^(3.7)、-α^(4.2)、--^(THAI))进行常规检测,统计泰国缺失型(--^(THAI))α地中海贫血的发生率及基因型的分布特征,并比较不同性别基因型携带者的血液学指标,对高风险的孕妇产前诊断情况进行分析。结果:17 526例地中海贫血筛查阳性者中,共检出泰国缺失型α地中海贫血40例,发生率为0.228 2%。共检出3种基因型,依次为--^(THAI)/αα 37例(92.50%)、--^(THAI)/α^(WS)α 2例(5.00%)、--^(THAI)/-α^(3.7)α 1例(2.50%)。不同性别的--^(THAI)/αα,β^(N)/β^(N)基因型携带者的血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)水平低于不同性别的αα/αα,β^(N)/β^(N)基因型携带者,差异有统计学意义(P<0.05),而与不同性别的--^(SEA)/αα,β^(N)/β^(N)基因型携带者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。α同型双阳的13个家系共16次产前诊断(其中3对夫妇孕2次并行产前诊断2次)中检测到重型(--^(THAI)/--^(SEA))α地中海贫血胎儿共5例,表现为重型地中海贫血水肿胎儿,在产前诊断中心知情告知后均决定终止妊娠。结论:广西梧州地区泰国缺失型α地中海贫血在地中海贫血筛查阳性人群中有一定发生比例,基因型主要以--^(THAI)/αα为主,血液学表型为轻型,泰国缺失型α地中海贫血合并其他α地中海贫血的同型双阳夫妇可孕育以--^(THAI)/--^(SEA)基因型为主的重型α地中海贫血胎儿。因此,将泰国缺失型α地中海贫血作为临床常规检测项目进行基因诊断和产前诊断,可一定程度上减少或避免中重型α地中海贫血胎儿的出生。

异常血红蛋白Q⁃Thailand合并缺失型β-地中海贫血的实验室分析

目的对血红蛋白组分出现疑似异常血红蛋白Q⁃Thailand(HbQ⁃Thailand)且存在小细胞低色素性表现的2例患者进行基因型鉴定,并分析其血液学参数特征,为临床遗传咨询提供参考数据。方法2例患者样本进行血液学指标检测,用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap⁃PCR)及Sanger测序方法进行珠蛋白基因突变检测,并分析2例患者血液学表型特征和血红蛋白毛细管电泳结果。结果患者1为HbQ⁃Thailand杂合合并α-地贫⁃α4.2缺失杂合和β-地贫Taiwanese型缺失杂合,患者2为HbQ⁃Thailand杂合合并⁃α4.2缺失杂合和β-地贫Gγ+(Aγδβ)0型缺失杂合;2例患者均表现为小细胞低色素表型特征,并存在血红蛋白毛细管电泳Z7条带增高及出现Z1区异常带。结论当HbQ⁃Thailand合并β-地贫基因缺失时,血红蛋白组分毛细管电泳分析中HbQ⁃Thailand与HbF重叠,需要对其进行鉴别,或同时进行β-地贫基因缺失检测以防漏检。

6000对新婚夫妇非缺失型α-地中海贫血检测结果分析

目的报道6 000对新婚夫妇非缺失型α-地中海贫血(非缺失型型-α地贫)检测结果,了解其基因携带率及分布特征。方法组织受检对象抽取静脉血,以平均红细胞体积(MCV)小于79 fL为地中海贫血(下称地贫)表型阳性指标,对其中2 891例表型阳性和2 746例表型阴性样品进行非缺失型α-地贫基因分析。结果 6 000对筛查对象检出非缺失型α-地贫257例,非缺失型α-地贫基因携带率为2.14%(257/12 000)。临床常见3种非缺失型α-地贫依次为异常血红蛋白CS(HbCS)1.16%(139/12 000)、异常血红蛋白WS(HbWS)0.83%(100/12 000)、异常血红蛋白QS(HbQS)0.15%(18/12 000)。结论本地区为α-地贫高发区,应将a基因分析列入筛查项目,为降低中间型遗传性溶血性贫血病胎儿出生,制定干预方案提供科学依据。

多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测

为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α 地中海贫血中的临床应用 ,观察缺失型α 地中海贫血的基因分布频率 ,采用单管多重DNA扩增的方法 (M PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α 地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的 14 5例患者进行基因检测。扩增产物经 1.2 %琼脂糖凝胶电泳 ,出现 1.3及1.8kb条带者 ,提示为 SEA/αα ;1.6及 1.8kb条带者为 α4.2 /αα ;1.8及 2 .0kb条带者为 α3 .7/αα ;1.3及 1.6或 2 .0kb条带 ,提示为缺失型HbH病 ( SEA/ α4.2 或 SEA/ α3 .7)。结果表明 ,14 5例受检者中发现 10 0例 SEA/αα(6 8.9% ) ,15例 α3 .7/αα(10 .3% ) ,8例 α4.2 /αα(5 .5 2 % ) ,2例 α3 .7/ α4.2 (1.38% ) , α3 .7及 α4.2 纯合子各 1例 (0 .6 9% ) ;14例 SEA/ α3 .7(9 6 5 % ) ,2例 SEA/ α4.2 (1.38% ) ;另有 2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。结论 :运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的 α3 .7、 α4.2 、 SEA3种缺失型α 地中海贫血 ,这一技术对α 地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。

泰国缺失型α地中海贫血1的基因诊断和临床血液学表型分析

目的:探讨少见的泰国缺失型α地中海贫血1(泰国缺失型,--^(THAI)/αα)的血液学特征及其基因诊断的方法。方法:对32例泰国缺失型地中海贫血患者进行了回顾性分析,采用常规血液学检查、常见地中海贫血基因检测和泰国缺失型地中海贫血检测方法对泰国缺失型α地中海贫血1的血液学特征和基因诊断进行了分析,并与同期正常对照组、东南亚型缺失组(--^(SEΑ)/αα)进行了血液学特征比较。结果:在32例病例中,29例检出泰国缺失型α地中海贫血1杂合子,1例检出泰国缺失型α地中海贫血1和-α3.7缺失双重杂合子,2例检出泰国缺失型α地中海贫血1杂合子合并β地中海贫血突变(1例合并CD41-42突变杂合子,1例合并CD17(Α→T)突变杂合子)。泰国缺失型地中海贫血患者均有MCV、MCH水平降低;正常对照组、--^(SEΑ)/αα组间Hb、RBC、MCV、MCH比较差异有显著性,(P<0.05);正常对照组与--^(THAI)/αα组间RBC、MCV、MCH比较差异有显著性,(P<0.05);--^(SEΑ)/αα、--^(THAI)/αα组间MCHC比较差异有显著性,(P<0.05),其余各组指标差异无显著性。结论:泰国缺失型α地中海贫血1血液学除MCHC外类似于东南亚型地中海贫血,而在地中海贫血高发区存在一定比例的泰国缺失型α地中海贫血,因此在临床上对泰国缺失型α地中海贫血1应综合分析常规检测和泰国缺失型检测结果,以及患者的临床表现、血液学参数和超声结果后方可作出正确的诊断,避免由泰国缺失型引起α重型和中间型地中海贫血的婴儿出生。

海南汉族人群中东南亚缺失型α地中海贫血的研究

目的：研究海南省汉族人群的α地中海贫血的分子基础。方法：应用醋酸纤维素薄膜电泳筛查海南省汉族人群新生儿中的α地中海贫血携带者和应用聚合酶链反应（PCR）技术筛查α－地贫Hb Bart＇s携带者中的东南亚缺失型突变（－－SEA／，简称－－／）。结果：在953人中发现43例α地中海贫血的基因携带者，携带率为4．51％，其中23例为东南亚缺失型突变携带者，此型α地中海贫血突变的携带率为2．41％，占海南省汉族人群中α地中海贫血总数的53．49％。结论：海南省是α地中海贫血疾病的高发区，东南亚缺失型突变是海南省汉族人群中α地中海贫血的主要基因类型。

台湾型缺失β地中海贫血的基因诊断、产前诊断和植入前遗传学诊断

目的:对1个罕见缺失型β地中海贫血家系进行基因诊断、产前诊断和胚胎植入前遗传学诊断及分析。方法:采用血常规和血红蛋白电泳分析家系中所有成员外周血的血液学指标,采用聚合酶链反应结合反向点杂交(PCR-RDB)、多重连接探针扩增技术(MLPA)及裂隙聚合酶链反应(gap-PCR)方法进行β地中海贫血基因诊断,采集脐带血或者绒毛膜组织进行产前诊断。囊胚活检滋养外胚层细胞经过全基因组扩增后利用第二代测序技术单体型构建进行胚胎植入前遗传学诊断。结果:基因诊断检测出该家系的先证者为罕见的台湾型缺失β地中海贫血携带者。2次产前诊断结果显示,2个胎儿均为重型β地中海贫血患者。植入前遗传学诊断发现在11个胚胎中检测出6个可供移植胚胎。结论:台湾型缺失是罕见的β地中海贫血缺失类型,当复合β珠蛋白基因其他突变时可导致中重型β地中海贫血。胚胎植入前遗传学诊断是可供地中海贫血高风险家庭选择的一种优生方式。

多重荧光定量PCR快速检测缺失型α地中海贫血

目的采用多重荧光定量PCR技术快速检测缺失型α地中海贫血(以下简称α地贫),初步评价其诊断性能,并探讨该体系应用于临床基因诊断的可行性。方法采用多重荧光定量PCR体系检测300份,采用gap-PCR和β地中海贫血(以下简称β地贫)点突变反向点杂交法确定基因型的正常及地中海贫血标本,其中150例为α地贫标本,100例基因型为αα/αα的正常样本,50例为β地贫标本。结果多重荧光定量PCR在150例α地贫样本及100例正常样本的检测结果与gap-PCR符合率均达到100%,50例β地贫标本,有49例检测结果与gap-PCR一致,有1例gap-PCR报告为αα/αα的标本,多重荧光定量PCR报告为α1以及α2各仅有一个拷贝,经多重连接探针扩增技术证实为--THAI/αα。结论多重荧光定量PCR是一种快速、简便和可靠的缺失型α地中海贫血检测技术。

孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测

本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断。选择50例妊娠14-20周的贫血孕妇,采用gap-PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血。结果表明:在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失--SEA,2例为右侧缺失-α3.7。结论:采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种最常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义。

多重PCR检测缺失型α地中海贫血

目的 针对中国人常见的缺失型α地中海贫血建立一种快速、简便、可靠的多重聚合酶链反应 (PCR)基因诊断技术。方法 设计 4对引物 ,利用单管多重PCR方法进行扩增 ,同时检测 3种缺失型和正常的α2 珠蛋白基因。结果 成功检测出正常人及 3种缺失型的杂合子、双重杂合子 ;正常α2 基因的扩增片段为 180 0bp ,东南亚型缺失基因的扩增片段为 70 8bp ,右侧缺失基因的扩增片段为 2 0 2 2bp ,左侧缺失基因的扩增片段为 16 2 8bp , α3 .7/ SEA双重杂合子的扩增片段为 2 0 2 2bp和 70 8bp , α4.2 / SEA双重杂合子的扩增片段为 16 2 8bp和 70 8bp。结论 790例标本的基因检测结果分析表明 ,该法快速、准确 ,可用于常规临床标本的检测。

多重PCR方法检测缺失型和非缺失型α地中海贫血基因型

目的 :建立多重聚合酶链反应 (PCR)方法 ,对广西地区α地中海贫血 Hb H病进行基因诊断。方法 :外周血提取 DNA,应用多重 PCR、DNA测序等方法进行α地中海贫血基因型诊断。结果 :2 98例 Hb H病患者检出 1 5 4例缺失型 Hb H病 (-α3.7缺失型 Hb H病 1 0 4例 ,-α4 .2 缺失型 Hb H病 5 0例 ) ;非缺失型 Hb H病 1 4 4例包括 1 38例 Hb CS- H病 ,5例 Hb QS- H病及 1例罕见的东南亚缺失型 α地中海贫血 - 1复合 α2珠蛋白基因密码子 30缺失。基因型检测结果提示缺失型 Hb H病占 5 1 .6 8% ,非缺失型 Hb H病占 4 1 .32 %。而非缺失型 Hb H病中 ,以 Hb CS- H病为主 ,占非缺失型的 95 .83%。结论 :文中所建立的单管多重 PCR方法可同时检测 4种缺失型和 2种非缺失型 α地贫基因型 ,操作简便、快速 。

东南亚缺失型α-地中海贫血孕妇孕期血清铁蛋白水平变化及妊娠结局分析

目的分析东南亚缺失型α-地中海贫血孕妇孕期各阶段血清铁蛋白(SF)水平的变化情况及妊娠结局。方法选取2018年6月至2020年2月在广西壮族自治区人民医院产科门诊定期规范产检确诊为东南亚缺失型α-地中海贫血孕妇138例为观察组,同期规范产检无妊娠并发症的孕妇156例为对照组。比较两组孕妇早孕期(11~14周)、中孕期(24~28周)、晚孕期(28周至分娩)的SF和血红蛋白(Hb)水平,同时比较两组孕妇SF及Hb异常的患病率及妊娠结局。结果观察组孕妇早孕期SF水平为(81.38±51.91)μg/L,明显高于对照组的(69.74±38.25)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05);观察组孕妇中孕期和晚孕期的SF水平分别为(21.41±19.72)μg/L、(15.55±12.70)μg/L,与对照组的(20.74±21.27)μg/L、(15.27±12.18)μg/L比较差异均无统计学意义(P>0.05);观察组孕妇早、中、晚孕期的Hb水平分别为(111.67±8.14)g/L、(103.01±7.32)g/L、(105.50±9.11)g/L,明显低于对照组的(122.87±9.91)g/L、(111.92±8.88)g/L、(113.69±10.30)g/L,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组孕妇的妊娠期糖尿病(GDM)率和妊娠期高血压疾病(HDP)率分别为35.51%、5.80%,明显高于对照组的24.36%、1.28%;产后出血(PPH)率和剖宫产率分别为7.25%、34.06%,明显高于对照组的1.92%、22.44%,新生儿出生体质量为(3035.00±499.54)g,明显低于对照组的(3298.88±405.24)g,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组和对照组孕妇的早产率分别为5.07%、1.92%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论东南亚缺失型α-地中海贫血孕妇的孕早期SF明显偏高,孕期的Hb明显偏低,GDM率、HDP率、PPH率、剖宫产率明显升高,新生儿出生体质量明显偏低。

中山地区非缺失型α-地中海贫血基因在高危人群中的筛查结果分析

目的了解广东省中山地区育龄女性中常见非缺失型α-地中海贫血(α-地贫)的基因突变类型及构成比。方法应用反向斑点杂交(RDB)技术和高效液相色谱法(HPLC)对40000例受检对象进行非缺失型α-地贫基因分析。结果中山地区育龄妇女非缺失型α-地贫基因总携带率为0.41%(165/40000),其中异常血红蛋白QS(HbQS)111例,发生率为0.28%,构成比为67.27%;异常血红蛋白WS(HbWS)30例,发生率为0.08%,构成比为18.18%;异常血红蛋白CS(HbCS)24例,发生率为0.06%,构成比为14.55%。结论该研究首次阐述了广东省中山地区育龄妇女中常见非缺失型α-地贫的分子流行病学情况,为本地区开展地贫筛查工作,降低非缺失型血红蛋白H(HbH)病患儿出生率,制定干预方案提供了重要的科学依据。

多重聚合酶链反应对缺失型α地中海贫血的诊断

目的 探讨一种简便、快速可同时检测东南亚缺失 ( SEA)、右侧缺失 ( α3 .7)和左侧缺失 ( α4.2 )地中海贫血的多重聚合酶链反应 (PCR)技术。方法 采用单管四重聚合酶链反应 (PCR)技术。结果 正常等位基因的扩增产物为 1.8kb ,东南亚缺失基因 ( SEA/αα)的扩增产物为 1.8kb和 1.3kb。右侧缺失 ( α3 .7/αα)扩增产物为 2 .0kb和 1.8kb。左侧缺失 ( α4.2 /αα)扩增产物为 1.8kb和 1.6kb。根据出现的不同条带还可判断杂合子和纯合子及缺失型HbH病。结论 本法简便、快速 ,可作为常规方法用于临床样品的分子筛查及产前诊断。

香港型合并东南亚型缺失地中海贫血的筛查与鉴定

目的探讨常规试剂盒检测香港型合并东南亚型缺失地中海贫血(简称地贫)的情况。方法回顾性分析2012~2019年在该院进行地贫基因诊断的患者28435例,选出电泳出现三条带(-α3.7、正常对照、--SEA)的标本8例。地贫筛查采用血细胞分析和血红蛋白电泳技术。采用跨越断裂点PCR(Gap-PCR)检测α缺失型地贫基因,反向斑点杂交检测α非缺失型地贫基因(使用两个生产厂家的试剂盒)。用两轮巢式PCR检测HKαα地贫基因。结果常规地贫基因检测试剂盒(Gap-PCR)筛查出三条带的患者基因型均为HKαα/--SEA,占地贫基因诊断的0.03%。HKαα/--SEA的血液学表型主要体现在红细胞平均体积(MCV)和红细胞平均血红蛋白含量(MCH)下降,未见贫血,HbA2多数在参考范围内。结论常规地贫基因检测试剂盒(Gap-PCR)可以筛查出HKαα/--SEA,为遗传咨询和产前诊断提供指导依据。

多重聚合酶链反应在缺失型ɑ-地中海贫血诊断中的应用

目的:探讨多重聚合酶链式反应(PCR)在缺失型ɑ-地中海贫血患者基因类型快速诊断中的应用价值。方法:对应用多重PCR进行ɑ-地中海贫血检测后确诊为正常的30份样本及缺失型ɑ-地贫的78份样本进行基因类型及血液实验学参数的回顾性比较与统计分析。结果:在78例缺失型ɑ地中海贫血中,8例为左缺失静止型ɑ-地贫(-ɑ3.7/ɑɑ)、3例为右缺失静止型ɑ-地贫(-ɑ4.2/ɑɑ)、60例为东南亚型缺失ɑ-地贫(--sea/ɑɑ)、5例为左缺失血红蛋白(HbH)病(--sea/-ɑ3).7、2例为右缺失血红蛋白(HbH)病(--sea/-ɑ4.2),分别占缺失型ɑ-地贫的10.3%、3.8%、76.9%、6.4%、2.6%。静止型ɑ-地贫血液学参数MCV为(84.0±3.76)fl,红细胞脆性为(68.0±12.7)%;东南亚(标准)型ɑ-地贫MCV为(71.7±5.1)fl,红细胞脆性为(42.3±15.2)%;HBH病MCV为(61.9±5.0)fl,红细胞脆性为(25.0±6.5)%。结论:与传统的血液学参数筛查比较,多重PCR可以准确、简便、快速地检测常见的-ɑ3.7、-ɑ4.2、--sea3种缺失型ɑ-地贫,对静止型ɑ-地贫的检出是一种较为理想的方法。

利用NGS技术同时检测缺失和点突变型地中海贫血

目的建立一种跨越断裂点PCR(Gap-PCR)结合下一代测序技术的地中海贫血基因检测方法。方法对地中海贫血核酸国家参考品进行PCR扩增,PCR产物进行高通量测序。结果 32例国家参考品涉及的3种α突变型别,16种β突变型别,4种α缺失型别,2种β缺失型别全部检出,均与原型别一致。结论本研究通过建立基于Gap-PCR结合下一代测序技术检测地贫的方法进一步完善了遗传病基因诊断方法,对遗传病的携带人群筛查,优生优育咨询,防止出生缺陷等方面具有重要意义。

α缺失型地中海贫血患者红细胞参数分析

目的探讨不同α缺失型地中海贫血患者红细胞各参数特点。方法应用PCR-膜反向点杂交技术(reversed dot blot,RDB)、跨越断裂点PCR技术(Gap-PCR)检测α、β地中海贫血基因,全自动血细胞分析仪检测红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW-CV),运用SPSS19.0系统统计分析试验组与健康对照组以及--^(SEA)/、-α^(4.2)/、-α^(3.7)/、-α^(3.7)/--^(SEA)&-α^(4.2)/--^(SEA)各组之间红细胞各参数是否有统计学意义。结果⑴与健康对照组相比,α缺失型地中海贫血组Hb、MCV、MCH、MCHC明显减低,RDW-CV明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);⑵以α^(4.2)/、-α^(3.7)/两组相比,--^(SEA)/组MCV、MCH、MCHC三指标明显下降,且-α^(3.7)/--^(SEA)&-α^(4.2)/--^(SEA)组结果下降更为明显,均具有统计学意义(P<0.01);RDW-CV各组间无统计学意义。结论α缺失型地中海贫血患者大部分红细胞指标可出现明显变化,且这种变化与缺失片段长度密切相关。