甘蔗UGPase5'侧翼序列克隆及缺失表达分析

以甘蔗(FN95;-1702)为材料,通过接头连接PCR方法克隆该基因不同长度5'侧翼序列。将不同长度的5'侧翼序列连同UGPase基因的外显子片段定向插入到GUS基因上游,在保证其后GUS编码框不发生偏移的情况下,插入的UGPase外显子融合GUS表达成为新的报告基因。根据此策略,构建了一系列表达结构为5'Flanking Sequence-UGPase Exon-GUS-Nos polyA的5'侧翼序列缺失表达载体,进行启动子活性分析。注射法转染烟草叶片组织检测GUS瞬时表达,分析结果表明,所克隆到的UGPase基因5'端侧翼序列不具有启动子活性。

欧文氏杆菌CXJZ95-198甘露聚糖酶基因N端缺失表达

用PCR的方法从甘露聚糖酶高产菌欧文氏杆菌CXJZ95-198中克隆到甘露聚糖酶基因manA全长以及其N端缺失81、111、141 bp的片段,连接到pET28a载体再转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用透明圈法鉴定其酶活性。结果表明,删除了manA N端111 bp的翻译产物依然具有酶活性,删除了N端141 bp的翻译产物无酶活性,manA N端111～141 bp可能具有重要意义。

抑癌基因DPC4蛋白在大肠癌组织中缺失表达及临床意义

目的观察抑癌基因DPC4蛋白与大肠癌生物学行为的关系,探讨DPC4基因检测能否成为早癌筛检的敏感方法。方法采用免疫组织化学SP法,检测30例正常大肠组织、100例大肠癌中的DPC4基因表达情况。结果 100例大肠癌组织中DPC4阳性率为32%(32/100),正常大肠组织DPC4阳性率100%(30/30),大肠癌的DPC4表达与正常大肠组织DPC4表达的差异有统计学意义(P<0.01)。在大肠癌组织中,DPC4的阳性表达与Dukes’分期、分化程度有关(P<0.05),与年龄、性别无关(P>0.05)。结论检测DPC4基因突变,有助于对肿瘤病因学、发病机制及早期诊断的研究。

错配修复蛋白表达缺失在子宫内膜癌中的临床病理意义

目的:探究错配修复(MMR)蛋白表达缺失在子宫内膜癌(EC)中的临床病理意义。方法:选取惠州市第一人民医院2019年3月至2022年12月收集的EC患者术后石蜡包埋子宫内膜组织标本50例,采用免疫组织化学检测法检测MMR蛋白表达,包含MLH1、MSH2、MSH6及PMS2,观察MMR蛋白表达缺失率,对不同年龄及EC病理特征的MMR蛋白表达缺失情况进行比较。结果:(1)50例EC患者MMR蛋白表达缺失发生率为36.00%。MMR蛋白MLH1、MSH2、PMS2、MSH6表达缺失率分别为22.00%、6.00%、30.00%、6.00%,其中单项缺失4例(8.00%),两项表达缺失14例(18.00%)。(2)≤50岁EC患者MMR蛋白缺失表达率(56.00%)高于>50岁EC患者(16.00%),差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)不同细胞分化程度、肌层浸润程度及淋巴结转移情况患者MMR蛋白表达缺失情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:MMR蛋白在EC中表达缺失率较高,以PMS2表达缺失为主,且MMR蛋白表达缺失率在≤50岁EC患者中更高,故需重视对年轻女性EC早期筛查。

甘蔗SPSⅢ基因启动子5’侧翼缺失的GUS表达载体构建

蔗糖磷酸合成酶是调节植物蔗糖合成的关键酶之一。本研究根据该段序列上预测的顺式作用元件将SPSⅢ5'侧翼序列不同长度的片段与GUS基因融合,成功构建了3个缺失表达载体,为进一步的甘蔗SPSⅢ启动子活性区域鉴定提供基础。

犬2型腺病毒E3区缺失性表达载体的构建及外源基因表达

为构建可用于同源重组或体外重组的犬腺病毒 (canim e adenovirus,CAV) E3区缺失性表达载体 ,在克隆的 E3区两末端设计并合成了 2对突变引物 ,在引物中分别引入 1个 Bgl 酶切位点 ,以 p BE3质粒为模板 ,经 2次点突变后 ,得到含有 2个 Bgl 位点的重组质粒 p BE3M。该质粒经 Bgl 酶切后自连得到 E3区缺失的质粒 p BE3Δ。在 p BE3Δ质粒的 Bgl 位点加入接头后 ,产生含多个酶切位点的质粒 p BE3L,经相应的酶切鉴定 ,证明突变、缺失和接头连接正确后 ,利用 p BE3L 分别构建了带有和不带有外源性启动子的绿色荧光蛋白基因的重组表达质粒 ,并分别进行转染以检测其表达。结果显示 ,p BE3L CGFP质粒在转染 DK细胞后 ,于 36 h即可观察到荧光 ,72～ 96 h无明显差别 ,传 3代后仍可见表达荧光的细胞 ;而 p BE3L GFP质粒转染 DK细胞后经检测无表达。结果表明 ,构建的 E3区缺失性载体不能利用 E3区自身的启动子进行目的基因的表达 ,外源性启动子的加入是必要的。

LRRC4基因在脑胶质瘤细胞系中表达缺失

目的:研究LRRC4基因在恶性脑胶质瘤细胞系中的表达情况。方法:采用RT-PCR结合Northern-blot检测LRRC4基因在U251,U87,SF126,SF767,BT325及M17等6种恶性脑胶质瘤细胞系中的表达;并应用聚合酶链反应结合DNA直接测序法检测LRRC4基因在恶性胶质瘤细胞系中的突变情况;进一步结合生物信息学分析研究LRRC4基因在U251细胞系中表达缺失的原因。结果:LRRC4基因在6种恶性胶质瘤细胞系中均表达缺失。通过对胶质瘤细胞系基因组DNA中LRRC4的ORF序列的PCR扩增和测序分析,发现SF126,SF767,M17细胞中,ORF序列第279位氨基酸的第3个密码子存在同义点突变(3/5),而U251和U87细胞基因组DNA中发生了LRRC4基因的缺失突变(2/5)。结论:LRRC4基因在恶性胶质瘤细胞中表达缺失,染色体7q32-ter的纯合性缺失是LRRC4基因在U251细胞中表达缺失的原因。

复发性弥漫性大B细胞淋巴瘤经美罗华联合化疗治疗后CD20表达缺失1例报道并文献复习

目的探讨CD20阳性淋巴瘤经美罗华治疗后CD20表达缺失的特性。方法报道1例弥漫性大B细胞淋巴瘤患者经美罗华联合化疗后CD20表达缺失病理,并进行相关文献复习。结果1例弥漫性大B细胞淋巴瘤确诊后,CD20阳性,进行3个疗程美罗华联合化疗,颈部肿大淋巴结不断缩小,第4个疗程开始时,淋巴结再次肿大,经再次组织活检免疫标记,CD20转为阴性。结论经美罗华治疗后复发或不敏感的病例建议重新取组织活检进行病理诊断、免疫标记,必要时进行分子遗传学检测,以免误诊,且对复发病因的寻找和调整药物进一步治疗有积极指导作用。

胃癌MGMT基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达缺失

目的:探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子甲基化状况在胃癌发生、发展中的作用. 方法:用甲基特异性聚合酶扩增链式反应检测20例正常胃黏膜组织、38例胃癌组织及癌旁正常组织DNA中MGMT 基因启动子的甲基化状况,用免疫组化方法检测MGMT 蛋白的表达隋况. 结果:19.1%(9/47)的肿瘤组织和10.6%(5/47)的癌旁正常组织存在MGMT基因启动子甲基化,正常胃黏膜组织均不存在甲基化.免疫组化发现有21.3%(10/47)的肿瘤组织MGMT蛋白失表达,其中7例(70.0%)存在启动子甲基化. 胃癌中MGMT基因启动子高甲基化与MGMT蛋白表达缺失存在显著联系(P<0.001). 结论:胃癌组织中存在一定程度的MGMT基因启动子高甲基化和MGMT蛋白表达缺失.胃癌发生过程中MGMT基因高甲基化可导致MGMT蛋白表达缺失,可能是胃癌发生的重要途径之一.

人肺癌细胞中TSLC1基因表达缺失与DNA甲基化的相关性研究

背景与目的TSLC1在多种肿瘤中表达下调或失活,其表达下调与DNA高甲基化有很大关系。本研究旨在探索TSLC1在肺癌细胞中的表达缺失与其启动子区DNA甲基化的关系。方法采用RT-PCR和Real-time PCR方法检测TSLC1在正常肺组织和3种肺癌细胞系(A549、NCI-H446和Calu-3)中的表达谱;运用亚硫酸氢盐修饰后测序(bisulfite sequencing)方法检测上述正常肺组织和肺癌细胞中TSLC1启动子区的甲基化状态;应用甲基化转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理上述细胞后,采用Real-time PCR方法检测处理前后TSLC1的表达变化。结果TSLC1在正常肺组织和A549细胞中表达,其启动子区DNA未发生甲基化;而在NCI-H446和Calu-3细胞中表达缺失,其启动子区DNA发生高甲基化,并且5-Aza-dC处理NCI-H446和Calu-3细胞后可促进TSLC1的表达。结论TSLC1在肺癌细胞中的表达缺失是由其启动子区的DNA高甲基化引起。

hMSH2蛋白表达缺失在筛选遗传性非息肉病性大肠癌中的意义

目的 探讨hMSH2蛋白表达缺失在筛选遗传性非息肉病性大肠癌中的作用及其意义。方法 对收集的166例石蜡包埋的疑似遗传性非息肉病性大肠癌组织进行hMSH2蛋白免疫组化染色。结果 hMSH2蛋白表达阴性 ( 0分 ) 3 5例 ,占 2 1 1% ,阳性 ( 1～ 4分 ) 12 6例 ,占 75 9%。在右半、左半结肠和直肠表达缺失率分别为 3 3 3 % ( 15 / 45 ) ,15 4% ( 6/ 3 9)和 18 2 % ( 14 / 77)。右半结肠癌的表达缺失明显高于左半结肠癌 (P <0 0 5 )和直肠癌 (P <0 0 5 )。结论 hMSH2蛋白免疫组化染色做为一个简单易行的方法在今后检测和确定遗传性非息肉病性大肠癌中将发挥重要作用。

当代中国公民利益表达缺失的现状及路径创新

公民利益表达的充分与否直接关系到当代中国社会各阶层之间利益关系有效协调的实现,但目前公民利益表达诉求方面的缺失、不畅已经成为影响中国政治社会稳定的突出问题和薄弱环节,极大地阻碍了和谐社会的成功构建。应通过提高认识,转变政府职能,搭建制度平台,培育扶持民间组织等路径加快自由、平等的利益表达渠道与机制的建立,以更好地维护最广大人民群众的利益。

胃癌Fhit蛋白表达缺失的临床病理意义

目的:探讨76例胃癌Fhit蛋白表达与临床病理的关系. 方法:采用免疫组化方法,检测76例胃癌、58例紧邻癌旁的异常增生和10例正常胃黏膜的Fhit表达并分析其与组织学分级、临床分期以及预后的关系. 结果:癌组织Fhit表达缺失为48/76例(63.2%),紧邻癌旁的异常增生黏膜缺失为36/58例(62.1%),而正常胃黏膜为0/10,相差有非常显著性(P=0.000)Fhit蛋白缺失癌在癌组织学分级中的分布为Ⅰ-Ⅱ级癌35.7%(10/28),Ⅲ级癌79.2%(38/48),相差有非常显著性(P=0.000).Fhit蛋白缺失癌在临床分期中的分布为Ⅰ-Ⅱ期癌为43.8%(14/32), Ⅲ-Ⅳ期癌77.3%(34/44),相差有非常显著性(P=0.004).Fhit 蛋白缺失癌在转移状况组的分布为转移癌74.1%(40/54), 未转移癌为36.4%(8/22),相差有非常显著性(P=0.003). 随访资料显示Fhit蛋白缺失癌的中位生存时间为33 mo,而Fhit蛋白表达癌者为71 mo,相差有非常显著性(Log rank=20.78:P=0.000). 结论:Fhit蛋白为一种重要的抑癌蛋白,其表达缺失状况可能与胃癌的发生、侵犯、转移以及患者的预后相关.

肺鳞癌组织中FHIT基因表达缺失与临床病理生理的关系

目的 研究肺鳞癌组织中脆性组胺酸三联体(FHIT)基因的表达及其与临床病理生理的关系。方法 应用免疫组织化学的方法检测33例肺鳞癌组织中FHIT基因的表达 ,并分析这种表达与年龄、性别、吸烟、肿瘤分期和分化程度的关系。结论 FHIT表达缺失是肺鳞癌的常见事件 ,而且与吸烟明显相关。通过检测FHIT蛋白可能有助于肺癌的诊断。

结直肠癌患者RASSF1A基因启动子区甲基化及表达缺失的研究

目的检测结直肠癌组织中RASSFIA基因启动子区CpG岛甲基化状况,分析其mRNA表达缺失情况,探讨其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应检测31份结直肠癌组织、29份正常肠黏膜组织的RASSF1A基因启动子区甲基化程度,统计分析该基因甲基化程度与结直肠癌临床病理特征的关系;以RT-PCR检测各组中RASSF1A mRNA表达情况,统计分析该基因表达水平与结直肠癌临床病理特征的关系。结果结直肠癌组及对照组中RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化发生率分别为67.7%和0.0%,两组间差异有统计学意义(P<0.01);RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化情况与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度、分期及有无淋巴结转移均无关(P均>0.05);RASSF1AmRNA在31份结直肠癌组织中有6份表达缺失(19.35%),25份表达,在29份对照组织中全部表达,两组间表达水平差异有统计学意义(P<0.01);RASSF1AmRNA的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤的分化程度、分期及有无淋巴结转移均无关(P均>0.05)。结论结直肠癌组织中RASSF1A基因启动子区CpG岛的高甲基化与结直肠癌发生关系密切,可能是结直肠癌早期发生中的一个重要的分子机制,但与患者的年龄、性别及疾病的进展无关。

汉语负迁移时英语表达的缺失和重叠现象分析

在英语学习中,受汉语思维方式和表达习惯的影响,中国学生常常将汉语的语言结构迁移到英 语表达中来,影响英语语言的学习和运用。这种负迁移现象表现在诸多方面,其中,汉语影响下英 语表达的缺失和重叠是两个重要的体现。缺失指的是受汉语影响英语中的标志词、主语、系动词be 及汉语隐含意义等的表达缺失,重叠指的是受汉语影响英语中话语、关联结构及其他语义词义概念 的重复表达。

外源性甲胎蛋白对甲胎蛋白表达缺失HepG2细胞系增殖与凋亡的影响

目的:观察不同浓度外源性甲胎蛋白(AFP)对AFPsiRNA-HepG2细胞系(AFP表达缺失HepG2细胞系)的增殖与凋亡的影响。方法:体外培养AFPsiRNA-HepG2细胞,将细胞分为对照组,100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml AFP 6组,MTT法检测细胞增殖;Annexin V-APC/7-AAD染色、流式细胞术检测细胞凋亡百分比。结果:MTT结果提示,与阴性对照组比较,100μg/ml AFP组显著抑制细胞增殖(P<0.01),低于100μg/mlAFP组促进细胞增殖(P<0.05);流式细胞术结果提示,与阴性对照组比较,100μg/ml AFP组显著诱导细胞凋亡(P<0.01),低于100μg/ml AFP干预组对细胞凋亡无影响(P>0.05)。结论:低于100μg/ml AFP可促进细胞增殖,高于100μg/ml AFP可显著抑制细胞增殖,并诱导其发生凋亡。

错配修复蛋白表达缺失子宫内膜癌的临床病理特征分析

目的:分析并总结错配修复(MMR)蛋白表达缺失子宫内膜癌(EC)的临床病理特征。方法:选取2018年1月至2020年6月在江门市中心医院治疗的105例EC患者为研究对象。收集其年龄、体重、身高、病史、肿瘤个人史及家族史、肿瘤病理组织学分型、肿瘤是否累及或发生于子宫体下段、肌层浸润深度、有无脉管浸润、有无淋巴结转移、肿瘤内部及周围淋巴细胞浸润情况、免疫组化表达情况等资料,并根据MMR蛋白的表达情况,结合临床资料分析MMR蛋白表达缺失EC的临床病理特征。结果:在105例患者中,MMR蛋白表达缺失患者共有27例(占25.71%),MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失率分别为14.29%、5.71%、9.52%、17.14%,其中PMS2表达缺失患者最多;MLH1、PMS2同时表达缺失率为13.33%,MSH2、MSH6同时表达缺失率为5.71%;MLH1、MSH2、PMS2三者同时表达缺失率为0.95%;在27例MMR蛋白表达缺失患者中,年龄>50岁患者的MMR蛋白表达缺失率低于年龄≤50岁患者(P<0.05);体质指数(BMI)<25患者的MMR蛋白表达缺失率高于BMI≥25患者(P<0.05);肿瘤累及或发生于子宫体下段患者的MMR蛋白表达缺失率高于肿瘤未累及或发生于子宫体下段患者(P<0.05);肿瘤淋巴细胞浸润患者的MMR蛋白表达缺失率高于无淋巴细胞浸润患者(P<0.05);有无高血压史、有无糖尿病史、不同病理组织学分型、不同肌层浸润深度、有无肿瘤家族史和肿瘤个人史患者的MMR蛋白表达缺失率比较无统计学差异(P>0.05)。结论:EC患者MMR蛋白表达缺失更常见于非肥胖女性、肿瘤累及或发生于子宫体下段者、50岁以下年龄者以及肿瘤淋巴细胞浸润者。

抑癌基因DPC4蛋白在大肠癌组织中缺失表达及临床意义研究

目的探讨抑癌基因DPC4（deletedinpancreaticcancerlocus4）蛋白在大肠癌组织中的缺失表达特征及临床意义，阐明DPC4蛋白缺失表达与大肠癌发生的关系。方法采用免疫组化（SP法）检测50例大肠癌组织、癌旁组织及正常大肠组织中DPC4的表达，以20例正常大肠组织作为对照分析。结果50例大肠癌组织中DPC4阳性率为32％，癌旁组织中DPC4阳性率为34％，正常大肠组织DPC4阳性率100％，癌和癌旁的DPC4表达与正常大肠组织DPC4表达的差异有统计学意义（P〈0．01）。大肠癌组织中DPC4蛋白表达随着病理组织学分化程度下降而降低，淋巴结转移组DPC4的阳性表达低于淋巴结无转移组，但差异无统计学意义。结论DPC4蛋白表达缺失是大肠癌的发生发展的重要因素之一。

鼻咽癌中p16蛋白表达缺失与EB病毒感染的关系

目的 探讨鼻咽癌组织中p16蛋白表达缺失情况及与EB病毒在鼻咽癌发生中的关系。方法 用免疫组化方法检测 p16蛋白表达 ,EBER - 1核酸原位杂交法检测EB病毒感染。 结果 42例鼻咽癌组织中 ,34例 p16蛋白表达缺失 (81% ) ,2 8例EBER - 1阳性 (6 7% )。p16蛋白表达缺失与EBER - 1阳性无明显关系 (P >0 .0 5 )。 结论 p16基因功能失活与鼻咽癌发生关系密切 ,但与EB病毒感染关系不明显。