Tenascin-C分子中FN6-8片段蛋白对培养的脊髓缺气损伤神经元的影响

目的 研究 FN6 - 8片段能否促进损伤神经元的突起生长。 方法 从包含有 TN- C分子中 FN6 -8DNA序列的质粒中表达并纯化 GST- FN6 - 8融合蛋白 ,以 0 .0 5 mg/ L 的浓度加入培养的胚胎小鼠脊髓神经元的培养液中 ,对照组加入等量 GST,然后液体石蜡封闭液面造成神经元缺气损伤 ,3d后做 MTT实验 ,测神经元活性并图像分析神经元突起的长度。 结果 FN6 - 8组的神经元活性和神经元突起长度明显高于对照组。 结论 TN- C促进神经元活性及突起生长的功能可能由其 FN6 - 8片段介导。

脊髓提取液对体外培养的神经细胞在缺气损伤环境中的作用

本实验目的在于研究小鼠胚胎脊髓提取液对损伤环境中的体外培养脊髓和背根节神经细胞的保护作用。神经细胞取自１２～１４ ｄ 胚胎小鼠脊髓和背根节，接种于２４ 孔板中。培养第５ ｄ 时在培养板中加入２５０ ｍ ｇ／Ｌ 脊髓提取液，对照组不加；培养第１０ ｄ 在液体表面加入液体石蜡造成缺气损伤。继续培养４、８、１２、２４ ｈ，然后去除液体石蜡，观察细胞形态和Ｋ＋ 、ＬＤＨ 的变化，用Ｍ ＴＴ 方法检测细胞活性，通过ＮＳＥ免疫组化反应显示神经元存活状况。结果表明：损伤神经元出现细胞肿胀、失去折光性、核偏位以及ＮＳＥ 染色变弱；而在培养液中加入脊髓提取液，可以减轻这种“缺气”造成的损伤，提高体外培养神经元在损伤环境中的生存率，保持细胞的活性和细胞膜的通透性。

GDNF对缺气损伤的体外培养新生大鼠背根节神经元的作用

运用体外缺气损伤的细胞模型 ,研究GDNF对损伤的新生大鼠背根节神经元( DRG)是否有保护作用。采用原代培养的方法 ,用 N1无血清培养基分离培养 DRG神经元 2 4h后 ,加入含 2 0 μg/m L GDNF的无血清培养液 ,然后液体石蜡封闭培养液 ,继续培养 4,8,1 2 ,2 4h,分别做 MTT实验检测细胞活性 OD值 ,台盼蓝染色记数 ,细胞总蛋白测定以及形态学观察突起生长状况。结果表明 :1封闭 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞存活数同对照组相比有显著升高 ( * * P <0 .0 1 ) ,其余各时间点均无显著性差异。缺气损伤 8h和 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞总蛋白较对照组显著升高 ( * * P <0 .0 1 ,* P <0 .0 5) ,其余各时间点均无显著性差异 ;2各时间点 DRG细胞活性及突起长度的变化差异均不显著。缺气损伤一定时间后 ,GDNF对新生大鼠 DRG细胞的存活数及细胞总蛋白有明显的保护作用 ,而对细胞活性及突起的生长则没有明显的促进作用。