丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果:缺氧/缺糖损伤2h,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著。而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P<0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多。丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。

麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用

目的:研究麝香酮对神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用。方法:培养SH-SY5Y神经细胞。采用含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧/缺糖和再给氧损伤;用苔盼蓝染色计数法测定细胞死亡率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率,用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和细胞凋亡率,用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;并评价药效。结果:与正常对照组比较,缺氧/缺糖和再给氧损伤模型组细胞存活率显著下降〔(100.0±4.4)%比(25.6±3.7)%〕,细胞死亡率〔(5.0±2.2)%比(71.2±9.2)%〕、坏死率〔(2.6±1.2)%比(46.8±10.4)%〕、凋亡率〔(3.1±0.8)%比(16.0±4.9)%〕、LDH漏出率〔(20.1±5.8)%比(66.4±7.6)%〕均显著升高(P均<0.01)。麝香酮各终浓度组的细胞存活率显著提高〔(42.7±1.2)%^(47.8±1.7)%,P均<0.01〕,细胞死亡率〔(22.7±5.2)%^(36.1±5.9)%〕、坏死率〔(24.3±8.3)%^(28.9±8.7)%〕、凋亡率〔(7.8±3.1)%^(10.4±4.9)%〕、LDH漏出率〔(37.6±4.1)%^(40.6±2.4)%〕均显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤具有显著的保护作用,提示麝香酮可能应用于中风病急性期的治疗。

参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞损伤的影响

目的 探讨参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞凋亡及胞浆内游离钙的影响,阐明参麦注射液治疗缺血性中风急性期的脑保护作用机制。方法 用孕 17～18 d 的 SD 胎鼠大脑皮层作原代神经细胞培养,制作缺氧/缺糖/复氧致神经细胞损伤模型,采用 AnnexinV/PI 双染色法以流式细胞仪定量分析神经细胞凋亡率;FIuo-3 负载,流式细胞仪定量分析胞浆内游离钙的变化。结果 参麦注射液能降低缺氧/缺糖/复氧原代培养神经细胞的凋亡率和胞浆内游离钙浓度。结论 参麦注射液治疗急性缺血性中风的疗效机制与提高神经细胞耐缺血缺氧能力,抑制细胞内钙超载,从而减轻凋亡有关。

阿司匹林对缺氧/缺糖大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响

目的观察大鼠皮质神经元细胞在缺氧/缺糖(OGD)时线粒体膜电位(MMP)的变化及阿司匹林的保护作用。方法取体外培养7d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧/缺糖模型组、缺氧/缺糖加阿司匹林组。缺氧/缺糖2h后在常氧下继续培养24h。流式细胞术检测不同时间段神经元细胞线粒体膜电位。结果缺氧/缺糖损伤2h,缺氧/缺糖组线粒体膜电位水平较正常对照组显著降低(P<0.01)。缺氧/缺糖加阿司匹林组皮质神经元细胞在缺氧2h及再复氧24h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧/缺糖模型组(P<0.01)。结论阿司匹林可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。

SYK调控缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元凋亡及其机制

目的探讨抑制脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)对缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元的凋亡的影响及相关机制。方法分离培养10只SD怀孕大鼠(190~230 g,胎龄16 d)胎鼠的大脑皮质神经元细胞并用MAP2免疫荧光法进行鉴定。建立缺氧/缺糖损伤的体外模型,caspase-3荧光检测试剂盒检测caspase-3活性,Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡,q RT-PCR检测SYK和凋亡相关的原癌基因Fra-1 m RNA的表达,Western Blot检测SYK、Bcl-2和Fra-1蛋白的表达。Control组:无转染处理的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK siRNA组:转染SYK siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK-Fra-1 siRNA组:同时转染SYK siRNA和Fra-1 siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;non-specific siRNA组:转染non-specific siRNA的氧/缺糖损伤的神经元。结果 MAP2免疫荧光鉴定为神经元细胞。缺氧/缺糖损伤诱导神经元SYK表达(P<0.01),RNA干扰抑制SYK表达后caspase-3活性(P<0.05)和细胞凋亡(P<0.01)均显著降低,但是Fra-1 m RNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达量明显上升。用RNA干扰技术同时抑制SYK和Fra-1后,caspase-3活性(P<0.01)显著上升但Bcl-2蛋白表达(P<0.01)显著降低。结论 Fra-1介导了SYK对缺氧/缺糖损伤诱导的神经元凋亡的调节,为脑卒中所致的神经元缺血性损伤的治疗提供了新的靶点。

苯海索对培养大鼠神经细胞缺氧/缺糖性损伤的保护作用

目的 观察苯海索对缺血 /缺氧培养所致大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用。方法 体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞 ,以缺氧加缺糖培养建立神经细胞“缺血”性损伤模型 ,观察苯海索对培养神经细胞“缺血”性损伤的保护作用。结果 苯海索能显著减少细胞死亡 ,降低乳酸脱氢酶 (LDH)漏出量、一氧化氮 (NO)含量及丙二醛 (MDA)生成 ,提高超氧化物歧化酶(SOD)活性。结论 苯海索对培养神经细胞“缺血”性损伤具有显著的保护作用 ,其机制可能与苯海索降低NO含量、抗过氧化作用有关。

丹参素对缺氧/缺糖损伤神经细胞线粒体的保护作用

目的 观察丹参素对SH SY5Y细胞缺氧 缺糖损伤时胞浆内 [Ca2 + ]i、细胞凋亡率、细胞活性和线粒体膜电位的变化 ,探讨其对神经细胞线粒体的保护作用及其可能的机理。方法 应用细胞培养、四唑盐比色实验 (MTT)检测细胞活力 ,流式细胞术检测细胞内 [Ca2 + ]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。结果 SH SY5Y细胞缺氧 缺糖损伤 2h时 ,细胞内 [Ca2 + ]i明显增加 ,为 8 4 6nmol L(P <0 0 1) ,细胞凋亡率明显增高 ,为 18 5 9% (P <0 0 1) ,细胞内 [Ca2 + ]i的浓度 4h时达到高峰 ,为 9 89nmol L(P <0 0 1) ,而后呈下降趋势 ,细胞凋亡率随缺氧 缺糖损伤时间的延长而明显增高12h时达到 4 5 91% ,细胞经缺氧 缺糖处理 2h后 ,线粒体膜电位和细胞活性分别降低 2 9 17% (P<0 0 1)、38 80 % (P <0 0 1) ,随着缺氧 缺糖时间的延长线粒体膜电位和细胞活性进一步下降 ,12h时分别降低 5 6 72 % (P <0 0 1)、6 3 5 8% (P <0 0 1) ,丹参素能显著降低细胞内 [Ca2 + ]i,抑制细胞凋亡的发生 ,提高细胞活性和线粒体膜电位 ,与缺氧 缺糖组相比均有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 丹参素可抑制缺氧 缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低 ,从而具有稳定线粒体膜电位的作用 ,抑制细胞凋亡的发生 。

三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的:观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用。方法:建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤。流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量。结果:神经细胞缺氧/缺糖5 h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加。三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加。结论:三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关。

亚低温对缺氧缺糖星形胶质细胞活力的影响

目的探讨亚低温对缺氧星形胶质细胞的保护作用。方法原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,设亚低温组(34℃)和常温组(37℃),同时于缺氧缺糖条件下培养,在相应时间点观察细胞形态,并用台盼兰排染法检测细胞存活率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力。结果亚低温组各项指标均优于常温组(P<0.01)。结论亚低温对缺氧/缺糖星形胶质细胞具有保护作用。

淫羊藿苷抑制内质网应激改善缺氧/缺糖诱导H9C2细胞损伤的研究

目的观察淫羊藿苷(icariin, ICA)对H9C2心肌细胞缺氧/缺糖(OGD)诱导细胞损伤的作用及其与内质网应激的关系。方法将培养的H9C2细胞随机分为6组:正常培养对照组、缺氧/缺糖模型组(OGD组)、ICA(10μmol/L)+OGD组、ICA(20μmol/L)+OGD组、ICA(40μmol/L)+OGD组、4-苯基丁酸(4-PBA 5mmol/L)+OGD组。正常培养对照组采用正常培养基培养至实验结束,OGD组采用缺糖培养基并在缺氧培养箱中培养6h, ICA(10,20,40μmol/L)+OGD组和4-PBA+OGD组分别按组于缺氧/缺糖前1h给予相应浓度的药物培养再行缺氧/缺糖过程。实验后MTT法检测细胞存活率;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用DCFH-DA测定细胞中ROS产生量;Western blot测定GRP78和CHOP的表达。结果与正常培养组比较,OGD组细胞存活率显著下降(P<0.01),LDH漏出量和ROS产生量增加,GRP78和CHOP表达上调(P<0.01);给予不同浓度ICA和4-PBA干预后,ICA不同剂量组细胞存活率较OGD组明显升高,LDH和ROS产生明显降低,GRP78和CHOP蛋白表达较OGD组显著下降(P<0.05),与4-PBA组结果相似。结论 OGD可诱导内质网应激,引起细胞存活率降低;而淫羊藿苷可通过减少ROS,抑制内质网应激发挥保护作用,减少缺氧/缺糖诱导的细胞损伤。

管花肉苁蓉醇提取物对缺氧/缺糖再灌注所致神经细胞损伤的保护作用及机制研究

探究管花肉苁蓉醇提取物(CTEE)对缺氧/缺糖再灌注(OGD/R)所致的PC12细胞损伤的抑制作用及潜在机制。实验以OGD/R诱导PC12细胞作为损伤模型,通过MTT法检测细胞存活率、通过AO/EB与Hoechst 33258染色法考察细胞凋亡、通过JC-1染色法考察线粒体膜电位变化、通过MitoSOX染色法考察线粒体氧化应激反应,通过Western blot法考察凋亡相关蛋白(PARP,cleaved PARP,caspase-3,cleavd caspase-3,Bax,Bcl-2)的表达,研究了CTEE(12. 5,25,50 mg·L-1)对神经细胞的保护作用。结果显示,CTEE可以有效保护OGD/R诱导的PC12细胞损伤,并提高PC12细胞存活率,AO/EB与Hoechst 33258染色法显示CTEE可以有效抑制细胞凋亡。此外,JC-1与MitoSOX染色法显示CTEE可显著降低细胞中线粒体的氧化应激及线粒体膜电位的失调,且呈剂量依赖性。同时,CTEE可明显抑制线粒体凋亡信号通路中关键蛋白caspase-3和PARP的激活,且明显抑制Bax的升高和Bcl-2的下调。以上结果表明,管花肉苁蓉醇提取物对OGD/R所致的PC12细胞损伤具有较好的保护作用,其潜在机制可能是通过抑制线粒体氧化应激及相关凋亡信号通路实现的。

复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其机制研究

[目的]探讨复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其作用机制。[方法]培养的细胞随机分为空白对照组、模型组、复方白花前胡液大剂量组、复方白花前胡液中剂量组,每组10孔。将培养的神经元细胞采用缺氧罐和无糖Earle's液进行缺氧/缺糖处理3 h,再复氧复糖24 h后,显微镜下观察培养的海马神经元细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并分别检测乳酸脱氢酶含量及细胞游离钙的含量。[结果]1.复方白花前胡液中、高浓度实验组细胞凋亡率分别下降至(21.4±3.9)%、(23.6±2.8)%,与模型组相比差异有显著性意义(P<0.01)。2.各复方白花前胡液组在不同时点LDH释放率与模型组相比降低明显,差异有显著性意义(P<0.05)。3.复方白花前胡液实验组与模型组比较缺氧/缺糖培养3 h,复氧复糖24 h胞内Ca2+浓度下降,差异有显著性意义(P<0.05)。[结论]复方白花前胡液能使神经细胞具有抗缺氧/缺糖损伤作用。

下调miR-205抑制皮质神经元的缺血性损伤

目的:探讨miR-205对皮质神经元缺氧/缺糖损伤的作用与其可能的作用机制。方法:大鼠大脑皮层神经细胞的分离培养和MAP2免疫荧光鉴定皮质神经元。缺氧/缺糖处理构建皮质神经元缺血性损伤模型。实时荧光定量PCR检测miR-205表达量。利用Lipofectamine2000转染miR-205 mimics,miR-205抑制剂或LRP-1 siRNA。试剂盒检测caspase-3活性。Annexin-V fluorescein isothiocyanate conjugate and propidium iodide(Annexin-V FITC/PI)方法检测细胞凋亡。MTT实验检测细胞生长活力。双荧光素酶报告基因检测miR-205与LRP-1的靶向调控关系。Western Blot检测LRP-1蛋白表达量。结果:MAP2鉴定为皮质神经元。皮质神经元缺氧/缺糖损伤下调miR-205表达量。细胞转染实验中,下调miR-205显著抑制损伤模型的细胞凋亡和caspase-3活性,提高细胞生长活力;过表达miR-205则作用相反。对于miR-205的靶向基因LRP-1,过表达miR-205可显著抑制LRP-1,而抑制miR-205其作用则相反。同时抑制miR-205和LRP-1促进损伤模型的细胞凋亡和caspase-3活性,降低细胞生长活力。结论:下调miR-205可以通过调控LRP-1抑制皮质神经元的缺血性损伤,为新生儿脑卒中的预防和治疗提供一定的理论基础。

救脑宁注射液对神经细胞凋亡及胞浆钙变化的影响

目的 :研究神经细胞经缺氧 缺糖培养诱导的凋亡发生、胞内钙离子变化及救脑宁注射液的治疗作用。方法 :碘化丙啶染色 ,流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率 ;Fluo - 3负载 ,流式细胞仪检测胞内钙平均荧光值变化。结果 :缺氧 缺糖培养可诱导神经细胞凋亡和引起细胞内钙离子增高。救脑宁注射液能抑制细胞凋亡、降低细胞内游离钙离子浓度。结论 :救脑宁注射液能抑制缺氧 缺糖诱导的神经细胞凋亡及钙超载 ,有神经细胞保护作用。