小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析

缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生,但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348^+61bp、-302^+61bp、-131^+61bp、-68^+61bp的HIMF启动子片段,再将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子ETS-1结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染正常氧浓度条件下培养的小鼠肺上皮MLE-12和MLE-15细胞、结肠癌CT26细胞.结果发现,各HIMF启动子片段在MLE-12、MLE-15细胞中均有活性,但在CT26细胞中活性缺失;-302^-131bp区存在HIMF启动子的核心调控元件.针对该区域ETS-1转录因子结合位点进行突变或缺失,能导致HIMF启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合ETS-1.结果提示,转录因子ETS-1参与正常氧浓度下HIMF启动子活性的调控,为研究HIMF基因的转录调控机制奠定了实验基础.

缺氧诱导丝裂原因子在先天性膈疝胎鼠肺中的表达

目的研究缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)在先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)胎鼠肺组织中的表达,探讨其在CDH肺发育不良中的作用。方法实验组10只BABL/C小鼠妊娠8 d时经胃管注入25 mg除草醚,正常对照组给予食用油,妊娠21 d行剖腹产,解剖胎鼠两侧肺组织,采用免疫组化、Western blot方法检测HIMF表达。结果实验组CDH致畸率56.5%,肺发育不良,处于假腺体期和原始肺小管期,HIMF蛋白显著表达下调(P<0.05);实验组内产生CDH者胎肺内HIMF表达水平与无CDH者比较差异无显著性意义(P>0.05)CDH膈疝侧与非膈疝侧肺组织HIMF表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论在CDH肺发育不良组织中HIMF蛋白表达显著下调,且早于膈疝形成,可能参与CDH肺发育不良的发病机制。

肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建

目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体。方法采用Western blot法检测HIMF基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增全长HIMF cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoRⅠ;重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞MLE-12、血管内皮细胞SVEC4-10,用Western blot及RT-PCR法检测细胞HIMF表达水平。结果HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达。成功克隆了小鼠HIMF全长cDNA(336bp),与GenBank报道的序列一致。真核表达载体pcDNA3.1-HIMF转染细胞后,细胞内HIMF mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01)。结论从小鼠肺组织中克隆出HIMF这一组织特异性基因,为深入研究HIMF的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础。

缺氧诱导丝裂原因子在小鼠支气管肺发育不良模型中的表达及意义

目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子（HIMF）在小鼠支气管肺发育不良（BPD）模型中的表达及意义.方法 32只新生昆明小鼠随机分为对照组（n=16）、高氧暴露组（n=16）,分别置于正常空气（21%,O2）及氧箱（85%,O2）中,于暴露后第7、14、21、28天每组随机选取4只,采用苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织形态学改变,运用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot方法检测肺组织中HIMF mRNA和蛋白表达水平.结果 对照组肺泡逐渐发育成熟,大小均匀,肺间质变薄 高氧暴露组肺泡隔增厚、肺泡融合,放射状肺泡计数减少31.1%～65.3% 与对照组比较,高氧暴露7、14、21 d后肺组织HIMF mRNA和蛋白水平分别增高2.435～2.528倍（P〈0.05）、2.45～5.42倍（P〈0.05）,而高氧暴露28 d后分别下调52.81%（P〈0.05）、74.60%（P〈0.05）.结论 成功建立小鼠BPD模型,HIMF基因表达异常可能参与BPD的发生、发展过程.

缺氧诱导丝裂原因子在高氧诱导肺上皮和成纤维细胞凋亡中的作用及意义

目的探讨缺氧诱导丝裂原因子（HIMF）在高氧诱导肺上皮和成纤维细胞凋亡中的作用及其意义。方法肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞和成纤维NIH／3T3细胞分别转染靶向HIMF的小干扰RNA后，置于正常氧（21％O2）、高氧（85％O2）条件下培养3—18h，采用实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）法检测细胞中HIMFmRNA水平，运用吖啶橙-溴化乙锭染色法、Hochest33258染色法及膜联蛋白V（AnnexinV）-碘化丙锭（PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果与对照组比较，高氧暴露3、6、9、18h后，MLE-12和NIH／3T3细胞中HIMFmRNA水平分别增高2．783—5．023倍（P〈0．05）、2．864～15．162倍（P〈0．05），细胞凋亡率增高1．5～2．3倍（P〈0．05）、1．1～2．1倍（P〈0．05）；沉默HIMF基因后，高氧诱导的MLE．12和NIH／3T3细胞凋亡率分别进一步升高1．5～2．5倍（P〈0．05）、1．3—2．0倍（P〈0．05）。结论HIMF基因可能通过对抗高氧诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞和成纤维细胞凋亡，参与高氧肺损伤的发病机制。

缺氧诱导丝裂原因子与肺动脉高压

缺氧诱导丝裂原因子（hypoxia—induced mitogenic factor，HIMF）是近年来从慢性缺氧致肺动脉高压小鼠模型的肺组织中发现的一种分泌型蛋白，于肺组织中被缺氧诱导表达，因其能促进小鼠肺微血管平滑肌细胞的增殖而得名，是肺组织特异性生长因子，又名发现于炎症区域1（found in inflammatory zone1，FIZZ1）或抵抗素样分子α（resistin-like molecule—α，RELM—α）。HIMF／FIZZ1／RELM—α具有促有丝分裂、血管收缩、血管再生和诱导细胞迁移、趋化性、抗细胞凋亡、炎症因子样作用等多种生物学功能。研究发现HIMF通过引起肺血流动力学改变，血流阻力增加，肺动脉压增高等不同的方式参与肺血管收缩及重塑。HIMF的各种生物学特性证明其和肺动脉高压，尤其是慢性缺氧性肺动脉高压的发病机制有密切的联系，而这对肺动脉高压的治疗是非常重要的。下面就HIMF与肺动脉高压的相互联系作一归纳、总结。

缺氧诱导丝裂原因子的研究进展

缺氧诱导丝裂原因子（hypoxia—inducedmitogen—icfactor，HIMF），又称为发现于炎症区域1（foundininflammatoryzone1，FIIZ1）或抵抗素样分子α（resistin．1ikemoleculeαRELMα），是近年来从缺氧的小鼠肺组织中分离出的一种分泌蛋白，具有肺组织特异性表达特点，与新近从人类缺氧肺组织中发现的具有丝裂原活性的抵抗素样分子β（resistin—likemoleculeβ，RELMβ）高度同源。

飞行员高空缺氧3例

1 临床资料 例1 32岁,歼-6飞行员,飞行时间1600h。经历过3次航空生理训练,体验了缺氧时的主观感觉。在一次高空飞行中发生了缺氧症,当时意识清醒,但记不清飞行高度。主诉缺氧时的症状为“兴奋,头发热”。马上联系起航空生理训练缺氧体验时的感觉,很快确定为高空缺氧,迅速下降到3000m的安全高度,症状得到缓解。返航后检查缺氧原因为面罩漏气。