以HIF2α为靶点的化合物筛选的细胞模型构建

目的建立稳定表达血管内皮生长因子A(VEGFA)启动子区5×缺氧反应元件(5×HRE)和萤光素酶(Luc)报告基因的人肾透明细胞癌(786-O)单克隆细胞系,构建以缺氧诱导因子2α(HIF2α)为靶点的化合物筛选的细胞模型,并对其应用加以初步验证。方法采用基因重组技术,构建含有VEGFA启动子区5×HRE以及Luc报告基因的慢病毒载体,并感染786-O细胞,经过嘌呤霉素筛选获得能稳定表达Luc活性的786-O-5×HRE-Luc细胞系;采用等浓度梯度稀释获得单克隆细胞系,运用HIF2α抑制剂PT2385和PT2399处理,检测Luc活性变化,筛选对PT2385和PT2399反应更灵敏的单克隆细胞系。结果通过基因测序鉴定,VEGFA启动子区5×HRE和Luc报告基因慢病毒表达载体构建成功,经过嘌呤霉素(Puro)筛选获得稳定表达Luc的786-O-5×HRE-Luc细胞;PT2385和PT2399可剂量依赖性降低细胞Luc的活性;得到对PT2385和PT2399反应灵敏的单克隆细胞系。结论建立了786-O-5×HRE-Luc稳定表达5×HRE和Luc报告基因细胞系,为高通量筛选靶向HIF2α的药物提供一类新的细胞模型。