培养心肌细胞缺氧复氧性损伤机制及ICAM-1 MAb的干预研究

目的 :探讨缺氧复氧性损伤的发生机制 ,澄清IL 1在损伤中的作用及ICAM 1MAb对损伤的影响。方法 :新生Wistar大鼠 5 0只 ,取其心肌细胞和主动脉内皮细胞培养 ,分离其外周血中性粒细胞 ,分设正常条件培养组 ,单纯缺氧复氧组 (HR) ,正常培养 +IL 1β(10 0u ml)刺激组 ,将以上 3组再分别分为 :不干预组和ICAM 1MAb(10 0ng ml)干预组 ;于缺氧 1h复氧 6h ,测定心肌细胞一氧化氮合酶 (NOS) ,细胞胞浆游离钙 ([Ca2 + ]i) ,超氧化物歧化酶 (SOD) ,丙二醛 (MDA) ,还原型谷胱苷肽 (GSH)和中性粒细胞与内皮细胞粘附率。结果 :心肌细胞缺氧复氧时 ,[Ca2 + ]i、MDA显著增加 ,而SOD、GSH、NOS明显下降 ;IL 1β、ICAM 1蛋白质表达 ,中性粒细胞与内皮细胞的粘附率显著增加。IL 1干预刺激组的上述指标变化类似于缺氧复氧组。ICAM 1MAb可明显改善SOD、GSH及NOS下降的程度和MDA增高的程度 ,降低中性粒细胞与内皮细胞的粘附率 ,但不能改善 [Ca2 + ]i超载和IL 1β的表达水平 ,P >0 0 5。 结论 :IL 1β通过直接或激活ICAM 1导致中性粒细胞与内皮细胞的粘附增加而引起细胞损伤 ,但钙超载 ,氧自由基和NO NOS系统也共同参与了缺氧复氧性损伤。ICAM 1MAb通过抑制中性粒细胞系统、减轻氧自由基产生、改善NOS代谢可部分减轻损伤。

IL-1βAb对培养心肌细胞缺氧复氧性损伤的干预研究

目的 研究缺氧复氧性损伤的发生机制及IL 1βAb对损伤的影响。方法 Wistar大鼠 5 0只 ,取其心肌细胞和主动脉内皮细胞培养 ,分离其外周血中性粒细胞 ,分设正常条件培养组 ,单纯缺氧复氧组 (HR) ,正常培养 +IL 1β(10 0u ml)刺激组 ,将以上三组再分别分为 :不干预组和IL 1βAb(10 0ng ml)干预组 ;于缺氧 1h后复氧 6h ,测定心肌细胞IL 1β、ICAM 1蛋白质表达水平 ,细胞胞浆游离钙 ([Ca2 + ]i) ,一氧化氮合酶 (NOS) ,超氧化物歧化酶 (SOD) ,丙二醛 (MDA) ,还原型谷胱苷肽 (GSH)和中性粒细胞与内皮细胞粘附率。结果 心肌细胞缺氧复氧及IL 1β刺激时 ,IL 1β、ICAM 1蛋白质表达 ,中性粒细胞与内皮细胞的粘附率、[Ca2 + ]i和MDA均有显著增加 ,而SOD、GSH、NOS明显下降 ;但缺氧复氧组上述各项指标除GSH外改变较IL 1干预刺激组更显著。IL 1βAb可明显改善两组IL 1β、ICAM 1的表达和MDA、[Ca2 + ]i超载增高的程度以及SOD、GSH、NOS下降程度 ,降低中性粒细胞与内皮细胞的粘附率 ,P <0 0 1。结论 IL 1β通过直接或间接激活ICAM 1导致中性粒细胞与内皮细胞粘附增加 ,引起细胞损伤 ,但钙超载 ,氧自由基和NO NOS系统也共同参与了缺氧复氧性损伤。IL 1βAb通过直接或间接抑制上述各系统而达到减轻缺氧复氧性损伤?

福辛普利对培养心肌细胞缺氧复氧性损伤的干预研究

目的 研究缺氧复氧性损伤的发生机制及福辛普利对损伤的影响。 方法 Wistar大鼠 5 0只 ,取其心肌细胞和主动脉内皮细胞培养 ,分离其外周血中性粒细胞 ,分设缺氧复氧正常条件培养组 (正常组 ) ,单纯缺氧复氧组 (HR组 ) ,正常培养 +白介素 1β(IL 1β ,10 0U·ml-1)刺激组 (IL 1β组 ) ,将以上 3组再分别分为 :不干预组和福辛普利干预组。于缺氧 1h后复氧 6h ,测定心肌细胞IL 1β、细胞间粘附分子 1(ICAM 1)蛋白质表达水平 ,细胞胞浆游离钙 ([Ca2 + ]i) ,一氧化氮合酶 (NOS) ,超氧化物歧化酶 (SOD) ,丙二醛 (MDA) ,还原型谷胱苷肽 (GSH)和中性粒细胞与内皮细胞粘附率。 结果 心肌细胞缺氧复氧及IL 1β刺激时 ,IL 1β、ICAM 1蛋白质表达 ,中性粒细胞与内皮细胞的粘附率、[Ca2 + ]i和MDA均有显著增加 ,而SOD、GSH、NOS明显下降 ;缺氧复氧组上述各项指标除GSH外改变较IL 1干预刺激组更显著。福辛普利可明显改善 2组MDA、中性粒细胞与内皮细胞的粘附率的增加以及SOD、GSH、NOS的下降程度 ,但对IL 1β、ICAM 1的表达水平和 [Ca2 + ]i超载增高的程度无影响。 结论 IL 1β通过直接或间接作用于ICAM 1、氧自由基和NO NOS系统引起细胞损伤 ,福辛普利可通过直接或间接调节氧自由基和NO NOS系统而减轻缺?

大鼠缺氧复氧性损伤中热休克蛋白70的表达及预吸氧的效应

为探讨缺氧复氧性脑损伤中热休克蛋白70(HSP 70)的表达及预吸氧的效应,将成年雄性Wistar大鼠72只随机分为4组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),每组又分成3个亚组(a、b、c),各亚组6只。Ⅰa、Ⅱa、Ⅲa、Ⅳa组,分别吸入21%、50%、75%及95%O_2 30min;Ⅰb、Ⅱb、Ⅲb、Ⅳb组,在预吸氧后分别给予5%O_2缺氧20min;Ⅰc、Ⅱc、Ⅲc、Ⅳc组,在预吸氧、缺氧后,给予98%以上O_2复氧20min。实验结束后48h将动物处死,取脑组织,应用病理学方法、免疫组化技术和Western印迹技术,观察损伤程度及HSP70的表达。结果表明,高浓度预吸氧后(Ⅲ、Ⅳ组)神经元轻度水肿;缺氧后各组神经元损伤加重;复氧后各组损伤进一步加重,Ⅱc组损伤轻于其它各组。与预吸氧组(a组)相比,缺氧组(b组)HSP70的表达显著增高,复氧组(c组)则较缺氧组(b组)减少(P<0.01);高浓度的预吸氧组(Ⅲ、Ⅳ组)在缺氧复氧时HSP70表达低于对照组(Ⅰ组);而较低浓度预吸氧组(Ⅱ组)HSP70表达高于对照组(P<0.01)。结论:较低浓度预吸氧可增强脑细胞的抗氧化损伤能力,减轻缺氧复氧性脑损伤。HSP70表达增加可能是低浓度预吸氧增强机体抗氧化损伤能力的机制之一。

N-乙酰半胱氨酸对培养心肌细胞缺氧-复氧性损伤的干预研究

目的 :探讨缺氧复氧性损伤的发生机制及 N乙酰半胱氨酸 (NAC)对损伤的影响。方法 :Wistar大鼠 5 0只 ,取其心肌细胞和主动脉内皮细胞培养 ,分离其外周血中性粒细胞 ,分设正常条件培养组 ,单纯缺氧复氧组 (H R) ,正常培养 +白介素 1β(IL 1β) 1× 10 5/ L 刺激组 ,将以上 3组再分别分为未干预组和 NAC(80 m g/ L)干预组。于缺氧 1小时后复氧 6小时 ,测定心肌细胞 IL 1β、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)蛋白质表达水平、细胞胞浆游离钙 (〔 Ca2 + 〕i)、一氧化氮合酶 (NOS)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、还原型谷胱苷肽 (GSH)和中性粒细胞与内皮细胞黏附率。结果 :心肌细胞 H R及 IL 1β刺激时 ,IL 1β、ICAM 1蛋白质表达 ,中性粒细胞与内皮细胞的黏附率、〔 Ca2 + 〕i和 MDA均有显著增加 ,而 SOD、GSH、NOS明显下降 ;但H R组上述各项指标除 GSH外 ,改变较 IL 1β干预组更显著。 NAC可明显改善 2组 IL 1β、ICAM 1的表达和 MDA、〔 Ca2 +〕i超载增高的程度以及 SOD、GSH、NOS下降程度 ,降低中性粒细胞与内皮细胞的黏附率(P<0 .0 5或 P<0 .0 1)。结论 :IL 1β可通过直接或间接激活 ICAM 1导致中性粒细胞与内皮细胞黏附增加 ,引起细胞损伤 ,但钙超载、氧自由基和 NO NOS系统也共同参与了缺氧复氧性损?

人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠海马CA1区Fos表达的影响

目的:观察人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧后不同时段Fos表达时程变化的影响,探讨人参银杏复方制剂抗缺氧复氧性脑损伤机制。方法:35只清洁级SD大鼠随机分为常氧对照组,缺氧复氧实验组和人参银杏复方制剂给药组。应用低压氧舱仿海拔8000m高空缺氧模型,采用Nissl染色、Fos免疫组化方法结合图像分析技术,观察预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧0,24,72h不同时段海马CA1区锥体细胞层神经元形态及Fos免疫反应阳性神经元的影响。结果:全脑缺氧24h复氧72h后,海马CA1区锥体细胞层神经元数量锐减,Fos免疫反应阳性神经元数量在缺氧24h复氧0h时为(9.3±3.8)个,较常氧对照组(16.6±4.8)个减少,差异有显著性意义(P<0.05),复氧24h时显著减少甚至消失为(2.0±1.8)个,复氧72h为(13.7±5.1)个,时接近常氧对照组水平差异无显著性意义(P>0.05)。预防性应用人参银杏复方制剂后缺氧24h复氧72h时海马CA1区锥体细胞层神经元数量未见明显减少,在缺氧24h复氧0,24,72h时段CA1区Fos免疫反应阳性神经元数量分别较缺氧复氧实验组相应时段增加,以复氧0h时增加最为显著,为(39.0±5.8)个,与常氧对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:人参银杏复方制剂对缺氧复氧后海马CA1区神经元具有保护作用。

右美托咪定对H9C2细胞内质网应激性损伤的影响及机制研究

目的研究右美托咪定(DEX)对H9C2心肌细胞内质网应激反应(ERS)的影响,探讨可能的发生机制。方法取正常培养的大鼠H9C2细胞,同时进行对照培养和缺氧/复氧(H/R)培养,其中H/R条件为5%CO2和95%N2密闭缺氧装置中缺氧3 h后,常氧条件下培养3 h。以含有1μmol/L DEX和1 mmol/L 4-苯基丁酸(4-PBA)的培养基提前孵育细胞1 h和24 h。采用低损伤法检测各组细胞上清液的乳酸脱氢酶(LDH)浓度、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率,以及RT-PCR和Western blot法检测内质网应激特异性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。将H9C2细胞分设Control组、毒胡萝卜素(TG)组、4-PBA组以及p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB202190)组并进行相应的干预,Western blot法检测各组p38MAPK和p-p38MAPK的表达,以及GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。结果与Control组相比,H/R组的H9C2细胞活力减低,细胞上清液LDH浓度增加,细胞凋亡率增加(P<0.05);与H/R组比较,DEX+H/R组的细胞活力明显增加,细胞上清液LDH浓度明显下降,细胞凋亡率下降(P<0.05);与DEX+H/R组比较,4-PBA+DEX+H/R组的H9C2细胞损伤被逆转,GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达也进一步升高。在Control组、TG组和DEX+TG组之间,p38MAPK的表达均无统计学差异,但是TG组的p-p38MAPK表达明显增加,DEX能够抑制p-p38MAPK表达增加(P<0.05);与TG组比较,DEX+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达被抑制,但是DEX+SB202190+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA及蛋白表达被逆转增高。结论DEX对H/R损伤下的H9C2心肌细胞具有保护作用,其作用机制与抑制细胞ERS有关,通过调控p38MAPK能够减轻细胞损伤和凋亡。

预吸氧对大鼠缺氧／复氧性脑损伤时皮质线粒体结构和功能的影响

目的观察预吸氧对缺氧复氧性脑损伤时大脑皮质线粒体的影响。方法在大鼠脑缺氧复氧前20min预吸氧30min，测定脑皮质线粒体膜流动性和超微结构的变化。结果大鼠缺氧／复氧后线粒体结构和功能均有所损伤，表现为线粒体膜流动性降低（微黏度1和各向异性1由2．505±0．837、0．182±0．032分别增高到4．801±0．531、0．242±0．009，P〈0．01）和超微结构变化，预吸氧能明显加重这种损伤（微黏度1和各向异性叮分别进一步增高到6．217±1．598、0．270±0．017），其机制与抑制三磷酸腺苷（ATP）敏感性钾通道有关。结论预吸氧能加重缺氧复氧性脑损伤。

预吸氧对大鼠缺氧/复氧性脑损伤时脑皮质血红素氧合酶-1/一氧化氮通路的影响

目的 观察预吸氧对大鼠缺氧/复氧性脑损伤脑皮质血红素氧合酶-1（HO-1）/一氧化氮（NO）通路的影响.方法 在大鼠脑缺氧复氧前30 min预吸氧30 min,测定大脑皮质HO-1蛋白表达、NO含量和超微结构的变化.结果 大鼠缺氧/复氧后大脑皮质有所损伤,表现为HO-1蛋白表达增加[（0.65±0.18）％增加到（10.50±1.83）％]、NO含量增加[（2.03±0.28） μmol/mg蛋白增加到（5.50 ±0.52） μmol/mg蛋白]和超微结构变化,预吸氧可显著加重这种损伤,HO-1蛋白表达南[（10.50±1.83）％降低到（7.14±1.35）％],NO含量由[（5.50±0.52）μmol/mg蛋白增加到（7.89±0.20）μmol/mg蛋白].结论 预吸氧可加重缺氧复氧性脑损伤,其机制与抑制HO-1蛋白表达及增加NO含量有关.

低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用

脑缺血再灌注损伤是一个多因素、多环节的恶性级联过程，针对不同环节发挥作用的保护措施联合应用比单一保护措施更有效。低温简单易行，安全范围大，是当前较为重要的脑保护措施，但低温并不能完全消除脑损伤。有研究表明，选择性线粒体内膜ATP敏感性钾通道（Mito-KATP）开放剂二氮嗪可减轻缺氧复氧性脑损伤。但低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用尚需进一步探讨。本研究拟观察低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用，为临床研究提供理论依据。