绞股蓝总黄酮对缺氧心肌细胞损伤标记物及细胞内游离Ca^2＋浓度的影响

探讨绞股蓝总黄酮(TFG)对缺氧心肌细胞损伤标记物及细胞内游离Ca2+浓度的影响.在离体乳鼠心肌细胞原代培养基础上制备心肌细胞缺氧模型,随机分为正常对照组、缺氧损伤组和绞股监总黄酮干预缺氧损伤组.分别测定各组心肌培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTn I)的含量,心肌细胞内游离Ca2+的浓度(荧光探针法).缺氧损伤组心肌培养基中LDH和cTnI的含量及心肌细胞内游离Ca2+浓度较正常对照组明显增加(P<0.05或0.01);经TFG干预后细胞培养基中LDH利cTnI的含量及心肌细胞内游离Ca2+浓度较缺氧损伤组明显降低(P<0.05或0.01).TFG对缺氧心肌细胞具有保护作用,其机理可能与减轻心肌细胞内钙超负荷有关.

左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞乳酸脱氢酶和肌钙蛋白的影响

目的 探讨钙离子拮抗剂左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞损伤标记物及细胞内游离钙离子浓度的影响。方法 在离体乳鼠心肌细胞培养基础上制备心肌细胞缺氧模型 ,随机分为正常对照组、缺氧损伤组和钙拮抗剂干预缺氧损伤组。分别测定各组心肌培养基中乳酸脱氢酶、肌钙蛋白的含量 ,心肌细胞内游离钙离子的浓度 (荧光探针法 )。结果 缺氧损伤组心肌培养基中乳酸脱氢酶和肌钙蛋白的含量及心肌细胞内游离钙离子浓度较正常对照组明显增加 (P均 <0 .0 1) ;经左旋氨氯地平干预后细胞培养基中乳酸脱氢酶和肌钙蛋白的含量及心肌细胞内游离钙离子浓度较缺氧损伤组明显降低 (P均 <0 .0 1)。结论 左旋氨氯地平对缺氧心肌细胞具有保护作用 。

PKC信号传导通路在缺氧心肌细胞表达VEGF中的作用

目的 :明确缺氧对心肌细胞表达血管内皮生长因子 (VEGF)的影响及蛋白激酶C(PKC)信号传导通路在其中的作用。方法 :将原代培养大鼠心肌细胞模型分组 :①正常缺氧 4组 :A组正常对照 ;B组缺氧 6h ;C组缺氧 12h ;D组缺氧 2 4h。②PKC激动剂 4组 :A组缺氧 2 4h对照 ;B组加入PMA 10ng/ml缺氧 2 4h ;C组加入PMA 10 0ng/ml缺氧 2 4h ;D组加入PMA 10 0 0ng/ml缺氧 2 4h。③PKC抑制剂 2组 :A组缺氧 2 4h对照 ;B组加入Chelerythrine 10mmol/L缺氧 2 4h。免疫组化方法检测各组心肌细胞中VEGF的表达 ,经计算机图像处理 ,定量分析。结果 :缺氧刺激心肌细胞VEGF表达上调 ,PMA与Chelerythrine分别增强及减弱VEGF在缺氧心肌细胞中的表达。结论 :缺氧是心肌细胞表达VEGF的强烈刺激因素之一。缺氧诱导VEGF在心肌细胞中的表达 ,其信号传导途径部分是通过PKC通路实现的。

普鲁卡因对缺氧心肌细胞的影响

目的 探讨普鲁卡因对心肌细胞缺氧损伤的影响。方法 将原代培养成活 4 8h的大鼠乳鼠心肌细胞分为三组 :A组为对照组 (氰化钠造成心肌细胞细胞内缺氧模型 ) ,B组为Pro1组 (缺氧 +7 4mg/L普鲁卡因 ) ,C组为Pro2组 (缺氧 +14 8mg/L普鲁卡因 )。比较三组心肌细胞细胞形态学 (倒置相差显微镜、透射电镜观察 )的变化及吸光度A值的改变。 结果 缺氧 12h后 ,对照组细胞搏动功能变化明显 ,呈散在细胞搏动 ,而实验组搏动频率减慢。随着时间的延长 ,细胞形态学变化逐渐明显 ,对照组较实验组变化更显著。

异氟醚对缺氧心肌细胞的影响

目的 :探讨异氟醚对心肌细胞缺氧损伤的影响。方法 :将原代培养成活 48h的大鼠乳鼠心肌细胞分为 3组 :A组为对照组 (氰化钠造成心肌细胞细胞内缺氧模型 ) ,B组为 Iso1组 (缺氧 +0 .2 8mm ol/L异氟醚 ) ,C组为 Iso2组(缺氧 +2 .8m mol/L异氟醚 )。比较 3组心肌细胞细胞形态学 (倒置相差显微镜、透射电镜观察 )的变化及 A值的改变。结果 :缺氧 12 h后 ,对照组细胞搏动功能变化明显 ,呈散在细胞搏动 ,而实验组搏动频率减慢。随着时间的延长 ,细胞形态学变化逐渐明显 ,对照组较实验组变化更显著。结论 :异氟醚对培养心肌细胞缺氧损伤有一定的保护作用。

机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链mRNA表达的影响

目的 探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链 (MHC)mRNA表达的影响。方法 建立离体培养的SD乳鼠心肌细胞机械牵张模型 ,并施加无糖缺氧刺激因素 ,模拟烧伤后缺血缺氧损害。实验分 10 %牵张组、缺血缺氧培养组、10 %牵张 +缺血缺氧培养组 ,每组每时相点 3皿细胞。各组分别在刺激前和刺激后 1、3、6、12h时相点进行观察。采用二步法逆转录聚合酶链反应检测心肌细胞MHCmRNA表达的变化 ,并用凝胶软件进行分析。 结果 与刺激前比较 ,10 %牵张组α、β型MHCmRNA表达均增加 ,但以 β型增加为主 (P <0.0 1)。缺血缺氧培养组α MHCmRNA向 β MHCmRNA转化加速 ,且缺氧 12h后心肌细胞α MHCmRNA下调明显 (P <0.0 5);β MHCmRNA表达先升后降 ,6h表达最强 (P <0.0 5 )。10 %牵张 +缺血缺氧培养组α MHCmRNA向 β MHC mRNA转化明显 ,随机械刺激时间的延长转化加剧 ;12h后α、β型MHCmRNA表达均下调 (P <0.0 5)。 结论 机械牵张进一步加剧缺血缺氧对MHCmRNA表达的下调 ,可能是严重烧伤后早期心肌功能降低的原因之一。

沙棘籽粕原花青素的提取与抗心肌细胞缺氧活性研究

研究沙棘籽粕中原花青素的提取与抗心肌缺氧活性。用乙酸乙酯萃取沙棘籽粕的乙醇提取物得原花青素乙酸乙酯萃取物,再经Sephadex LH-20柱层析50%乙醇洗脱得沙棘籽粕原花青素50%乙醇洗脱物。以乳鼠心肌细胞缺氧/复氧为模型,分别给予不同剂量的原花青素干预,采用MTT法检测心肌细胞的存活率。结果表明,乙酸乙酯萃取物和50%乙醇洗脱物能显著提高缺氧/复氧心肌细胞的存活率,对心肌细胞损伤有很好的保护作用。

参芪益心方对缺氧复氧心肌细胞氧化应激和凋亡的作用机制

目的:探讨参芪益心方对缺氧复氧心肌细胞氧化应激、凋亡的调控及其潜在的机制。方法:应用SD大鼠制备含药血清。缺氧复氧处理制造损伤心肌细胞模型。设置心肌细胞为NC组、H/R组及给药组,采用不同浓度含药血清(3%、6%、9%)处理损伤心肌细胞,设置为低剂量组(L组)、中剂量组(M组)、高剂量组(H组)。细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞活化的半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、Toll样受体家族成员4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)和NF-κB二聚体的抑制蛋白ɑ(I-κBɑ);流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS)活性、细胞钙离子含量。结果:与NC组比较,H/R组细胞存活率、GSH-Px、SOD含量、I-κBɑ蛋白表达降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达、凋亡率、LDH、ROS、MDA、钙离子含量及TLR4、NF-κB蛋白表达升高(P<0.05)。与H/R组比较,L组、M组、H组H/R组细胞存活率、GSH-Px、SOD含量、I-κBɑ蛋白表达升高,Cleaved Caspase-3蛋白表达、凋亡率、LDH、ROS、MDA、钙离子含量及TLR4、NF-κB蛋白表达降低,且呈浓度依赖性。结论:参芪益心方可抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡,其作用机制可能与维持钙稳态、抑制NF-κB信号通路活性有关。

参附益心颗粒通过线粒体KATP通道改善缺氧H2C9心肌细胞能量代谢的作用

目的探索参附益心颗粒改善缺氧心肌细胞能量代谢的机制。方法采用CCK-8法筛选出参附益心颗粒含药血清实验研究的药物浓度。H2C9心肌细胞随机分为正常组,缺氧组,缺氧+二氮嗪组,缺氧+参附益心颗粒组,缺氧+参附益心颗粒+5-羟基癸酸组.除正常组外,根据实验分组,缺氧处理前预先对细胞进行二氮嗪、5-羟基癸酸和参附益心颗粒含药血清处理,后将细胞置于缺氧的37℃的细胞培养箱中连续培养6 h。采用荧光素酶发光法检测细胞ATP的浓度,CCK-8检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,Western blot测定线粒体KATP(mitoKATP)的蛋白Kir6.2和SUR2A的表达。结果根据CCK-8实验结果选择250μM的参附益心颗粒含药血清作为实验药物浓度。与正常组相比,缺氧H2C9心肌细胞ATP水平显著降低,细胞的增殖能力降低,凋亡率增加,mitoKATP通道蛋白的Kir6.2和SUR2A的表达水平均显著降低(均P<0.01)。与缺氧组相比,二氮嗪和参附益心颗粒组的ATP浓度,细胞增殖能力和Kir6.2,SUR2A蛋白表达水平均显著升高,细胞的凋亡率显著下降(均P<0.01)。而参附益心颗粒经mitoKATP阻断剂5-羟基癸酸作用后,细胞的ATP浓度,增殖能力和Kir6.2,SUR2A的表达均显著下降(均P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论参附益心颗粒可能通过mitoKATP通道改善缺氧心肌细胞的能量代谢。

乙醛脱氢酶2对小鼠缺氧心肌细胞的抗凋亡作用

目的观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)在小鼠缺氧心肌细胞凋亡中所起的作用并探讨其机制。方法36只小鼠分为3组,第1组和第2组小鼠离体心脏分别用4-羟壬烯醛(4-HNE)灌流+缺血再灌注组和生理盐水灌流(缺血再灌注组),两组小鼠均灌流30 min后关闭灌流管造成全心缺血30 min后再打开灌流管灌流45 min,第3组(4-HNE灌流组)小鼠用4-HNE持续灌流75 min,分别测定3组小鼠离体心脏的细胞凋亡指数。接下来将腺病毒转染法制备的另外36只小鼠野生型、ALDH2基因高表达型及ALDH2基因敲除型3组模型均结扎左前降支造成小鼠心肌梗死。4周后解剖小鼠,每组随机选取6只小鼠用于测定心梗小鼠心肌梗死面积,每组剩下的6只小鼠则提取左心室组织测定4-HNE的表达水平。结果(1)4-HNE灌流+缺血再灌注组小鼠离体心脏细胞凋亡指数大于4-HNE灌流组(P<0.01)和缺血再灌注组(P<0.01),4-HNE灌流组与缺血再灌注组小鼠心肌细胞凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05)。(2)4-HNE在ALDH2基因敲除型小鼠缺氧心肌细胞中的表达高于ALDH2基因高表达型(P<0.05),在野生型中的表达介于两者之间(P<0.05)。(3)ALDH2基因敲除型小鼠心肌梗死面积高于ALDH2基因高表达型(P<0.01),而野生型的小鼠心肌梗死面积介于两者之间(P<0.01)。结论ALDH2通过分解4-HNE减轻小鼠缺氧心肌细胞的凋亡。

丹参多酚酸盐对缺氧心肌细胞的保护作用

目的分析丹参多酚酸盐对缺氧心肌细胞的保护作用。方法新生SD大鼠50只,分离并培养其原代心肌细胞,选择生长良好的心肌细胞,建立心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,随机分为空白对照组(仅于细胞DMEM培养基中培养)、缺氧/复氧组(仅建立H/R模型)、干预1组(H/R模型+丹参多酚酸盐)、干预2组(丹参多酚酸盐+H/R模型)、干预3组(丹参多酚酸盐+H/R模型+丹参多酚酸盐)各10只,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定心肌细胞活力,以紫外分光光度计平行测定各组氧化应激指标、心肌损伤标志物、炎症因子水平。结果缺氧/复氧组心肌细胞存活率低于空白对照组,干预1组、干预2组、干预3组细胞存活率高于缺氧/复氧组,且药物干预组中干预3组细胞存活率最高(P<0.05);缺氧/复氧组SOD含量低于空白对照组,而MDA、p22phox活性明显高于空白对照组,干预1组、干预2组、干预3组SOD含量高于缺氧/复氧组,而MDA、p22phox活性低于缺氧/复氧组,且干预3组上述指标改善最明显(P<0.05);缺氧/复氧组心肌细胞培养液中AST、CK⁃MB、LDH、TNF⁃α、IL⁃1、hs⁃CRP水平明显高于空白对照组,而干预1组、干预2组、干预3组AST、CK⁃MB、LDH、TNF⁃α、IL⁃1、hs⁃CRP水平明显低于缺氧/复氧组,且干预3组上述指标改善最明显(P<0.05)。结论丹参多酚酸盐可较好保护缺氧心肌细胞,减轻其氧化应激反应、心肌损伤、炎症因子水平,抑制细胞凋亡,提高细胞存活率。

黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的保护作用

目的 :探讨黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的影响。方法 :取SD乳鼠的心脏 ,经消化 ,分离及纯化制成心肌细胞悬液并接种至 2 4孔培养板中 ,通过缺氧缺糖 ,建立心肌细胞“缺血性”损伤的实验病理模型 ,在此基础上观察黄芩苷对缺氧缺糖心肌细胞形态及细胞内SOD、MDA水平及NO分泌的影响。结果 :0 1～ 10 μg/ml的黄芩苷可显著提高缺氧性心肌细胞中SOD活性 ,10 μg/ml的黄芩苷显著抑制MDA的生成 ,1μg/ml黄芩苷显著增加NO分泌 ,10 μg/ml黄芩苷又抑制NO分泌。 结论 :黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞损伤具有一定的保护作用。

Netrin-1对心肌细胞H9c2缺氧复氧损伤中的保护作用研究

目的研究Netrin-1在心肌细胞H9c2缺氧复氧损伤中的作用,并探讨其机制。方法建立心肌细胞H9c2缺氧复氧损伤模型;将A/R+Netrin-1组(转染pcDNA 3.1-Netrin-1)、A/R+Ctrl组(转染pcDNA 3.1)、A/R+Netrin-1+LY294002组(转染pcDNA 3.1-Netrin-1与抑制剂LY294002共处理)、A/R+Netrin-1+DMSO组(转染pcDNA 3.1-Netrin-1与DMSO共处理)均用脂质体法转染H9c2细胞;ELISA检测细胞中LDH、MDA、SOD的含量;MTT法检测细胞活力;WB检测细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Netrin-1、p-AKT的蛋白表达;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果与A/R+Ctrl组相比,A/R+Netrin-1组细胞中LDH、MDA含量明显降低,SOD含量明显升高,细胞活力显著升高,Bax、Cleaved caspase-3的蛋白表达量均显著降低,Bcl-2蛋白表达量显著升高,Netrin-1、p-AKT蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与A/R+Netrin-1+DMSO组相比,A/R+Netrin-1+LY294002组细胞中LDH、MDA含量明显升高,SOD含量明显降低,细胞活力显著降低,Bax、Cleaved caspase-3的蛋白表达量均显著升高,Bcl-2蛋白表达量显著降低,Netrin-1、p-AKT蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 Netrin-1可通过激活Akt通路促进缺氧复氧心肌细胞活力,抑制凋亡,发挥保护作用,将可为心肌损伤的治疗提供理论依据。

碱性成纤维细胞生长因子拮抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)拮抗大鼠心肌细胞缺氧 /复氧(hypoxia/reoxygenation ,H/R)损伤的机制。 方法 :H/R处理的大鼠心肌细胞的孵育液中 ,对照组不加任何处理因素 ,其它各组分别加bFGF(10 μg·L-1)、bFGF与丝裂素活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)、蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)抑制剂H7(40 μmol·L-1)、一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯 (NG nitro L argininemethylester,L NAME ,5 0 μmol·L-1)。孵育完毕 ,测定细胞活力、ATP含量及孵育液中乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenase,LDH)含量。 结果 :H/R组心肌细胞活力较对照组降低 32 % (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量减少 5 8% (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性增加 5 .8倍 (P <0 .0 1) ;bFGF组心肌细胞活力较H/R组增高 17% (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量增加 45 % (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性降低 31% (P <0 .0 1) ,细胞PKC、MAPK活性分别增加 32 % (P <0 .0 1)和 10 % (P <0 .0 5 )。PD980 5 9、H7、PD980 5 9+H7及L NAME各组心肌细胞活力较bFGF组分别降低 13%、17%、2 4%和 2 7% (均P <0 .0 1) ,细胞ATP含量分别减少

卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响

目的观察卡托普利晚期预处理对缺氧复氧心肌细胞游离钙的影响,评价其延迟心肌的保护作用。方法建立培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型。设正常对照组、缺氧复氧组、缺氧预适应组、卡托普利预处理组、蛋白激酶C阻断剂+卡托普利组、一氧化氮合酶阻断剂+卡托普利组和核因子κB阻断剂+卡托普利组。利用分光光度计测定丙二醛和超氧化物岐化酶含量;全自动生物化学分析仪测定乳酸脱氢酶含量。Flou3AM负载染色和流式细胞分析技术测定细胞内钙离子浓度。结果卡托普利预处理和缺氧预处理均可减轻缺氧再灌注时心肌细胞内钙离子浓度增加(594±5nmolL、507±32nmolL比789±9nmolL,P<0.01),抑制乳酸脱氢酶和丙二醛的增加和超氧化物岐化酶含量的降低;但与对照组(414±37nmolL)比较钙内流仍有轻度增加(P<0.05);预先分别加入蛋白激酶C阻断剂、一氧化氮合酶阻断剂、核因子κB阻断剂与卡托普利共同孵育细胞,行缺氧复氧损伤所测得细胞内钙离子浓度分别为676±32nmolL、700±37nmolL和689±11nmolL,与卡托普利预处理组比较有所增加(P<0.05);但与缺氧复氧组比较仍有降低(P<0.05)。结论以上提示,卡托普利预处理可抑制缺氧复氧时的钙超载及其脂质过氧化损伤。其机制可能是通过轻度增加钙内流、启动心肌延迟保护作用;其过程可能涉及蛋白激酶C、一氧化氮合酶和核因子κB信号转导通路中的多个环节。

乙醛脱氢酶2抑制剂daidzin对大鼠心肌细胞缺氧损伤作用的机制

目的检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)被daidzin抑制时对大鼠心肌细胞在缺氧状态下发生凋亡和信号转导的影响,验证乙醛脱氢酶2 (ALDH2)在此过程中所起的作用．方法在确定daidzin的最佳抑制浓度后,运用心肌细胞缺氧模型,比较大鼠心肌细胞在单独缺氧和经ALDH2特异性抑制剂daidzin预处理24 h后缺氧的凋亡和MAPK信号通路的改变。酶活性检测采用乙醛代谢法、ROS的检测用C400测定,凋亡的测定通过用Hoechest 33324、免疫荧光标记的流式细胞仪和TUNEL试剂盒检测,MAPK信号通路酶(ERK1／2、JNK、P38)磷酸化的改变用Western印迹法检测。结果60μmol/Ldaidzin浓度是ALDH2酶活性被抑制而细胞无凋亡发生的最佳工作浓度。在daidzin (60μmol／L)预处理24 h后再经缺氧诱导,比单独缺氧引起的心肌细胞凋亡更为明显:表现为在Hoechest 33324染色中,细胞核溶解和核碎裂(P<0．05),在FACS和TUNEL的检测中,凋亡细胞明显增加(P<0．05),经凋亡后的死亡细胞有增加趋势但差异无统计学意义,同时与MAPK信号通路有关的磷酸化ERK1／2、JNX和P38的酶活性均表达增强。结论daidzin使ALDH2酶活性降低可增加心肌细胞对缺氧导致凋亡的易感性,其机制是与细胞ROS和凋亡的增加及MAPK信号通路的激活有关。ALDH2对缺氧引起的细胞凋亡损伤具有保护作用。

大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧延迟保护作用的研究

目的 :研究大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧的延迟保护作用及其机制。方法 :采用细胞存活率、乳酸脱氢酶 (LDH)活性、丙二醛 (MDA)含量作为心肌细胞受损指标。观察终浓度分别为 5、1 0、2 0、5 0 μg/ml的大蒜素预处理以及预处理 1 2、2 4、3 6h后对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响 ,并观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂H 7、丝裂素激活蛋白激酶 (MAPKs)抑制剂PD 980 5 9对大蒜素预处理的作用。结果 :大蒜素能提高细胞存活率 ,减少LDH漏出和MDA生成。其中 2 0 μg/ml浓度作用较强。大蒜素预处理 1 2h后即产生延迟保护作用 ,2 4h最强 ,3 6h消失。H 7、PD 980 5 9能够完全清除大蒜素预处理的心肌保护作用。结论 :大蒜素可以模拟缺血预处理延迟保护作用 ,其机制涉及PKC及MAPKs信号途径。

激光共聚焦显微技术检测川芎嗪对缺氧/再复氧心肌细胞内游离钙的影响

目的 :进一步探讨川芎嗪对缺氧 /再复氧心肌细胞内游离钙的作用。方法 :培养新生大鼠心肌细胞缺氧 /再复氧模型 ,以荧光探针Fluo 3/AM负载 ,通过激光扫描共聚焦显微镜观察损伤和川芎嗪组心肌细胞内荧光强度。结果 :损伤组细胞内钙荧光强度明显增强 ,川芎嗪各组细胞内钙荧光强度均有不同程度的减弱 ,尤以低、中剂量组明显 ,与损伤组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :心肌缺氧 /再复氧细胞内游离钙显著增加 ,而一定剂量的川芎嗪可降低细胞内游离钙 。

枸杞糖肽对缺氧及KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响

目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽预处理组:加入枸杞糖肽,再行缺氧6h。MTT法检测细胞活力。以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。加入终浓度60mmol·L-1KCl溶液,动态观察KCl刺激后心肌细胞[Ca2+]i的动态变化及LbGp预处理后对KCl诱导的钙超载的影响。结果:心肌细胞缺氧时间延长,损伤随之加剧,缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均较模型组显著降低(P<0.01),50μg·mL-1LbGp最为明显,[Ca2+]i明显减少。枸杞糖肽组加入KCl溶液后[Ca2+]i荧光强度曲线升高,但与模型组比较,幅度明显减小,25,50,100μg·mL-1LbGp且呈现量效关系。结论:低氧导致心肌细胞钙超载,而枸杞糖肽能减轻钙超载。亦能对抗KCl诱导的心肌细胞钙超载。机制之一是枸杞糖肽作用于L型钙通道。