Nogo-A蛋白在大鼠心肌细胞中的表达变化及其在细胞缺氧性凋亡中的作用

目的探讨Nogo-A蛋白在心肌细胞中的表达及其在细胞缺氧性凋亡中的作用。方法①采用免疫组化法和免疫印记法测定成年大鼠心肌细胞(成熟心肌细胞)Nogo-A蛋白表达。②急性分离大鼠心肌细胞分为空白组、模型组及干预组,模型组及干预组建立心肌细胞缺氧模型,其中干预组制模前采用抗Nogo-A抗体干预。观察三组细胞凋亡情况、Nogo-A蛋白及Caspase-3和Caspase-12表达情况。结果①成熟心肌细胞:Nogo-A蛋白表达呈阳性。②缺氧心肌细胞:Nogo-A蛋白表达呈阳性;干预组及模型组均出现凋亡细胞,但干预组明显少于模型组;干预组及模型组Caspase-3和Caspase-12表达阳性率均明显高于空白组,但干预组明显低于模型组,P<0.05。结论心肌细胞中存在大量表达的Nogo-A蛋白;Nogo-A蛋白可能参与了心肌细胞的缺氧性凋亡。

LOC103693069对BMSCs缺氧性凋亡的作用研究

目的探讨LOC103693069对BMSCs缺氧性凋亡的作用。方法取1周龄SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁培养法分离培养BMSCs并传代,经成脂、成软骨和成骨诱导分化鉴定后,取第3代细胞分别采用5%O;、1%O;及无氧条件处理48 h,检测细胞活性、凋亡以及凋亡相关蛋白[低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(B cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)]表达,以正常BMSCs作为对照,确定细胞凋亡最明显的浓度组用于后续实验。取缺氧处理48 h后BMSCs,通过基因芯片以及实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)分析,筛选表达下调最显著基因并构建其高表达、低表达以及阴性对照慢病毒并转染BMSCs,经qRT-PCR检测明确转染成功后,缺氧处理48 h观察细胞活性及凋亡相关蛋白表达。结果经细胞活性、凋亡以及凋亡相关蛋白检测,以无氧条件培养48 h后细胞凋亡最显著,上述指标与其他组比较差异均有统计学意义(P<0.05),以该组处理条件进行后续实验。基因芯片分析示缺氧处理48 h后,BMSCs中AC125847.1、LOC102547753、AABR07017208.2、LOC103693069明显下调,qRT-PCR检测LOC103693069表达下调最显著(P<0.05);选择其构建慢病毒并转染BMSCs,qRT-PCR检测示成功转染至细胞;经缺氧处理后检测显示该基因高表达的BMSCs凋亡率和凋亡相关蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论LOC103693069可改善BMSCs缺氧性凋亡。

Caspases抑制剂对缺氧性脑血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的 研究Caspases抑制剂对缺缺性脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用。方法 用氰化钠造成培养的牛脑微血管内皮细胞缺氧；用台盼蓝染色、TUNEL、流式细胞仪计数方法观察细胞受损和凋亡情况；用免疫细胞化学染色法观察受损细胞中Caspase-3的表达，同时比较特异性和非特异性Caspases抑制剂对缺氧性血管内皮细胞的作用。结果 氰化钠可损伤牛脑微血管内皮细胞，细胞发生了凋亡，受损细胞中Caspase-3大量表达，广谱Caspases抑制剂、选择性Caspase-1、-3、-6抑制剂均能显著减少细胞死亡数目、Caspase-1、-6抑制剂可以抑制Caspase-3的表达。结论 实验结果提示Caspases抑制剂对缺氧性脑微血管内皮细胞凋亡起有效的保护作用。