氯化钴诱导体外人髓核细胞缺氧模型的建立

目的观察氯化钴(CoCl_(2))对体外培养的原代髓核细胞的影响,探寻符合研究目的体外化学干预低氧模型。方法利用贴壁法培养原代髓核细胞,使用100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L CoCl_(2)溶液分别处理12 h、24 h、36 h、48 h,形成最终13个分组:空白对照组,CoCl_(2)处理组(100μmol/L-12 h组,100μmol/L-24 h组,100μmol/L-36 h组,100μmol/L-48 h组;200μmol/L-12 h组,200μmol/L-24 h组,200μmol/L-36 h组,200μmol/L-48 h组;300μmol/L-12 h组,300μmol/L-24 h组,300μmol/L-36 h组,300μmol/L-48 h组)。利用CCK-8实验观察不同条件下细胞生长、凋亡情况,并通过免疫印迹(western blot)及实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果与空白对照组比较,CoCl_(2)处理组的细胞生存率整体趋势随着浓度升高、时间延长而降低(P<0.05),但在低浓度、短时间的CoCl_(2)诱导下,髓核细胞的生存率反而提高(P<0.05)。HIF-1α与VEGF的mRNA及蛋白表达亦随CoCl_(2)浓度升高和时间延长而增加(P<0.05)。但在300μmol/L CoCl_(2)的诱导下,HIF-1α、VEGF蛋白的表达进入平台期。结论CoCl_(2)对原代髓核细胞的增殖、凋亡及相关基因、蛋白的表达与时间和浓度相关,总体成逐渐升高趋势。本文成功建立起一种体外培养原代髓核细胞缺氧诱导方法,可以作为研究椎间盘髓核细胞缺氧模型的参考。

荭草苷对缺氧模型小鼠的抗缺氧作用研究

目的:研究荭草苷对缺氧模型小鼠的抗缺氧作用。方法:通过常压耐缺氧、亚硝酸钠中毒、氰化钾中毒、利多卡因中毒、夹闭气管及断头等建立小鼠缺氧模型,于造模前20min给予相应药物,观察药物的抗缺氧作用。结果:与生理盐水空白对照组比较,荭草苷可明显延长模型小鼠在常压缺氧、亚硝酸钠中毒、氰化钾中毒、利多卡因中毒时的存活时间,延长夹闭气管后的心电图消失时间及断头后的喘气时间。结论:荭草苷对缺氧模型小鼠具有抗缺氧作用。

小鼠常压急性缺氧模型装置及其应用

设计了一种建立小鼠常压急性缺氧模型的简易装置 ,并通过实验与常规缺氧模型装置进行了比较。结果表明 :此装置避免了高浓度CO2 或低气压对实验的影响 ,而且造价低廉 ,制作简单 ,使用方便 ,为完善缺氧的研究提供了一种手段。

大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法的改进

目的:改进培养大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法,并通过兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂进行验证。方法:实验于2004-09/2005-06在南方医科大学基础医学院神经生物学教研室进行。实验材料:出生1d内清洁级SD大鼠,由南方医科大学实验动物中心提供(合格证号为粤证监字2004B023号)。N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK-801)和D-2-氨基-5-磷酰基戊酸(d-APV)购自Sigma公司。实验方法:取新生1dSD大鼠海马组织作神经细胞分散细胞原代培养,培养到13d时进行氧/葡萄糖剥夺模型的制备:将neurobasal培养基更换为不含葡萄糖的BSSo培养基,连续充以50mL/LCO2+950mL/LN2(体积比)混合气体。缺氧30,45,60,90min后取出细胞,更换为正常neurobasal培养基,恢复正常条件继续培养。将神经细胞随机分为正常对照组、单纯缺氧组、无糖缺氧组、MK-801组和d-APV组。将10μmol/LMK-801和500μmol/Ld-APV在通50mL/LCO2+950mL/LN2混合气前加入到BSSo培养基,缺氧结束后随BSSo培养基一起去掉。复氧24h后采用MTT比色法测神经细胞成活率及Hoechst荧光染料法测神经细胞凋亡率。结果:①随着氧/葡萄糖剥夺时间延长,神经细胞存活率下降。氧/葡萄糖剥夺30,45,60,90min再复氧24h,神经细胞存活率分别为(81.48±3.84)%、(63.14±3.14)%、(41.73±2.97)%和(16.78±2.12)%。②N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(10μmol/L)和d-APV(500μmol/L)均能明显增加神经细胞存活率(P<0.05),并且两组细胞存活率与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:实验制备的海马神经细胞短时间氧/葡萄糖剥夺模型可对神经细胞造成迟发性死亡,兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂可保护氧/葡萄糖剥夺诱导的神经细胞损伤,说明本实验建立的缺氧模型有效并简便可靠,并且缩短了缺氧时间。

缺氧模型和多因素模型构建结核休眠菌模型比较研究

目的比较缺氧模型及多因素模型两种结核休眠菌建模方法的优劣。方法利用缺氧因素构建缺氧模型;利用低氧(5%O2)、高CO2(10%CO2)、弱酸(pH 5.0)及营养缺乏(10%7H9液体培养基)多种因素构建多因素模型。分别在第20d、30d时取样,用金胺O-尼罗红染色法染色,在共聚焦显微镜下观察结核菌脂质聚集及失去抗酸性的情况;用电镜观察结核菌细胞壁增厚情况;并检测其对利福平的耐药率。在建模30d时,将等量的两种模型分别转入新鲜7H9液体培养基中,观察并比较其复苏情况。结果建模20d时,两模型组细菌均出现脂质聚集及失去抗酸性,无明显差异。两模型组细菌均未出现明显细胞壁增厚。建模30d时,多因素模型组细菌几乎都表现出脂质聚集及失去抗酸性,而缺氧模型组仍有部分细菌未表现出脂质聚集及失去抗酸性。同时,多因素模型组在建模30d还出现了细胞壁增厚的细菌,缺氧模型组则无明显改变。多因素模型组细菌对利福平的耐药率明显高于缺氧模型组,且多因素模型组细菌复苏的菌量远小于缺氧模型组。结论多因素模型较缺氧模型能更快诱导结核菌进入休眠状态,且诱导出的结核休眠菌状态更稳定。

淫羊藿总黄酮对缺氧模型小鼠的抗缺氧作用

目的:研究淫羊藿总黄酮(total flavone of herba epimediumon,TFE)对缺氧模型小鼠抗缺氧的药理作用。方法:利用实验室常压密闭缺氧装置,建立小鼠缺氧模型,并对TFE不同给药剂量进行对比,通过测定小鼠的存活时间、外周血象、大脑和肺脏含水率等指标,观察TFE的抗缺氧作用。结果:与模型组比较,TFE可显著延长小鼠在常压密闭缺氧条件下的存活时间,显著提高缺氧小鼠血液中的白细胞和红细胞的数量,减轻脑水肿及肺水肿的程度。TFE给药剂量为900 mg/(kg.d)时,抗急性缺氧的作用最强。结论:TFE对缺氧模型小鼠具有显著的抗缺氧作用。

玉竹对缺氧模型小鼠抗缺氧作用的实验研究

目的:研究玉竹对缺氧模型小鼠的抗缺氧作用,并探讨其作用机制。方法:通过常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验、急性脑缺血性缺氧实验,观察小鼠给予玉竹浓缩液灌服4周后对缺氧的耐受能力,并对心、脑组织中MDA、GST、SOD进行测定。结果:与对照组比较,玉竹可延长小鼠在常压缺氧、亚硝酸钠中毒实验的存活时间,延长急性脑缺血性缺氧实验中断头小鼠的喘气时间,升高血清中SOD的水平,降低MDA的含量,作用效应与玉竹浓度存在计量依从关系。结论:玉竹对缺氧模型小鼠具有抗缺氧作用,与提高小鼠的抗氧能力有关。

体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立

目的建立大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)缺氧模型。方法植块法培养CMECs,免疫细胞化学鉴定微血管内皮细胞特异性标志。将原代培养的CMECs在1%O2-94%N2-5%CO2低氧气体环境中培养24h制备低氧损伤模型(L组),以无血清常氧培养作为对照组(N组)。倒置相差显微镜观察缺氧前后细胞形态变化,MTT法测定细胞活力,Annexin V-FITC和PI双标记法测定细胞凋亡率。结果植块法培养的大鼠CMECs具备典型微血管内皮细胞特征;Ⅷ因子、CD31相关抗原免疫染色鉴定均阳性。缺氧前后细胞形态无明显变化;与N组比较,L组细胞活力明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05),其中早期凋亡降低最明显(P<0.01)。结论本方法可以成功建立简便、易行的CMECs细胞缺氧模型。

人结肠癌细胞HT-29离体缺氧模型的制备和鉴定

目的模拟体内肿瘤不同程度的缺氧环境,建立简单、稳定可靠的离体缺氧模型,比较各梯度缺氧对HT-29细胞生长活力的影响,以筛选出最适HT-29细胞生长的微缺氧环境。方法制作缺氧检测装置,灌注不同氧浓度的混合气体,溶解氧测定仪实时动态监测培养液氧分压的变化;RT-PCR检测低培养液氧分压下HT-29细胞HIF-1α mRNA的表达,以检验细胞是否处于缺氧状态;倒置相差显微镜下观察缺氧各梯度组HT-29细胞的形态变化;MTT检测各梯度缺氧对HT-29细胞增殖的影响,描绘细胞生长曲线。结果输入7.8%、4.8%、2.4%和1.2%氧(O2)后20min,10%FBS/RPMI-1640培养液的氧分压(PO2)分别恒定于30、20、10和5mmHg。缺氧各梯度组HIF-1α mRNA的表达均较对照组明显上调,尤以PO220mmHg组为著。PO230mmHg、PO220mmHg和PO210mmHg梯度组HT-29细胞的形态与对照组相似;而PO25mmHg梯度组则出现损伤性形态改变,其(A570)值最低;PO220mmHg梯度组(A570)值则显著高于对照组。结论该实验成功构建离体缺氧模型。在适度缺氧下,缺氧的应激作用,可能使相关缺氧反应基因表达上调,诱导细胞增殖加快,通过刺激增殖和细胞保护使肿瘤细胞在缺氧环境中长期生存。而严重缺氧导致增殖受到抑制,细胞形态出现损伤性改变。在对照组和缺氧的4个梯度组中,PO220mmHg组处于缺氧的应激和损伤作用的平衡点,其生长活力最好。肿瘤瘤体内PO220mmHg位于瘤体边缘,提示:位于瘤体边缘的肿瘤细胞在缺氧的诱导下增殖活性更强。这为后续深入探讨该缺氧水平下肿瘤细胞的侵袭能力及其机制奠定了基础。

细胞微缺氧模型的建立及其对胃癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:缺氧是实体瘤微环境的基本特征之一,体外制造微缺氧的细胞培养环境,对研究缺氧对肿瘤细胞的影响有重要意义。目前建立体外缺氧细胞培养模型的方法较为烦琐,尚缺少微缺氧对胃癌细胞影响较为完整的研究。本实验运用GasPaK产气袋法体外创建胃癌细胞微缺氧培养模型,并观察该状态下细胞生物学行为的变化。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件,血气分析监测RPMI-1640培养液中PO2、PCO2和pH值变化。流式细胞仪分析微缺氧对SGC-7901细胞周期分布的影响,光镜及透射电镜观察微缺氧条件下SGC-7901细胞形态的改变,台盼蓝染色计数微缺氧对活细胞数的影响,MTT法检测微缺氧对SGC-7901细胞粘附能力的影响,游走实验检测微缺氧对SGC-7901细胞游走运动能力的影响。结果:GasPaK产气袋法在0.5～48h内PO2、PCO2和pH稳定,并能达到微缺氧细胞培养的条件。微缺氧处理SGC-7901细胞16h后未见细胞周期的变化。微缺氧导致部分SGC-7901细胞形态发生改变。微缺氧处理16h后活细胞计数无明显下降,微缺氧组SGC-7901细胞粘附能力增强,游走穿膜细胞数(196±9)是对照组(114±7)的1.71倍(P<0.05)。结论:通过GasPaK产气袋法制造的微缺氧肿瘤细胞培养环境,达到了条件稳定、重复性好的特点。微缺氧对SGC-7901细胞有影响,但这种影响相对较小,SGC-7901细胞对微缺氧有一定的耐受性。

麻醉大鼠停通气缺氧模型的建立

目的：建立麻醉大鼠不同时间停通气缺氧损伤模型。方法：雄性Wistar大鼠144只.体重260～290g，随机分为8组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、和假手术组，每组18只/水合氯醛腹腔麻醉后气管插管行机械通气。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ组分别停止通气1、2、3、4、5、6和7分钟后恢复通气。记录发生循环停止时间（TCA)、自主循环恢复时间(TROOC)死亡率和神经功能评分(NDS),72小时后在透射电镜下观察海马超微结构改变。结果：假手术组、Ⅰ、Ⅱ组大鼠无循环停止，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ组所有大鼠均发生循环停止，TCA组间差异无显著性(p＞0.05)；Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组TROOC较Ⅲ组明显延长(p＞0.05) ，Ⅵ组较Ⅳ组亦明显延长(p＞0.05)；假手术组、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠全部存活；Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组大鼠死亡率分别为33.3％、61.1％、83.3％。Ⅶ组大鼠全部死亡假手术组，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组NDS均正常。Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组NDS显著低于假手术组(p＞0.01)，Ⅵ组与Ⅳ组比较亦明显降低(p＞0.01)，各组NDS组内比较差异无显著性；海马CA1区电镜检查显示随着停通气时间延长神经细胞，细胞器和星形细胞损伤逐渐加重。结论：对机械通气麻醉大鼠采用4分钟停通气可建立稳定的脑缺氧损伤动物模型。

胎羊缺氧模型的血流动力学改变

目的和方法：健康妊娠绵羊７只，体重２０～３０ｋｇ。于妊娠１１６～１２５ｄ行胎儿外科手术。经胎儿股动脉插管引出腹主动脉血压，放置脐动脉电磁流量计探头记录血流信号。术后恢复１ｈ。从胎儿动脉导管注入明胶微球悬浮液（≈５０μｍ）造成胎盘微血管阻塞，每隔１５～２０ｍｉｎ注射一次，构成胎儿缺氧动物模型。采集胎儿动脉血样。分析ｐＨ、ＰａＣＯ２和ＰａＯ２值。分析脐动脉输入阻抗。结果：１、外周阻力Ｒ与血管阻塞程度呈指数关系（ｒ＝０．９７，Ｐ＜０．００１），但脐动脉特征阻抗基本不变；２、胎儿动脉血氧分压随血管阻塞程度增加而下降（ｒ＝０．８７，Ｐ＜０．００１）；ｐＨ值随血管阻塞程度的增加而减小（ｒ＝０．８５，Ｐ＜０．０１）；二氧化碳分压随血管阻塞程度增加而上升（ｒ＝０．７１，Ｐ＜０．０５）；３、脐动脉血流量与外周阻力呈幂函数关系（ｒ＝０．９９，Ｐ＜０．００１）。

MDCK细胞缺氧模型的建立及机制研究

目的建立犬肾细胞（Madin—Darby canine kidney，MDCK）缺氧模型，进一步探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）在缺氧性细胞损伤中的活性改变。方法将MDCK细胞置于体积分数为5％CO：和95％N2的有机玻璃调节性密闭容器中分别培养24、36、48、72、84h，MTT实验检测细胞的存活力，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测JNK（e—Jun NH2 terminal protein kinase）和p38MAPK的磷酸化活性。结果MDCK细胞缺氧24、36、48、72、84h后，与正常对照组相比，MTFD值均明显下降（P〈0．01）。MDCK细胞缺氧后，JNK和p38MAPK的磷酸化水平增高。结论此方法可以成功建立操作简便、有效的MDCK细胞缺氧模型，且是通过激活JNK、p38MAPK引起缺氧性细胞损伤。

一种新的小白鼠低气压性缺氧模型实验装置

目的 :研制一种新的小白鼠低气压性缺氧模型实验装置用于实验教学。方法 :采用低值、耐用材料加工制作 ,进行动物实验 ,评价该实验装置的实用性。结果 :实验表明该装置操作简单 ,复制的小鼠低气压性缺氧模型与人的高原性缺氧的发病原因 ,发病机理近似。结论 :该实验装置实验结果稳定 ,可重复性强 。

细胞色素C在小鼠肝损伤及缺氧模型中的作用

目的考虑研究细胞色素C对小鼠肝损伤及缺氧模型的作用。方法以CCl4 诱发的小鼠急性肝损伤模型 ,以及常压耐缺氧实验、氰化钾化学性缺氧实验、小鼠断头张口喘息时间、尾静脉注射空气引起心脑缺氧实验 4种耐缺氧实验模型研究细胞色素C的作用。结果细胞色素C在上述各模型中均无显著的药理学作用。结论细胞色素C对小鼠的肝损伤及缺氧模型无保护作用。

大鼠预缺氧模型的制备

目的制备简单易行的大鼠预缺氧模型,并观察其对脑组织低氧诱导因子-1(HIF-1)α蛋白及mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠12只,随机分为缺氧组和对照组。缺氧组在固定体积的容器中缓慢输入混合气体,调节氧气和氮气的流入速度,使测氧仪监测到的O2浓度始终保持在12%,然后放入大鼠,每天4 h;对照组大鼠在相同容器中通入空气,每天4 h。7 d后进行免疫组化和RT-PCR测定脑组织HIF-1α蛋白及mRNA表达。结果缺氧组较对照组脑组织中HIF-1α蛋白和mRNA表达增多(P<0.01)。结论此模型简单易行,达到预缺氧的要求。

低氧工作站建立大鼠原代心肌细胞缺氧模型

心肌梗死、缺血再灌注损伤等多种心血管疾病的发生和发展过程中多伴有细胞缺氧,进而引起细胞损伤,影响心正常生理功能.体外心肌细胞缺氧模型能够较好排除神经、体液等因素及个体差异性的影响,更加有利于对缺氧性心肌损伤发生机制的研究,为探讨如何保护缺氧心肌提供重要理论基础.因此,建立体外细胞缺氧模型是从细胞和分子水平研究该类疾病的重要方法,在多种缺血缺氧性疾病中均得到广泛应用.目前,国内外应用较多的心肌细胞缺氧模型包括物理法缺氧模型和化学法缺氧模型.如何更好地模拟体内真实缺氧环境,建立更加稳定、理想的缺氧模型,一直是该领域研究的关键环节之一.

细胞-动物缺血缺氧模型建立及特点

周围血管的缺血缺氧性疾病是血管外科领域的一大类常见病多发病,如动脉闭塞性疾病引起严重肢体缺血、血管炎性疾病及静脉血栓栓塞性疾病等。目前很多缺血缺氧性疾病的发病确切病因并不明确,科研人员设计了许多模型模拟研究这类疾病的发病机制和特点。下面针对细胞、组织和动物模型等模型结合文献作一综述。1培养细胞缺氧模型血管疾病可引起机体或组织的血循环障碍。

新生猪缺氧模型中循环内皮细胞观察

目的 探讨新生猪缺氧时循环内皮细胞的形态学变化。方法 复制新生猪缺氧模型 (HM) ;从富含血小板血浆中分离循环内皮细胞 (circulatingendothelialcell,CEC) ;采用ⅧR :Ag间接免疫荧光进行检测 ,黄绿色荧光着色细胞为循环内皮细胞。结果 对照组CEC为 2 .17± 0 .82× 10 9/L ,HM组为 3.0 7± 0 .93× 10 9/L ,两组有显著差异 (P <0 .0 1) ;在形态学上CEC分为 3种 :①核清晰可见 ,胞浆丰富 ;②核隐约可见 ,胞浆少见 ;③核缺失 ,细胞明显皱缩。Ⅷ :Ag荧光检测以上 3种细胞均发现较多的黄绿色荧光着色。结论 HM组中CEC明显增多 ,提示缺氧对血管内皮细胞有明显损伤作用 ,CEC可作为血管损伤的指示物之一。