消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注损伤PC12细胞的保护作用

目的:观察消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注损伤肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的作用。方法:以PC12细胞缺氧缺糖再灌注损伤模拟脑缺血再灌注损伤,研究消栓肠溶胶囊在0. 01～10. 00 mg/L浓度范围内对其的作用,采用噻唑蓝法(MTT法)检测PC12细胞的存活率;乳酸脱氢酶(LDH)法检测PC12细胞损伤程度;酶联免疫(ELISA)法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和凋亡相关因子P53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,BCL-2)、BCL-2关联X蛋白(bcl2-associated X protein,Bax)和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)的水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测p53 mRNA、Bax mRNA和caspase-3 mRNA的表达;分光光度法检测超氧化歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平,以及采用荧光酶标仪检测活性氧(ROS)的表达。结果:与模型组比较,消栓肠溶胶囊各剂量组干预后,缺氧缺糖再灌注诱导的PC12细胞的存活率显著增加(P <0. 05),细胞外LDH比例显著减少(P <0. 05),MMP-9、P53、Bax、Caspase-3、MDA和ROS表达都显著减少(P <0. 05),而BCL-2表达和SOD活性都显著增加(P <0. 05)。结论:消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注诱导的PC12细胞损伤具有明显保护作用,能减少细胞凋亡相关因子表达,其机制可能与抑制MMP-9表达和减轻氧化应激损伤有关。

三七总皂苷对体外培养的海马神经干细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用

目的：探讨三七总皂苷对缺氧缺糖一再灌注损伤新生大鼠海马神经干细胞的保护作用及其机制。方法：新生24h内大鼠海马神经干细胞培养采用无血清培养法，选用缺氧一复氧结合缺糖一复糖的方法，对其进行造模，实验分对照组、缺血再灌注组与三七总皂苷大、中、小剂量组，行MTT法检测和免疫荧光双标显色。结果：MTT法显示，缺氧缺糖-再灌注组细胞活性和存活率较对照组明显降低；三七总皂苷大剂量组细胞活性和存活率较缺血再灌注组无显著差异；三七总皂苷中、小剂量组细胞活性和存活率与模型组比较显著升高，其中尤以小剂量组最为明显。缺血再灌注组阳性细胞数较对照组显著减少。三三七总皂苷小剂量组阳性细胞数较缺血再灌注组显著增多。结论：i七总皂苷对缺氧缺糖一再灌注损伤的新生大鼠海马神经干细胞有保护作用。

黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用

目的观察黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷治疗脑缺血-再灌注损伤的作用机制。方法选用SH-SY5Y神经细胞,采用缺氧-复氧结合缺糖-复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血-再灌注损伤,观察黄芩苷对此损伤的治疗作用。结果缺氧、缺糖8h结合复氧、复糖12h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞线粒体的活性下降,凋亡率明显上升;而黄芩苷可以显著减轻上述损伤。结论黄芩苷对缺氧、缺糖-再灌注损伤的神经细胞有保护作用。

丹皮酚对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经元EAA、NMDA受体表达的影响及机制探讨

目的观察丹皮酚对缺糖缺氧（OGD）再灌注损伤大鼠海马神经元兴奋性氨基酸（EAA）、N．甲基．D．天门冬氨酸（NMDA）受体表达的影响，探讨该药的神经保护作用机制。方法原代培养新生大鼠海马神经元8～12d后随机分为4组，其中对照组正常换液培养；模型组、丹皮酚组、地佐环平（MK-801）组均制备OGD再灌注损伤模型，在此基础上丹皮酚组于每个再灌注时间点前分别加入丹皮酚，MK-801组则加入MK-801溶液；倒置相差显微镜下观察神经元一般形态学变化，用MTr法测定神经元存活率，分别采用放射配基结合实验及RT-PCR法测定NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达，以氨基酸分析仪检测EAA含量。结果模型组神经元肿胀或变形，突起缩短并逐渐消失，胞质内颗粒变性明显、甚至完全崩解；丹皮酚组及MK-801组神经元形态改变均较模型组减轻，胞体完整，突起较清楚，基本保持完整。与对照组比较，模型组神经元存活率明显降低，NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达及E从含量明显升高，而丹皮酚组及MK_801组上述指标均较模型组明显改善（P均〈0．05）。结论丹皮酚对离体培养的大鼠海马神经元OGD再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能与抑制EAA及NMDA受体表达有关。

肌肽对大鼠脑片缺氧缺糖/再灌损伤的保护作用

目的在离体脑片缺氧缺糖/再灌损伤模型上,评价肌肽对脑组织的保护作用。方法肌肽预处理后,用缺氧缺糖/再灌(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/RP)来制备大鼠离体脑片损伤模型。以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法检测脑片活性;HPLC法检测海马脑片中ATP、ADP、AMP含量;荧光法检测脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)。结果与对照组相比,缺氧缺糖/再灌损伤可以明显损伤大鼠海马脑片,TTC染色颜色变浅,A490 nm明显下降,ATP和ADP含量明显降低,而AMP含量明显升高,ROS明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,缺氧缺糖/再灌损伤前预先加入1000、200、40μg/m L肌肽预处理15 min可显著抑制缺氧缺糖/再灌引起的损伤,TTC染色颜色加深,A490 nm明显升高,ATP、ADP、AMP含量升高,ROS含量降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论肌肽可减轻缺氧缺糖/再灌导致的损伤,其机制可能与其改善脑组织能量代谢,增强抗氧化能力有关。

乙酰葛根素对缺糖缺氧大鼠海马神经元NMDA受体的影响

目的：探讨乙酰葛根素（化合物N-2211）对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经元保护作用的机制。方法：原代培养大鼠海马神经元，根据再灌注不同时间（1h，6h，12h，24h）及药物不同剂量（1．6μmol·L^-1，0．4μmol·L^-1，0．1μmol·L^-1）将神经元随机分为17组，每组细胞均在倒置相差显微镜下动态观察低糖低氧再灌注不同时间一般形态学变化，MTT检测不同时间神经元活性，氨基酸分析仪测定谷氨酸含量，液闪测量法测定NMDA受体结合力，PT—PCR半定量检测NMDA受体NR1亚基的表达，荧光分光光度计测定神经元内游离Ca^2＋含量。结果：乙酰葛根素各浓度明显减轻神经元形态改变，MK-801（10μmol·L^-1）有相同作用；MTY结果提示乙酰葛根素可提高光密度，较MK-801作用显著；乙酰葛根素高、中浓度及MK-801均能降低再灌注各时间点谷氨酸含量，乙酰葛根素低浓度虽能降低谷氨酸含量，但无统计学意义；乙酰葛根素高、中、低浓度不同时间点的受体结合力均比损伤组降低，作用优于MK-801；RT—PCR结果显示乙酰葛根素低、中、高浓度及MK-801组不同时间点的NRI亚基mRNA表达均比损伤组降低；荧光检测结果提示三种浓度乙酰葛根素均可降低神经细胞内Ca^2＋浓度，MK-801组亦有相同作用。结论：乙酰葛根素可以减轻神经元的损伤，降低NMDA受体结合力，减少NMDA受体NR1亚基的表达及抑制缺糖缺氧再灌注所致的钙超载。

枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧再灌注损伤的影响

目的:观察枸杞多糖对HT22细胞缺糖缺氧再灌注损伤的影响。方法:构建HT22细胞缺糖缺氧再灌注损伤模型,设正常组、模型组、枸杞多糖100,50和25 mg·L^(-1)组,检测细胞存活率;并通过HE染色观察形态学改变;检测细胞内SOD,GSH-PX,MDA,T-AOC;利用流式细胞术检测线粒体膜电位。结果:枸杞多糖100和50 mg·L^(-1)组能明显提高细胞存活率,显著改善缺氧缺糖再灌注损伤引起的形态改变;可显著提高细胞内SOD,GSH-PX及T-AOC,减少MDA的产生;改善线粒体膜电位下降。结论:枸杞多糖能够显著减轻缺糖缺氧再灌注损伤引起的HT22细胞过氧化损伤。

基于网络药理学与体外实验探讨川芎活性成分治疗缺血性脑卒中的作用机制

目的 运用网络药理学和体外细胞实验探究川芎活性成分治疗缺血性脑卒中的潜在作用机制。方法检索TCMSP数据库、Genecards数据库、Drugbank数据库等及相关文献,获得川芎活性成分、作用靶点及缺血性脑卒中相应疾病靶点,并将作用靶点与获得的疾病靶点的交集作为潜在靶点;利用String平台,对潜在靶点构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络;采用R语言软件包对潜在靶点进行基因本体(Gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,然后使用Cytoscape软件分析其网络拓扑结构,筛选其核心靶点,并进行分子对接验证。在此基础上,通过CCK-8法检测川芎中的活性成分对缺氧缺糖/再灌注损伤细胞模型的作用,免疫印迹法(Western blot)验证川芎单体成分对相关靶点蛋白的影响。结果 川芎治疗缺血性脑卒中的主要潜在活性成分有16个;药物-疾病靶点有53个;涉及的信号通路主要有神经元神经活性配体-受体相互作用信号通路、钙离子信号通路、血管内皮生长因子信号通路等;关键核心靶点与活性成分藁本内酯[(Z)-Ligustilide]、叶酸(Folic acid)、川芎哚(Perlolyrine)结合具有稳定构象。体外实验结果表明,川芎活性成分藁本内酯能提高缺氧缺糖/再灌注损伤细胞的存活率,并上调转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平。结论 川芎多种活性成分可能通过作用于血管内皮生长因子A(VEGFA)、前列素内环氧化物合成酶2(PTGS2)、雌激素受体(ESR1)、TGFB1等靶点治疗缺血性脑卒中,为川芎活性成分治疗缺血性脑卒中的作用机制研究提供了科学参考。