地佐环平对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响

目的:观察N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK-801对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法:新生6～9dSD大鼠断头取脑,制备海马脑片,将各孔脑片单纯随机分为3组,分别为正常对照组(HOTC)、单纯缺氧缺糖组(OGD)和预加MK-801再缺氧缺糖组(MK-801+OGD)。海马脑片进行缺氧缺糖培养,最后进行免疫组织化学染色和图像分析处理。结果:各组海马脑片CA1区均有不同程度Bcl-2,Bax蛋白表达。OGD组Bcl-2蛋白的表达(15.7±1.1)弱于HOTC组(18.5±0.9)和MK-801+OGD组(18.0±0.9),差异均有显著性意义(F=6.495,P<0.05);OGD组Bax蛋白的表达(13.1±2.5)强于HOTC组(7.3±1.1)和MK-801组(8.7±1.1),其差异均有显著性意义(F=9.770,P<0.05)。同时,OGD组CA1区出现细胞缺失形成的空洞,其他两组与OGD组相比有所减少。结论:MK-801可增强缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,并减轻该区锥体细胞损伤程度。

Bcl-2、Bax蛋白在NRs抗体预处理后缺氧缺糖海马脑片CA1区的表达变化

目的 :观察用NMDA受体亚单位抗体预处理后再缺氧缺糖的海马脑片CA1区Bcl -2和Bax蛋白的表达变化。方法 :将体外培养至 2周的海马脑片分为正常对照组 (HOTC组 ) ,实验对照组 (仅分别预加NR1抗体、NR2A抗体、NR2B抗体不缺氧缺糖 ) ,实验组 (分别预加NR1抗体、NR2A抗体、NR2B抗体后再缺氧缺糖 1hr)。作HE染色 ,Bcl-2、Bax免疫组化反应染色。结果 :Bcl -2蛋白在NR1+OGD组、NR2A +OGD组和NR2A +NR2B +OGD组区的表达均明显弱于OGD组 (3组均P <0 .0 5 ) ;其在NR2B +OGD组和HOTC组的表达则强于OGD组 (两者P <0 .0 5 )。Bax蛋白在NR1+OGD组、NR2A +OGD组和NR2A +NR2B +OGD组的表达均强于OGD组 (NR2A +OGD组P <0 0 5 ) ;在NR2B +OGD组和HOTC组其表达则明显弱于OGD组 (后者P <0 .0 5 )。结论 :单纯缺氧缺糖可引起海马脑片CA1区锥体细胞的损伤同时引起Bcl -2蛋白和Bax蛋白的表达变化 ;预加NMDA受体亚单位NR1、NR2A抗体和NR2A +NR2B抗体可以加重缺氧缺糖性海马脑片CA1区细胞损伤程度 ;

Bcl-2、Bax蛋白在NRs抗体预处理后缺氧缺糖海马脑片CA_1区的表达变化

运用海马脑片培养技术、海马脑片缺氧缺糖方法、免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察用 NMDA受体亚单位抗体预处理后再缺氧缺糖的海马脑片 CA1 区 Bcl-2和 Bax蛋白的表达变化 ,以探究其亚单位与海马脑片缺氧缺糖性损伤的关系。结果显示 ,各实验组海马脑片 CA1 区均有不同程度 Bcl-2、Bax蛋白表达和细胞缺失形成的空洞。 Bcl-2蛋白在 NR1+ OGD组、NR2 A+ OGD组和 NR2 A + NR2 B+ OGD组 CA1 区的表达均明显弱于 OGD组 (3组均 P<0 .0 5 ) ;其在 NR2 B+ OGD组和HOTC组的表达则强于 OGD组 (两者 P<0 .0 5 )。 Bax蛋白在 NR1+ OGD组、NR2 A+ OGD组和 NR2 A+ NR2 B+ OGD组的表达均强于 OGD组 (NR2 A+ OGD组 P<0 .0 5 ) ;在 NR2 B+ OGD组和 HOTC组其表达则明显弱于 OGD组 (后者 P<0 .0 5 )。结论 :单纯缺氧缺糖可引起海马脑片 CA1 区锥体细胞的迟发性损伤 ,同时引起 Bcl-2蛋白和 Bax蛋白的表达变化 ;预加 NMDA受体亚单位 NR1、NR2 A抗体和 NR2 A+ NR2 B抗体可以加重缺氧缺糖性海马脑片 CA1 区细胞损伤程度 ;预加 NR2 B抗体则可减轻其损伤程度。提示 NMDA受体亚单位成分的变化可以调节 Bcl-2和 Bax蛋白在缺氧缺糖性海马脑片 CA1 区的表达 ,从而调节CA1

N-methyl-D-aspartate受体阻断剂MK801对离体海马脑片CA1区锥体细胞缺氧期间电生理的影响

目的 应用细胞内记录技术 ,研究 N- methyl- D- aspartate(NMDA)受体阻断剂 MK80 1对离体海马脑片 CA1区锥体细胞缺氧期间电生理的影响。方法 成年雄性 SD大鼠海马脑片随机分为单纯缺氧组 (Con组 ,n=1 0 )和 MK80 1组 (M组 ,n=1 0 )。Con组海马脑片给予 1 0分钟缺氧 ;而 M组的海马脑片在缺氧前 1 0分钟及 1 0分钟的缺氧期间分别应用 1 0 0 μmol/ L 的 MK80 1。所有脑片均给予 6 0分钟的复氧。应用细胞内记录技术记录海马 CA1区神经元缓慢去极化及快速去极化的时间、快速去极化的幅度。在复氧末 ,应用细胞内注入电流及经 Schaffer通路刺激 ,观察神经元对刺激的反应。结果 Con组海马 CA1区锥体神经元缓慢去极化速率为 (0 .2 2± 0 .0 5 ) m V/ s,显著高于 M组的 (0 .0 8± 0 .0 3) m V/ s (P<0 .0 5 ) ;NMDA受体阻断剂 MK80 1可以显著延迟神经元的快速去极化的时间 ,M组神经元的快速去极化时间为 (5 37± 1 39) s,显著高于 Con组的 (2 6 1± 2 6 ) s (P<0 .0 5 ) ;M组 CA1区神经元的快速去极化幅度为 (4± 1 3) m V,显著小于 Con组的 (5 3± 7) m V(P<0 .0 5 )。在复氧末 ,M组的 1 0例神经元中 ,9例神经元恢复对刺激的反应。结论 NMDA受体阻断剂可显著减轻神经元的缺氧性损伤 ,促进复氧后神经元功?

缺氧对大鼠海马脑片CA1区锥体神经元膜电位的影响

本文应用海马脑片细胞内记录技术，观察了ＣＡ１区锥体神经元膜的电学性质及缺氧对它的影响。发现缺氧可使锥体神经元膜电位呈现时相性变化，即缺氧早期（２－４ｍｉｎ）神经元膜电位出现超极化反应并伴随自发放电消失；缺氧４－７ｍｉｎ时膜呈现慢去极化，此时诱发电位逐渐消失；继续缺氧（８ｍｉｎ左右）膜出现快去极化直至膜电位的消失。用ＴＴＸ或无Ｃａ２＋人工脑脊液灌流脑片可显著地降低缺氧去极化幅度，延迟去极化的发生。结果提示，缺氧去极化的发生与Ｎａ＋、Ｃａ２＋跨膜内流有关。

血晶素对缺氧缺糖海马脑片血红素加氧酶-1表达的影响

目的观察血晶素（heroin）对缺氧缺糖（0GD）海马脑片损伤的保护作用及其对血红素加氧酶1（heme oxygenase-1，HO-1）蛋白表达的影响。方法取新生8～10dSD大鼠海马脑片，培养2周。将脑片分为正常培养对照组（HOTC），缺氧缺糖组（0GD），预加Hemin再缺氧缺糖组（Heroin＋OGD），预加HO-1抑制剂锌原卟啉（Znpp）再缺氧缺糖组（Znpp＋OGD）。应用免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察海马脑片HO-1蛋白表达，并观察神经元和星形胶质细胞形态学改变。结果HO-1在正常海马脑片的神经元和星形胶质细胞中均有弱阳性表达。与对照组比较，OGD组海马已失去正常结构，锥体细胞发生坏死，HO-1蛋白表达增强。与OGD组相比，Heroin＋0GD组海马脑片形态基本正常，锥体细胞数较多，H01蛋白的表达明显增强。Znpp＋OGD组海马结构消失，HO-1蛋白表达明显减弱。结论血晶素对缺氧缺糖海马脑片损伤有明显的保护作用，其机制可能与其诱导神经元和星形胶质细胞表达HO-1蛋白密切相关。

血晶素对缺氧缺糖海马脑片的保护作用及其分子机制

目的观察血晶素（Hemin）对海马脑片氧糖剥离（OGD）模型的保护作用并探讨其机制。方法取新生8～10dSD大鼠，制备厚约400μm海马脑片，培养2周后筛取完好无特异荧光着色的脑片，分为正常培养对照组（HOTC）、缺氧缺糖组（OGD）、预加Hemin再缺氧缺糖组（Hemin＋0GD）和预加血红素加氧酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）抑制剂锌原卟啉（Znpp）再缺氧缺糖组（Znpp＋OGD）。除HOTC组外，其余各组在5％C02、95％N2的混合气体中培养1．5小时，其后恢复培养24小时。海马脑片冰冻连续冠状切片，应用免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察海马脑片脑红蛋白（Neuroglobin，Ngb）和HO-1表达变化，并观察神经元形态学改变。结果海马脑片发生缺氧缺糖时，神经元中Ngb蛋白和HO-1蛋白表达增加，血晶素促进神经元Ngb蛋白和HO-1蛋白表达，并减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤。Znpp抑制神经元Ngb蛋白和HO-1蛋白表达，并加重海马脑片缺糖缺氧性损伤。结论血晶素可减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤，其机制可能通过诱导HO-1表达从而增加神经元Ngb表达发挥作用。