水苏碱调节Hippo-YAP信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探究水苏碱(stachydrine,STA)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠的神经保护作用,并分析其作用机制。方法将新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、STA低剂量(5 mg/kg)组、STA中剂量(10 mg/kg)组、STA高剂量(20 mg/kg)组、维替泊芬(10 mg/kg)+STA高剂量(20 mg/kg)组,除假手术组外,其余大鼠构建HIBD大鼠模型。对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用Morris水迷宫实验进行认知功能评价,测定各组大鼠脑含水量和脑指数,HE染色、尼氏染色观察脑组织神经元损伤,TUNEL染色观察脑组织神经元细胞凋亡情况,Western blot法检测YES相关蛋白(YES associated protein,YAP)、p-YAP、哺乳动物STE20样蛋白激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)、p-MST1、具有PDZ基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达。结果与假手术组比较,HIBD组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05);与HIBD组相比,STA低、中、高剂量组海马组织损伤改善,尼氏小体增加(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著降低(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著增加(P<0.05);与STA高剂量组相比,维替泊芬+STA高剂量组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05)。结论STA可能通过调控Hippo-YAP信号通路、减少神经损伤和神经元细胞凋亡、改善神经功能,发挥对HIBD新生大鼠的神经保护作用。

基于NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡探讨针康法对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的影响

目的:观察针康法对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠神经元NLRP3炎症小体及细胞焦亡的影响,探讨其改善缺氧缺血性脑损伤后运动功能缺损的可能机制。方法:选择120只7 d龄大鼠分为正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、头穴丛刺组(C组)、康复训练组(D组)和针康组(E组),再均分为24 d、7 d和14 d 3个时间点。结扎颈总动脉构建HIBD动物模型。C组针刺百会以及左右各旁开2 mm处,1次/d,每次留针2 h;D组进行转笼转棒训练,1次/d,10 min/次;E组在头穴丛刺的基础上进行转笼转棒训练。在各时间点,采用网屏实验评定运动功能缺损,TUNEL+Caspase-1免疫荧光双标法观察海马区神经细胞焦亡的情况,蛋白印迹法检测海马区NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N端蛋白表达。结果:相较于A组,经缺氧缺血造模处理的4组在各时间点网屏实验评分和海马区神经细胞焦亡率均显著升高,NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N端蛋白的表达显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);相比较B组,各治疗组在各时间点网屏实验评分和海马区神经细胞焦亡率均显著减少,NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N端蛋白的表达水平降低,其中E组的疗效最明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:针康法可改善HIBD新生大鼠的运动功能缺损,且疗效优于单纯针刺或康复疗法,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡有关。

β淀粉样蛋白对缺氧缺血性脑损伤新生鼠神经元凋亡影响的实验研究

目的:通过建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,以β淀粉样蛋白(Aβ)为切入点,研究其在模型的表达以及与神经元凋亡的关系,探讨Aβ在新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型中对神经元的作用及机制。方法:建立10日龄新生大鼠缺血性脑损伤模型,模型后2、4、8、24 h心脏灌注,分别检测脑组织中Aβ、脑内淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE1)、Caspase-3、Cleaved caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达,BACE1的mRNA表达。使用BACE1抑制剂干预,实验分为三组,缺氧缺血组、抑制剂组和溶剂组,抑制剂组在缺氧缺血后即给予BACE1抑制剂AZD3293处理24 h后再次检测以上指标。结果:APP、Aβ的蛋白表达、BACE1的蛋白表达和mRNA水平在建模后呈时间依赖的上升,24 h达到高峰。同时,促凋亡蛋白Cleaved caspase-3在建模后也呈时间依赖的上升,24 h达到高峰。而在缺氧缺血2 h后,凋亡抑制蛋白Bcl-2的蛋白水平显著升高(P<0.05)。之后逐渐降低,24 h最低。当使用BACE1抑制剂后,Aβ及BACE1在脑组织中的表达显著下降(均P<0.05),而BACE1mRNA的表达没有变化(P>0.05)。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达明显下降(P<0.05),同时,Bcl-2蛋白的表达也显著升高(P<0.05)。结论:在新生鼠HIBD时Aβ产生增多,应用BACE1抑制剂可降低Aβ的表达,增加Bcl-2的表达,减轻神经元凋亡。

姜黄素改善缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期神经行为缺陷的机制

目的探讨姜黄素减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠相关神经炎性反应的作用机制并且评估其对缺氧缺血性脑损伤远期神经行为的影响。方法2023年1—6月在武汉大学人民医院中心实验室进行实验。选用7日龄新生SD大鼠66只,采用随机数字表法分为假手术组(n=22)、缺氧缺血脑损伤组(HIBD组,n=22)和缺氧缺血脑损伤+姜黄素组(HIBD+姜黄素组,n=22)。造模后24 h采用Longa评分评估造模是否成功,造模后48 h通过负性趋地反射、翻正反射评估短期神经行为;4周后采用圆筒实验、水迷宫实验、转角实验、爬杆实验评估远期神经行为;采用ELISA试剂盒检测脑组织炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平;采用Western-blot法检测脑组织蛋白(STAT3、p-STAT3)水平。结果造模24 h后,HIBD组(n=18)与HIBD+姜黄素组(n=15)新生大鼠Longa评分为1~3分提示造模成功。短期行为学评估表明,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组负性趋地反射和翻正反射时间缩短(P<0.05)。远期神经行为学评估表明,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组圆筒实验大鼠左前肢使用率明显增加、水迷宫实验穿越平台潜伏期缩短、穿越平台象限次数增加、转角实验右转得分率减少、爬杆实验中爬杆时间缩短(P<0.01)。ELISA检测显示,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平下降(P<0.05)。蛋白免疫印迹技术显示,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组脑组织中p-STAT3/STAT3水平降低(P<0.01)。结论姜黄素可通过抑制STAT3磷酸化介导的神经炎性反应并改善缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经行为学缺陷。

新生儿缺氧缺血性脑损伤程序性细胞死亡及康复治疗干预机制的研究进展

新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是一种脑细胞缺血缺氧性坏死病变,可导致神经发育性残疾,降低儿童生存质量,给患儿家庭及社会带来沉重负担。程序性细胞死亡(PCD)作为一种重要的神经元细胞死亡调控机制,参与HIBD的发生发展。康复治疗是改善HIBD后功能障碍的主要干预方式,临床应用广泛,但其效应机制目前尚未完全阐明。康复治疗可调控PCD,是促进HIBD后功能恢复的关键。因此,深入研究PCD特别是凋亡、自噬、焦亡、铁死亡在HIBD中的作用机制及康复干预机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

褪黑素通过PI3K/AKT通路减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠大脑皮层神经细胞自噬的研究

目的 观察褪黑素(melatonin,Mel)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠大脑皮层神经细胞自噬的影响,并从PI3K/AKT信号通路探讨其机制,为Mel的临床应用提供依据。方法 将7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组及Mel组(各组n=9)。采用经典RiceVannucci法构建新生大鼠HIBD模型。采用苏木精-伊红和尼氏染色法观察新生大鼠大脑皮层神经细胞形态;免疫荧光染色和Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3)及Beclin-1蛋白表达水平;免疫组化和Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphoinositide 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白表达水平;通过Pearson相关性分析探讨Mel组与HIBD组自噬与PI3K通路的相关性。结果 建模后24h,假手术组新生大鼠大脑皮层神经细胞大小形态正常、排列规则,HIBD组神经细胞胞体肿胀、排列不规则,Mel组神经细胞排列较规整、形态相对正常。假手术组尼氏小体形态规整,HIBD组尼氏小体形态异常,Mel组尼氏小体形态尚规整。HIBD组LC3及Beclin-1平均荧光强度较假手术组增加,Mel组较HIBD组减少(P<0.05)。HIBD组p-PI3K^(+)、pAKT^(+)细胞数较假手术组减少,Mel组较HIBD组增加(P<0.05)。HIBD组LC3、Beclin-1蛋白表达水平较假手术组增加,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平较假手术组减少(P<0.05);Mel组LC3、Beclin-1蛋白表达水平较HIBD组减少,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平较HIBD组增加(P<0.05)。相关性分析显示,Mel组与HIBD组损伤侧大脑皮层LC3、Beclin-1蛋白平均荧光强度差值与p-PI3K^(+)、p-AKT^(+)细胞数差值均呈负相关(P<0.05)。结论 Mel可抑制HIBD新生大鼠大脑皮层神经细胞过度自噬,从而减轻HIBD,其机制与PI3K/AKT通路相关。

基于网络药理学研究红景天苷治疗新生小鼠缺氧缺血性脑损伤的作用机制

目的采用网络药理学和实验验证探讨红景天苷治疗新生小鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的作用机制。方法利用PubChem、pharm Mapper、Swiss Target Prediction和Similarity Ensemble Approach数据库检索并预测红景天苷作用靶点,借助DisGeNET、GeneCards和OMIM数据库获得HIBD疾病作用相关靶点,绘制韦恩图确定交集基因;将交集基因导入STRING平台构建蛋白质相互作用网络,结合STRING数据库和Cytoscape软件做可视化处理,筛选作用靶点,通过拓扑网络分析得到核心靶点;利用DAVID数据库行潜在作用靶点GO功能和KEGG通路富集分析。构建新生小鼠HIBD模型,设置假手术组、缺氧缺血组、安慰剂组和红景天苷组,分别采用TTC染色和HE染色评估新生小鼠脑损伤;借助Western blot检测与细胞凋亡相关蛋白及PI3K/Akt信号相关蛋白的表达;利用Y迷宫实验、拉力测试和角落实验验证红景天苷改善小鼠行为学表现的效果。结果网络药理学分析显示,共筛选获得有效药物靶点176个,有效疾病靶点2173个,“药物-疾病”交集靶点61个,核心靶点10个;KEGG通路富集分析发现红景天苷的作用机制与PI3K/Akt信号通路相关;动物实验发现,与缺氧缺血组比较,红景天苷可促进HIBD小鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt表达,提升Bcl-2/Bax表达水平,抑制Cleaved-caspase-3的表达,减轻皮层神经元和海马神经元损伤,减少小鼠HIBD诱导的脑梗死体积和脑萎缩,提高小鼠记忆和运动能力(P<0.05,P<0.01)。结论红景天苷通过激活PI3K/Akt信号通路改善神经元凋亡,可用于治疗新生小鼠HIBD。

藁本内酯抑制缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织凋亡相关蛋白的表达

目的:通过检测体内外缺氧缺血条件下NOD样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、GSDMD-N蛋白水平评价藁本内酯(LGSL)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的神经保护作用。方法:选取7日龄SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、HIBD组和LGSL组各10只,采用左颈总动脉双重结扎构建HIBD模型,体外建立小胶质细胞氧糖剥夺(OGD)模型(OGD/R)。采用CCK-8评估不同浓度LGSL干预24 h对OGD/R小胶质细胞活力的影响;通过免疫印迹评估20μM LGSL对体内外缺氧缺血条件下NLRP3、Caspase1、IL-1β、GSDMD-N表达的影响。结果:在体内外模型中,NLRP3、IL-1β、Caspase1及GSDMD-N表达均上调(P<0.05);20μM LGSL干预24 h后,NLRP3、IL-1β、Caspase1及GSDMD-N表达均下调(P<0.05)。结论:LGSL可以显著抑制新生大鼠体内外因缺氧缺血引起的神经炎症反应。

天麻素经PI3K/AKT通路改善新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后小胶质细胞介导的炎症反应

目的探讨天麻素通过PI3K/AKT信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后活化小胶质细胞介导的炎症反应的作用机制。方法将39只3日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(sham,n=9)、缺氧缺血模型组(HIBD,n=15)、天麻素处理组(HIBD+G,n=15)。采用Western blotting检测HIBD后TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β1蛋白的表达;网络药理学筛选天麻素治疗HIBD的潜在作用靶点;Western blotting检测HIBD和氧糖剥夺(OGD)诱导活化的小胶质细胞中PI3K/AKT信号通路的表达;CCK8检测PI3K/AKT通路特异性抑制剂LY294002对BV-2小胶质细胞的细胞毒性作用;RT-qPCR检测LY294002干预后天麻素对TNF-α和TGF-β1的mRNA水平的影响。结果Western blotting显示,与HIBD组相比,天麻素降低缺血侧胼胝体区TNF-α和IL-1β的蛋白表达(P<0.05),促进IL-10和TGF-β1的蛋白表达(P<0.05);网络药理学显示,PI3K/AKT信号通路显著富集,且天麻素与PI3K之间具有较好的结合能力;Western blotting显示,与HIBD组、OGD组相比,天麻素促进PI3K和AKT的磷酸化水平(P<0.05);CCK8结果显示LY294002在0~120μmol/L浓度范围内对BV-2小胶质细胞没有细胞毒性作用;RT-qPCR结果显示,与对照组相比,OGD组TNF-α的mRNA水平升高,TGF-β1的mRNA水平降低(P<0.05);天麻素干预后降低TNF-α的mRNA水平,升高TGF-β1的mRNA水平(P<0.05);LY294002处理后TNF-α的mRNA水平进一步升高,TGF-β1的mRNA水平进一步降低(P<0.05);而LY294002与天麻素联合用药后TNF-α和TGF-β1的mRNA水平无明显变化。结论天麻素能抑制HIBD后活化小胶质细胞介导的炎症反应,其作用机制与PI3K/AKT信号通路有关。

通窍活血汤调节Nrf2通路对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤血管保护及神经功能改善作用研究

[目的]研究通窍活血汤对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤血管保护和神经功能改善作用及对核转录因子2(Nrf2)通路的调节作用。[方法]新生大鼠随机分为正常对照组(12只)及造模组(60只),采用颈总动脉结扎法建立缺血缺氧性脑损伤大鼠模型,并随机分为脑损伤组、通窍活血汤低、中、高剂量组及神经节苷脂组,每组12只,通窍活血汤低、中、高剂量组分别按照4、8、16 g/kg的剂量灌胃给予通窍活血汤,神经节苷脂组按照10 mg/kg的剂量腹腔注射神经节苷脂,每日1次,连续14 d,Morris水迷宫实验测定大鼠90 s内靶象限停留时间及穿越平台次数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)、可溶性血栓调节蛋白(sTM)、内皮素(ET)-1含量、血管组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及肿瘤坏死因子(TNF)-α表达水平、脑组织TNF-α、白介素(IL)-1β及IL-6表达水平,苏木精-伊红(HE)染色法测定海马组织病理学改变,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定海马组织Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、Janus激酶2(JAK2)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)m RNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定海马组织Nrf2、HO-1、JAK2、STAT3蛋白表达水平。[结果]与正常对照组比较,脑损伤组大鼠靶象限停留时间及穿越平台次数显著减少(P<0.05)。血管组织SOD表达水平,海马组织Nrf2、HO-1 m RNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。血清sEPCR、sTM、ET-1含量、血管组织MDA及TNF-α表达水平、脑组织TNF-α、IL-1β及IL-6水平、海马组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05)。与脑损伤组比较,通窍活血汤低、中、高剂量组及神经节苷脂组大鼠脑损伤组大鼠靶象限停留时间及穿越平台次数显著增加(P<0.05)。血管组织SOD表达水平、海马组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。血清s EPCR、sTM、ET-1含量、血管组织MDA及TNF-α表达水平、脑组织TNF-α、IL-1β及IL-6表达水平、海马组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且通窍活血汤不同剂量组间存在显著差异(P<0.05)。[结论]通窍活血汤能够显著抑制缺血缺氧性脑损伤大鼠神经损伤及脑组织炎症反应,抑制血管氧化应激损伤,发挥脑组织及血管的保护作用,其机制可能与调节Nrf2通路有关。

天麻素对大鼠分娩镇痛及新生鼠缺血、缺氧性脑损伤的影响及相关机制

目的探讨天麻素(gastrodin,GAS)对大鼠分娩镇痛及新生鼠缺血、缺氧性脑损伤的影响及可能的作用机制。方法将60只妊娠大鼠随机分为空白组、GAS低剂量组、GAS中剂量组、GAS高剂量组和阳性对照组,各12只。产程开始后GAS低剂量组、GAS中剂量组和GAS高剂量组分别腹腔注射50、100、150 mg·kg^(−1) GAS注射液(用生理盐水配制),阳性对照组尾静脉注射盐酸瑞芬太尼5μg·kg^(−1),空白组给予等量生理盐水。用热水甩尾法测定大鼠分娩痛阈值;用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平;用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,RTqPCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测大鼠脊髓组织中核因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)、NOD样受体蛋白3(NOD like receptor protein 3,NLRP3)mRNA和蛋白表达的情况;用Morris水迷宫实验评定各组新生鼠的学习记忆能力;测定各组新生鼠脑组织的含水量;用HE染色观察各组新生鼠海马组织CA1区的病理变化。结果与空白组比较,GAS高、中、低剂量组和阳性对照组大鼠痛阈值、新生鼠跨台次数升高,TNF-α、IL-1β、IL-6、p-NF-κB p65蛋白表达、NF-κB p65 mRNA表达、NLRP3 mRNA和蛋白表达水平、新生鼠逃避潜伏期和脑组织含水量均明显降低(P<0.05)。与GAS低剂量组比较,GAS中剂量组、GAS高剂量组和阳性对照组的TNF-α、IL-1β、IL-6、p-NF-κB p65蛋白表达、NF-κB p65 mRNA表达、NLRP3 mRNA和蛋白表达水平、新生鼠逃避潜伏期和脑组织含水量均明显降低(P<0.05)。与GAS中剂量组比较,GAS高剂量组和阳性对照组TNF-α、IL-1β、IL-6、p-NF-κB p65蛋白表达、NF-κB p65 mRNA表达、NLRP3 mRNA和蛋白表达水平、新生鼠逃避潜伏期和脑组织含水量也明显降低(P<0.05),而GAS高剂量组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GAS能够降低分娩大鼠产程中对疼痛的敏感度,减少促炎因子表达,改善神经炎症,缓解新生鼠脑损伤,可能是通过抑制NFκB/NLRP3信号通路发挥作用的。

LncRNA MEG3靶向调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠血-脑屏障的影响

目的探讨LncRNA MEG3通过调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生小鼠血-脑屏障的影响。方法90只C57BL小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、si-NC组、si-LncRNA MEG3组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组,每组15只。除对照组外,其余组小鼠构建HIBD模型,并采用Longa评分评估小鼠神经损伤情况;电镜观察脑组织周围血管内皮细胞超微结构;EB法测定小鼠血-脑屏障通透性;qRT-PCR法测定各组小鼠脑组织LncRNA MEG3、miR-17-5p水平;Western blotting法测定小鼠脑组织ZO-1、Occludin蛋白水平。结果与对照组相比,模型组小鼠血管内皮薄厚不均、多处呈现水肿状态;与模型组相比,si-LncRNA MEG3组小鼠血管内皮细胞逐渐连接紧密、薄厚较为均匀,水肿减少;与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组血管内皮细胞损伤加剧。与对照组相比,模型组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,si-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著降低,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论LncRNA MEG3沉默可能通过上调miR-17-5p,降低HIBD新生小鼠血-脑屏障通透性,维持血-脑屏障对大脑的保护作用,保护脑组织。

超声剪切波弹性成像对新生儿缺氧缺血性脑损伤的诊断价值探讨

目的探讨超声剪切波弹性成像(SWE)对新生儿缺氧缺血性脑损伤(HII)的诊断价值。方法64例新生儿作为研究对象,应用超声SWE技术对其颅脑内感兴趣区(ROI)进行弹性测量,ROI分别为左右侧脑室及基底节区脑实质,弹性成像的剪切波速度转化为杨氏模量表示组织硬度。分析新生儿基本信息;比较正常儿新生儿与HII患儿双侧侧脑室及基底节弹性值;分析新生儿双侧侧脑室及基底节弹性诊断效能。结果64例新生儿中正常新生儿30例,HII患儿34例。HII患儿左右侧侧脑室以及基底节区的均值(mean)、最大值(max)、最小值(min)、标准差(sd)均小于正常新生儿,差有显著统计学意义(P<0.05)。基于弹性均值,右侧侧脑室的曲线下面积(AUC)[95%置信区间(95%CI)]、阈值、敏感度、特异度分别为1.00(1.00,1.00)、5.34 kPa、100.00%、100.00%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.99(0.98,1.00)、5.20 kPa、97.06%、96.67%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.92(0.85,0.99)、6.32 kPa、88.24%、86,67%。基于弹性最大值,右侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为1.00(0.99,1.00)、11.37 kPa、97.06%、100.00%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.98(0.95,1.00)、8.98kPa、94.12%、100.00%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.69(0.55,0.83)、13.10 kPa、58.82%、96.67%。基于弹性最小值,右侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.91(0.82,0.99)、3.22 kPa、100.00%、76.67%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.73(0.60,0.86)、3.12 kPa、82.35%、66.67%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.76(0.63,0.88)、2.32 kPa、79.41%、76.67%。基于弹性标准差,右侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.98(0.96,1.00)、1.62 kPa、91.18%、96.67%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.97(0.93,1.00)、1.62 kPa、94.12%、93.33%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.70(0.57,0.83)、2.19 kPa、58.82%、86.67%。左右侧侧脑室比基底节区的诊断效能好且与最小值和标准差相比,均值和最大值的诊断效能更高。结论超声SWE测量脑实质弹性能很好地区分HII和正常新生儿,最佳位置为左右侧侧脑室旁脑实质,最佳弹性参数为均值和最大值,值得临床推广。

基于Nrf2/Gpx4通路研究右美托咪定对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠铁死亡及神经功能的影响

目的基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)信号通路,研究右美托咪定(DEX)对缺血缺氧性脑损伤(HIBD)新生大鼠铁死亡及神经功能的影响。方法构建HIBD新生大鼠模型,随机分为模型组、DEX(100μg/kg)组、DEX(100μg/kg)+抑制剂(Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇2 mg/kg)组,每组12只,另取12只新生大鼠作为对照组。对照组和模型组腹腔注射相同体积的0.9%氯化钠溶液。大鼠神经功能缺损程度评分(NDS)评价大鼠神经功能;氨基酸自动分析仪检测海马组织中谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)水平;尼氏(Nissl)染色检测海马区神经元形态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量;试剂盒检测海马组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、铁含量;蛋白免疫印迹检测海马组织中Nrf2、HO-1、Gpx4、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白(xCT)表达情况。结果与对照组比较,模型组海马区神经元形态异常,腹侧神经元轴突长短不一且排布不整齐,部分神经元呈背侧脱离趋势,NDS评分、海马组织中Glu、IL-6、TNF-α、NSE、MDA、铁含量升高(P<0.05),GABA、GSH含量及Nrf2、HO-1、Gpx4、xCT蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,DEX组海马区神经元形态相对饱满,腹侧神经元轴突较整齐,NDS评分、海马组织中Glu、IL-6、TNF-α、NSE、MDA、铁含量降低(P<0.05),GABA、GSH含量及Nrf2、HO-1、Gpx4、xCT蛋白水平升高(P<0.05);Nrf2抑制剂可减轻DEX对HIBD新生大鼠神经损伤的改善作用(P<0.05)。结论DEX能够激活Nrf2/Gpx4通路,抑制铁死亡,改善HIBD新生大鼠神经损伤。

新型氮氧自由基HPN对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺氧相关蛋白表达的影响

目的 探究新型氧氮自由基HPN对脑缺血再灌注损伤模型大鼠中缺氧相关蛋白表达的影响。方法 采用随机数字表法将60只雄性SD大鼠平均分为MCAO/R模型组、假手术组、HPN低、中、高剂量组(100、150、200 mg/kg),每组12只,模型组及HPN给药组采用改良的Longa线栓法构建右侧大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)模型,以仅分离右侧颈内动脉的假手术大鼠为对照,再灌注24 h后进行神经功能缺损症状评分;TTC染色测定脑梗死体积;HE染色观察各组脑区半暗带区病理变化;实时定量PCR检测大脑皮层中缺氧相关蛋白HIF-1a和VEGF的基因表达;Western blot检测大脑皮层中缺氧相关蛋白HIF-1a和VEGF的表达。结果 与MCAO/R模型组相比,HPN给药组中大鼠的神经功能得到明显改善(P<0.05),脑梗死体积明显减少,大脑皮层中HIF-1a和VEGF蛋白及基因表达明显降低(P<0.01)。与HPN低剂量组相比,HPN中、高剂量组大脑皮层中HIF-1a和VEGF蛋白及基因表达明显增加(P<0.05)。结论 新型氧氮自由基HPN在脑缺血再灌注损伤模型大鼠中具有显著的神经保护作用,且随着HPN给药剂量的增加,对神经保护作用越明显,并显著调节缺氧相关蛋白HIF-1a和VEGF的表达。

医用控温仪对缺氧缺血性脑病新生儿神经行为和神经损伤指标的影响

目的探讨医用控温仪对缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿神经行为和神经损伤标志物的影响。方法选取2019年7月至2021年10月浙江省台州医院收治的74例HIE新生儿作为研究对象,采用随机数字表法分为两组,每组37例。对照组予吸氧、降颅压、镇静及稳定血糖、血压及内环境等常规治疗,试验组在对照组基础上加用医用控温仪。两组均随访至出生后28 d。比较两组意识、反射及肌张力恢复时间,治疗前和出生28 d后的神经行为[采用新生儿神经行为测定量表(NBNA)评估]、发育缺陷程度[采用盖塞尔(Gesell)发育评估表评估]和血清神经损伤指标[神经元烯醇化酶(NSE)和髓鞘碱性蛋白(MBP)]水平,并统计两组1年内神经系统后遗症发生率。结果试验组意识、反射及肌张力恢复时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。出生28 d后,两组NBNA、Gesell评分均高于治疗前,血清NSE、MBP水平均低于治疗前,且试验组NBNA、Gesell评分高于对照组,血清NSE、MBP水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组1年内神经系统后遗症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论医用控温仪用于HIE新生儿中,不仅可加快意识、反射及肌张力恢复,且可改善神经行为,降低发育缺陷程度,减少神经系统后遗症的发生,与其可降低NSE和MBP水平、促进神经恢复和再生密切相关。

新生儿缺氧缺血脑损伤的识别与护理

本次临床医学研究工作的主要目的在于探讨新生儿缺氧缺血脑损伤的识别与护理对患儿康复的影响,主要是对对照组和观察组进行对比研究,评估不同护理模式对患儿健康的影响。方法 本研究将选择100名新生儿,分为对照组和观察组,对照组需要接受常规类型的新生儿护理模式,未进行缺氧与缺血脑损伤的检查。观察组新生儿接受新生儿缺氧缺血脑损伤识别与护理模式。对照组的护理模式主要包括常规监测与护理;喂养管理;体温调节。观察组新生儿的护理模式主要包括缺氧缺血风险评估与监测;神经系统评估与监测;缺氧缺血脑损伤护理计划实施;家庭护理指导;早期干预康复措施。两组新生儿在同一时间参与本次临床研究工作,经过医护工作人员的有效治疗和护理之后,借助相关的临床医学诊断数据,对比分析两组新生儿的各项临床医学检验数据以及综合指标,由此判断相关的治疗效果。结果 观察组新生儿在缺氧与缺血脑损伤的早期发现与干预方面表现出显著的优势,此类护理方法具备一定的应用与研究价值,使得新生儿的康复速度明显提高。相比之下,对照组新生儿在神经发育速度比较缓慢,存在明显的滞后现象。结论 本研究的相关结果强调了新生儿缺氧缺血脑损伤早期识别与护理的重要性,这也就意味着,采用缺氧缺血脑损伤护理模式对患儿实施全面的护理措施,可以显著改善其康复效果。因此,在新生儿护理实践中,引入缺氧缺血脑损伤的识别与护理模式属于一种有效的临床护理策略,可以在一定程度上提高新生儿脑健康水平。

杜鹃花总黄酮通过抑制TNF-α/caspase-8/caspase-3信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探索杜鹃花总黄酮(TFR)通过抑制TNF-α/caspase-8/caspase-3信号通路保护脑缺血再灌注(I/R)损伤的机制。方法采用大脑中动脉闭塞术(MCAO)建立大鼠I/R模型,将造模成功大鼠随机分为假手术(Sham)、脑缺血再灌注(MCAO)和脑缺血再灌注术后TFR 200 mg/kg干预(TFR 200 mg/kg)组,制备MCAO大鼠模型,在脑缺血再灌注损伤手术后,TFR 200 mg/kg组连续14 d给予TFR(200 mg/kg)药物溶液。术后14 d,依据大鼠神经功能评分,脑血流图观察脑血流情况,处死大鼠,苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织细胞形态学变化,试剂盒检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH或LD)和神经特异性烯醇化酶(NSE)两种酶活性;ELISA试剂盒检测白细胞介素-1(IL-1)和IL-6水平,Western blot和免疫组化同时检测大鼠脑组织中裂解型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、caspase-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白的表达水平。结果脑缺血再灌注处理后,MCAO导致了大鼠神经功能异常,神经功能评分指数显著升高,脑组织病理形态学和脑血流量变化明显,脑组织中cleaved caspase-3、caspase-8、TNF-α蛋白的表达水平显著增加,血清中LDH、NSE、IL-1、IL-6水平明显升高;TFR 200 mg/kg组大鼠神经功能评分明显降低,脑组织病理损伤显著改善,脑组织中cleaved caspase-3、caspase-8、TNF-α蛋白的表达以及血清中LDH、NSE、IL-1、IL-6水平降低。结论TFR可能通过抑制TNF-α/caspase-8/caspase-3信号通路减轻脑缺血缺氧性损伤。

青蒿琥酯通过抑制NLRP3炎性体激活和炎性细胞因子分泌减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的研究青蒿琥酯对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)的保护作用及其作用机制。方法7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、模型组、5 mg/kg青蒿琥酯组、10 mg/kg青蒿琥酯组、20 mg/kg青蒿琥酯组、6 mg/kg地塞米松组,每组18只。除假手术组外,其余各组建立HIBD模型,假手术组只需分离左颈侧总动脉,不行结扎和氮氧混合气体通气处理。在手术后,各组立刻腹腔注射对应药物,假手术组和模型组大鼠注射等体积的生理盐水,之后每日一次,共给药5次。末次给药1 h后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,大鼠处死后检测脑含水量,观察大鼠海马CA1区脑组织病理学改变,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,ELISA分别检测各组大鼠脑组织和外周血中白细胞介素1β(IL⁃1β)、IL⁃6、肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)的水平,Western blot法检测各组大鼠海马CA1区脑组织含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、含胱天蛋白酶募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase⁃1)蛋白表达。结果与模型组比较,(10、20)mg/kg青蒿琥酯组和地塞米松组大鼠神经功能缺损评分下降,脑组织病理损伤减轻,脑含水量明显减少,海马神经元细胞凋亡数明显减少,脑组织和外周血中IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α水平明显降低,NLRP3、ASC、caspase⁃1水平明显降低。结论青蒿琥酯能够改善HIBD新生大鼠的神经功能、缓解脑部损伤、减轻脑水肿,对HIBD起保护作用,这可能与抑制NLRP3炎性体激活,减少炎性细胞因子的分泌有关。

α7nAChR激动剂经内质网应激调控NLRP3炎症小体改善缺氧缺血性脑损伤的分子机制研究

目的探究α7nAChR激动剂通过介导内质网应激(ERS)调控NLRP3炎症小体表达对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的影响及可能机制。方法选择出生7 d左右的SPF级SD雄性大鼠48只,随机分为假手术组(S组)、模型组(HIBD组)、HIBD+α7nAChR激动剂PNU282987组(HP组),每组16只。HIBD组和HP组大鼠均进行HIBD模型复制;S组进行假手术,不做结扎和缺氧处理。HP组模型复制成功后1 h腹腔注射0.8 mg/kg PNU282987,HIBD组和S组同时间腹腔注射等量生理盐水。模型复制48 h后采用水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;HE染色观察脑组织病理变化;TTC染色法检测脑梗死面积;TUNEL法检测大脑皮质、海马CA1区神经细胞凋亡;Western blotting检测脑组织中NLRP3蛋白及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的相对表达量。结果水迷宫实验结果显示,3组大鼠逃避潜伏期、穿越圆台次数比较,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测结果显示,HIBD组和HP组大鼠血清IL-18、IL-1β水平较S组升高(P<0.05),HP组大鼠血清IL-18、IL-1β水平较HIBD组降低(P<0.05);HE染色结果显示,S组脑皮层完整,细胞排列正常,无明显神经元损伤,HIBD组可见脑皮层神经元排列较为紊乱,细胞间隙变宽,细胞膜破裂,HP组神经元排列紊乱,水肿程度、坏死程度较HIBD组轻;TTC染色结果显示,S组无明显梗死灶,HIBD组和HP组均可见白色梗死灶,其中HP组梗死面积占比明显低于HIBD组(P<0.05);TUNEL法结果显示,HIBD组和HP组大鼠脑皮层和海马CA1区神经细胞凋亡率较S组升高(P<0.05),HP组大鼠脑皮层和海马CA1区神经细胞凋亡率较HIBD组降低(P<0.05);Western blotting检测结果显示,HIBD组和HP组大鼠NLRP3、GRP78、CHOP蛋白相对表达量较S组升高(P<0.05),HP组NLRP3、GRP78、CHOP蛋白相对表达量较HIBD组降低(P<0.05)。结论α7nAChR激动剂可改善大鼠HIBD,其机制可能与其能抑制ESR途径、降低NLRP3炎症小体表达有关。