缺氧诱导因子-1α及脯氨酸羟化酶2在子宫内膜腺癌中的表达意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及脯氨酸羟化酶2(PHD2)在子宫内膜腺癌中的表达意义。方法选取2019年7月至2020年6月丹东市中心医院收治的40例子宫内膜腺癌患者作为子宫内膜腺癌组,选取同期40例增殖期子宫内膜患者作为增殖期内膜组,另选取同期40例不典型增生子宫内膜患者作为不典型增生组。3组均使用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测HIF-1α、PHD2,比较3组HIF-1α、PHD2表达,分析子宫内膜腺癌病理特征与HIF-1α、PHD2阳性表达情况。结果3组HIF-1α、PHD2阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜腺癌组HIF-1α阳性率高于不典型增生组、增殖期内膜组,且不典型增生组高于增殖期内膜组,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜腺癌组PHD2阳性率低于不典型增生组、增殖期内膜组,且不典型增生组低于增殖期内膜组,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜腺癌患者HIF-1α、PHD2的组织学分级、临床分期、肌层浸润、淋巴结转移占比比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α和PHD2表达异常会影响子宫内膜腺癌患者的肌层侵润、组织学分级、临床分期,因此,在子宫内膜腺癌疾病检查、诊断和治疗具有重要意义,能为子宫内膜腺癌的诊治提供可靠依据。

外源性脯氨酸羟化酶对人RPE细胞中缺氧诱导因子通路的负向调节作用

背景目前抗VEGF药物的应用已广泛用于眼部新生血管性疾病发病的治疗，但有部分患者的疗效并不理想，因此研究VEGF的上游基因缺氧诱导因子-1（HIF—1）及其限速酶脯氨酸羟化酶（PHDs）在新生血管形成中的作用具有重要的临床意义。目的探讨外源性PHDs在HIF-1激活通路中的负性调节作用。方法用Hela细胞提取RNA，采用逆转录PCR法从cDNA克隆PHD1、PHD2和PHD3，通过限制性内切酶构建pFLAG—PHD1、pFLAG—PHD2和pFLAG—PHD3质粒并通过基因测序进行鉴定。分别将人RPE细胞株（ARPE-19）在体积分数21％O2（常氧组）、1％O2（低氧组）和缺氧模拟剂（CoCl2，缺氧组）条件下进行培养，将pFLAG—PHD1、pFLAG—PHD2和pFLAG—PHD，质粒分别转染至培养的ARPE-19细胞中，pFLAG—CMV2转染作为空白对照。采用Westernblot法测定和比较转染细胞在不同氧环境培养下PHD1、PHD2和PHD3蛋白的表达强度；采用双荧光素酶报告系统评估各组细胞中HIF-1的转录活性。结果Westernblot法检测显示常氧组、低氧组和缺氧组ARPE-19细胞中均有PHD1、PHD2和PHD3蛋白的表达，各组细胞中PHD2的表达条带均强于PHD1和PHD3蛋白，差异均有统计学意义（P〈0．05）。pFLAG—CMX转染后常氧组细胞中内源性HIF-1活性反应低，低氧组和缺氧组细胞中HIF-1的转录活性明显升高，与空白对照组相比，pFLAG—PHD1、pFLAG—PHD2、pFLAG—PHD3转染后常氧组细胞中内源性HIF-1活性反应无明显变化（F=0．48，P〉0．05），而低氧及缺氧组细胞中HIF-1活性明显下降，与空白对照组比较差异均有统计学意义（F=24．30，112．67，均P〈0．05）。相同培养条件下，pFLAG—PHD：转染后细胞中HIF-1活性明显低于pFLAG—PHD，和pFLAG—PHD，转染细胞，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论PHDs对人RPE细胞中HIF-1的激活通路有明显的负向调节作用，其对低氧细胞和缺氧细胞中HIF-1转录活性的抑制作用明显强于常氧细胞，其中PHD2抑制HIF调节通路的作用明显强于PHD1和PHD3。

血管紧张素Ⅱ在翻译后水平影响血管平滑肌细胞缺氧诱导因子1α表达的机制

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)以及脯氨酸羟化酶2(PHD2)、缺氧诱导因子1抑制因子(FIH-1)、p-ERK表达的影响,探讨PHD2、FIH-1、p-ERK在AngⅡ作用下对HIF-1α表达的影响机制。方法 HUASMC分为三组:(1)对照组:正常培养基培养细胞6 h;(2)AngⅡ组:含AngⅡ的培养基(终浓度为10-6mol/L)培养细胞6 h;(3)AngⅡ+PD98059组:含PD98059的培养基(终浓度为10-5mol/L)预处理细胞1 h后,加入含AngⅡ的培养基(终浓度为10-6mol/L)培养细胞6 h。RT-PCR检测细胞HIF-1α、VEGF、PHD2、FIH-1的基因表达;Western blot检测上述目的蛋白表达及p-ERK表达。结果 (1)与对照组比较,AngⅡ增加HUASMC中HIF-1α、VEGF基因和蛋白表达(P<0.05),增加pERK蛋白表达(P<0.05),降低FIH-1基因和蛋白表达(P<0.05),不影响PHD2基因和蛋白表达;(2)与AngⅡ组比较,ERK抑制剂PD98059降低HUASMC中HIF-1α、VEGF基因和蛋白的表达(P<0.05)以及p-ERK蛋白的表达(P<0.05),增加FIH-1的基因和蛋白表达(P<0.05)。结论 (1)AngⅡ增加HUASMC中HIF-1α、VEGF的表达,该作用通过激活ERK通路、抑制FIH-1表达,在翻译后水平减少HIF-1α的降解所致;(2)ERK抑制剂可削弱AngⅡ的促HIF-1α、VEGF表达作用。

缺氧诱导因子-1α在缺血性心力衰竭中的作用研究进展

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是一种由缺血缺氧反应产生的核转录因子,由α亚基和β亚基组成,其中HIF-1α作为其主要调节的亚基,在生理或应激状态下,通过细胞保护、血管生成和代谢调节等途径发挥心肌保护作用。在缺血性心力衰竭的发生发展过程中,HIF-1α可通过调控氧传递、促进侧支循环形成、增强缺氧组织存活、缩小梗死范围以及提高缺血预适应能力等作用机制改善疾病预后,HIF-1α在缺血性心力衰竭中的应用价值逐渐受到重视,其作为疾病进展或临床预后的评价指标,在缺血性心力衰竭中有着非常重要的意义。

肝癌组织中脯氨酸羟化酶3(PHD3)的差异表达对预测原发性肝癌切除术后预后的价值

目的检测脯氨酸羟化酶3(prolyl hydroxylase 3,PHD3)在肝癌及癌旁组织中的表达情况,探讨其对原发性肝癌切除术后患者预后的预测价值。方法收集本院2006年进行肝切除术后病理确诊为肝细胞肝癌的标本325例,制作成组织芯片。采用免疫组化法检测肝癌及癌旁肝组织中PHD3的表达水平,并比较PHD3表达水平与肝癌患者无瘤生存时间及总体生存时间的相关性。应用Kaplan-Meier法、χ2检验及t检验分析PHD3的预测价值及与临床病理参数的关系。在325例患者组织标本中随机选取无复发转移和复发转移患者各6例的肝癌组织标本,提取组织蛋白进行Western blot检测。结果免疫组化显示,肝癌细胞中PHD3主要在胞质表达,核内也有表达。癌组织中PHD3的表达水平与与肝癌患者的生存预后显著正相关,与患者性别、微血管侵犯、肿瘤大小和甲胎蛋白不相关。癌旁组织中PHD3的表达与预后无显著相关。Western blot检测发现6例无复发患者的PHD3蛋白表达明显高于复发患者。结论肝癌组织中PHD3的表达可以有效预测原发性肝癌切除术后患者的预后。

PHD3对缺氧状态A549细胞株中HIF-1α表达及其生物学特性的影响

目的探讨PHD3对缺氧状态非小细胞肺癌HIF-1α表达的调控作用及对其生物学特性的影响。方法采用氯化钴分别处理人非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞株12 h和24 h,建立A549细胞缺氧模型。用Western blot和免疫细胞化学法检测缺氧A549细胞中的PHD3、HIF-1α蛋白表达的水平;分别采用质粒转染和siRNA干扰法建立PHD3过表达和低表达的A549细胞缺氧模型,用Western blot法检测PHD3过表达和低表达变化对A549细胞中的HIF-1α蛋白表达水平的影响,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞转移、侵袭能力。结果与氯化钴处理12 h比较,缺氧状态24 h非小细胞肺癌A549细胞中HIF-1α的表达水平升高(0. 185±0. 076 vs 0. 476±0. 114,P <0. 05),而PHD3的表达却逐渐减少(0. 235±0. 114vs 0. 127±0. 065,P <0. 05)。PHD3的过表达显著降低了HIF-1α的表达(0. 036±0. 018 vs 0. 017±0. 012,P <0. 01),PHD3低表达可增加HIF-1α的表达(0. 048±0. 021 vs 0. 453±0. 027,P <0. 05)。在缺氧条件下,PHD3表达升高会导致A549细胞的增殖、侵袭显著降低,而PHD3降低会导致A549肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭显著增加。结论 PHD3能调控缺氧状态非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能通过调控HIF-1α的表达来实现。

缺氧诱导因子在肠缺氧中的研究进展

肠系膜缺血性疾病和危重症病人的肠道血流减少、炎性激活会引起严重的肠缺血、缺氧状态。缺氧诱导因子(HIF)调控下游一系列基因转录,介导机体内源性炎性缓解机制的运行,参与肠道的适应性改变。在缺氧状态下,HIF蛋白转录后分解减少,使其能稳定存在并激活一系列下游基因参与,以缓解缺血后的肠损伤。目前受关注的有细胞内腺苷相关信号通路,尤其是A2B腺苷受体通路及缺氧诱导的神经生长因子-1介导缺血后信号通路。HIF介导的抗炎效应也参与缺血后肠功能的保护。血栓导致的肠缺血HIF还参与肠道血管的再通过程。HIF相关通路的研究为治疗肠缺氧损伤和继发多器官功能障碍提供诸多潜在靶点,针对相关靶点干预措施的研究也取得十分良好的效果,但目前还局限于细胞和转基因动物模型中。将来部分这类新型药物有可能从实验室转入临床,给肠道缺氧性疾病的治疗带来新的思路。以下将对HIF在肠缺氧中的最新研究作一综述。

缺氧诱导因子1α介导的信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导肾间质纤维化中的作用

目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）介导的信号通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导肾间质纤维化（RIF）中的作用。方法体外培养肾小管上皮细胞，以不同浓度（10^-9～10^-6mol／L）的AngⅡ分别处理24h、48h时，用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测肾小管上皮细胞中HIF-1α、脯氨酸羟化酶2（PHD2）及基质金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）mRNA和蛋白的表达变化情况。结果随AngⅡ刺激浓度的增加，HIF。letmRNA的表达水平也增加，呈浓度依赖性。当AngⅡ浓度在10^-7mol／L，并且干预时间为24h时，HIF-1αmRNA的表达水平增加了166％。实时荧光定量PCR和Western印迹分析显示，相对于空白对照组，在AngⅡ干预的肾小管上皮细胞中HIF-1α、TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平均升高（P〈0．05），而PHD2的mRNA和蛋白表达水平均下降（P〈0．05）。结论AngⅡ可能通过下调PHD2的表达而减少肾小管上皮细胞中HIF-1α的降解，从而上调HIF-1α及TIMP-1的表达，参与RIF。

脯氨酸羟化酶在乳腺癌中的研究进展

目的对脯氨酸羟化酶(PHD)在乳腺癌疾病进程中的作用以及在预后预测与治疗方面的研究进展进行综述。方法以“脯氨酸羟化酶、乳腺癌”为中文关键词,以“prolyl hydroxylase domain,breast cancer”为英文关键词,检索中国知网以及PubMed数据库2001-01-01-2023-03-31相关文献共129篇。纳入标准:(1)PHD的基本结构、生理作用及调节机制;(2)PHD在乳腺癌中的研究进展。排除标准:数据陈旧文献。最终共纳入文献40篇(中文2篇,英文38篇)。结果PHD1在雌激素受体(ER)阳性的乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)中高表达并促进其增殖,而在MDA-MB-231细胞系中表达下降并具有抑癌作用。PHD2在激素依赖的乳腺癌、TNBC和MDA-MB-231细胞系中的作用则与PHD1相反。PHD3对乳腺癌的增殖迁移起到促进作用,并在恶性乳腺癌表型中的表达水平可能更高。结论PHD家族各成员在不同亚型和细胞系的乳腺癌中作用复杂,随着研究的深入,PHD在乳腺癌分型方面的作用逐渐显现,也为疾病的靶向治疗开辟新道路。

含羞草素对糖尿病大鼠肾脏缺氧损伤及HIF/PHD轴的影响

目的通过含羞草素干预糖尿病大鼠,探讨其对糖尿病大鼠肾脏缺氧及HIF/PHD轴的影响。方法将SD大鼠(n=24)随机分为对照组(NC组,n=8)、糖尿病组(DN组,n=8)和含羞草素治疗组(DL组,n=8)。糖尿病模型通过腹腔注射链脲佐菌素构建。腹腔注射含羞草素(50 mg/kg/d)于成模8周后的大鼠体内。分别于12、16周采集各组尿液和血糖值,处死大鼠并摘取双肾。缺氧探针法检测缺氧情况,免疫组织化学染色和RT-PCR检测HIF/PHD轴上的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、脯氨酸羟化酶2(PHD2)以及血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白和mRNA表达。结果模型组和含羞草素治疗组在两时点的血糖和24 h尿蛋白值均明显高于对照组(P<0.05),DL组24h尿蛋白低于DN组(P<0.05)。DN组、DL组的肾脏均可见不同程度的肾小球增大、部分球囊扩张、系膜基质增多、肾小管扩张等,DL组病理改变相对DN组减轻。肾组织缺氧探针显示:糖尿病组和含羞草素治疗组的阳性着色面积较对照组明显扩大(P<0.05),且治疗后面积显著减小(P<0.05)。免疫组化和PCR结果显示:模型组在两时点肾脏HIF-1α、PHD2、HO-1蛋白和mRNA表达均有不同程度的上调,但16周时HO-1蛋白、HIF-1αmRNA以及两时点HO-1 mRNA表达上调差异无统计学意义,并且16周较12周时表达呈现下调趋势,而DL组两时点肾脏HIF-1α、PHD2、HO-1蛋白表达显著高于DN组(P<0.05),两时点HIF-1α以及16周HO-1 mRNA表达也显著高于DN组(P<0.05)。结论含羞草素可缓解糖尿病大鼠肾脏缺氧状态,并能上调HIF/PHD轴上的HIF-1α、PHD2、HO-1的表达水平。

重度子痫前期患者胎盘组织缺氧适应相关基因的表达及意义

目的探讨重度子痫前期患者胎盘组织中缺氧适应相关基因HIF-1α、PHD1、PHD2和FIH-1的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测34例重度子痫前期患者和24例正常孕妇的胎盘组织中的HIF-1α、PHD1、PHD2和FIH-1蛋白的表达,对两组的表达水平进行比较分析。结果在重度子痫前期患者和正常孕妇的胎盘组织中HIF-1α、PHD1、PHD2和FIH-1蛋白均主要表达在合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆中。重度子痫前期组HIF-1α和PHD2蛋白表达(+++)者分别为16例(16/34)和14例(14/34),显著高于对照组2例(2/24)和2例(2/24),差异均有统计学意义(P<0.01)。PHD1和FIH-1蛋白在重度子痫前期组中表达(+++)者分别是2例(2/34)和2例(2/34),明显低于对照组14例(14/24)和13例(13/24),2组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 HIF-1α和PHD2的蛋白在重度子痫前期患者胎盘组织中表达水平明显增高;而PHD1和FIH-1的蛋白的表达水平却明显降低。PHD1、PHD2和FIH-1可能通过抑制HIF-1α的机制参与重度子痫前期的发病。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症肾阳虚血瘀证模型大鼠HIF-1α、PHD2、VHL表达的影响

目的观察补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症(endometriosis,EM)肾阳虚血瘀证模型大鼠缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)、脯氨酸羟化酶2(proline hydroxylase2,PHD2)、希佩尔-林道抑癌基因(von Hippel Lindau disease,VHL)表达的影响,探讨EM发病机制及补肾温阳化瘀方治疗EM的作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组、西药组,每组10只。其中正常组、假手术组常规饲养,模型组、中药组、西药组采用"延长冰箱冷冻加冰水浸泡"30天,再结合"自体移植法"创建EM肾阳虚血瘀证模型。术后中药组给予补肾温阳化瘀方(3.33 g/mL)1mL灌胃,西药组予以孕三烯酮0.5 mg/(kg·d)灌胃,模型组、正常组、假手术组灌服等体积的生理盐水,共给药4周。观察大鼠异位灶大小及形态,放免法检测血清CA125、血浆环磷酸腺苷(cAMP)、血浆环磷酸鸟苷(cGMP)的表达,HE染色光镜观察子宫在位内膜及异位组织形态学的变化,免疫组化SABC法、Western blot法检测HIF-1α、PHD2、VHL蛋白表达及含量,RT-PCR方法检测HIF-1α、PHD2、VHL mRNA表达。结果模型组大鼠异位灶生长明显,中药组、西药组治疗后,异位灶体积明显缩小。与正常组及假手术组比较,模型组CA125及cGMP水平明显升高,cAMP水平明显降低(P<0.05);HIF-1αmRNA、蛋白表达及含量均升高(P<0.05),PHD2、VHL mRNA、蛋白表达及含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,中药组及西药组CA125及cGMP水平明显降低,cAMP水平明显升高,HIF-1αmRNA、蛋白表达及含量均降低,PHD2、VHL mRNA、蛋白表达及含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与中药组比较,西药组PHD2蛋白含量更高(P<0.05)。HIF-1α与PHD2呈负相关(r=-0.799,P=0.00),HIF-1α与VHL呈负相关(r=-0.625,P=0.003)。结论补肾温阳化瘀方可有效治疗EM,其作用机制可能与降低HIF-1α、CA125、cGMP含量,上调PHD2、VHL、cAMP表达有关。

六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠PHD2和HIF-1α表达的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠肾组织中脯氨酸羟化酶2(PHD2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨慢性肾衰的发病机制以及六味地黄汤防治慢性肾脏病的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组。5/6肾切除法复制慢性肾衰模型。六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组分别给予3.38 g/(kg·d)、6.75 g/(kg·d)、13.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃。假手术组和模型组给予10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃12周。造模12周后,检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐,HE染色观察各组大鼠肾组织形态学变化,免疫组化法和RT-PCR法分别检测各组大鼠肾组织中PHD2、HIF-1α蛋白水平和基因表达。结果模型组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐较假手术组明显升高(P<0.05),六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组明显降低(P<0.05)。HE染色假手术组大鼠肾组织肾间质纤维化不明显,模型组肾间质纤维化明显,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组肾间质纤维化程度明显减轻。与假手术组比较,模型组大鼠肾组织PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P<0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组大鼠肾组织中PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P<0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P<0.05),且PHD2与HIF-1αmRNA的表达呈负相关(r=-0.653,P=0.00)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可有效防治慢性肾脏病,其作用机制可能与上调PHD2、降低HIF-1α表达有关。

缺氧对体外培养的早孕期细胞滋养细胞中缺氧适应相关部分基因表达及细胞浸润能力的调控

目的:探讨缺氧对细胞滋养细胞表达缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及氧感受器缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1、2(HPH/PHD1、2)和抑制缺氧诱导因子-1(FIH-1)的调控,以及缺氧对体外培养的细胞滋养细胞浸润能力的调节。方法:用RT-PCR和Western blot法检测在常氧、缺氧再复氧及持续缺氧等条件下,细胞滋养细胞中HIF-1α、HPH/PHD1、2和FIH-1 mRNA和蛋白表达的变化;并用体外侵袭实验检测缺氧再复氧、持续低氧对细胞滋养细胞浸润能力的影响。结果:(1)持续缺氧条件下培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P<0.01);HPH/PHD1和FIH-1 mRNA和蛋白表达显著低于常氧组(P<0.01)。缺氧再复氧后培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P<0.05),但显著低于持续缺氧组(P<0.05);HPH/PHD1和FIH-1 mRNA和蛋白表达均显著低于常氧组(P<0.05),但显著高于持续缺氧组(P<0.05)。(2)持续缺氧显著抑制细胞滋养细胞的浸润能力,与常氧组比较明显降低(P<0.01);缺氧后再复氧细胞滋养细胞的浸润能力居中,与常氧组比较明显降低(P<0.05);与持续缺氧组比较明显升高(P<0.05)。结论:滋养细胞可感受氧分压变化,HIF-1α、HPH/PHD1、HPH/PHD2和FIH-1相互作用与滋养细胞浸润能力调节有关。

缺氧适应相关基因在不同妊娠阶段滋养层组织中的表达

目的:探讨缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1(HPH1/PHD1)和缺氧诱导因子-1抑制因子(FIH-1)在不同妊娠阶段中的作用。方法:采用RT-PCR和Western blotting方法从mRNA和蛋白水平比较分析14例10周以内妊娠者(早孕A组)、11例10-12周妊娠者(早孕B组)、8例中期妊娠者(中孕组)和24例正常晚期孕妇(晚孕组)滋养层组织中的HPH1/PHD1和FIH-1的表达差异。结果:①在不同妊娠时期滋养层组织中均有HPH1/PHD1和FIH-1 mRNA及蛋白的表达,且均是早孕A组最低,早孕B组明显升高并达到峰值,此后逐渐下降,但均高于早孕A组的水平(P均<0.01)。②在妊娠期的各个阶段,HPH1/PHD1的mRNA和蛋白表达水平均强于FIH-1的表达,并均呈显著正相关;PH1/PHD1 mRNA与其蛋白间和FIH-1 mRNA与其蛋白间也呈显著正相关。结论:HPH1/PHD1与FIH-1可能在妊娠进展过程中氧分压变化的情况下通过调节HIF-1的表达和翻译参与对滋养细胞浸润和增殖的调控,参与胎盘发育,对于妊娠成功起重要调节作用。

六味地黄汤含药血清对HK-2细胞PHD2／HIF-1α信号途径的影响

目的以缺氧诱导的HK-2细胞为研究对象,探讨脯氨酸羟化酶2/缺氧诱导因子1α(PHD2/HIF-1α)信号途径对肾间质纤维化的影响,以及六味地黄汤含药血清干预作用。方法 40只SPF级雄性SD大鼠分为空白组和给药组,每组20只,空白组以10 m L/(kg·d)生理盐水,给药组以67.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃连续1周,腹主动脉取血,离心后分离血清。体外培养HK-2细胞,将实验分为空白对照组(10%胎牛血清)、正常血清组(10%正常大鼠血清)、氯化钴(Co Cl2)处理组(150μmol/LCo Cl2+10%正常大鼠血清)和含药血清组(150μmol/LCo Cl2+10%六味地黄汤含药血清)。体外培养HK-2,分组处理24 h后,用Western Blot法和RT-PCR法分别检测六味地黄汤含药血清对缺氧诱导的HK-2细胞中PHD2、HIF-1α、结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平和mRNA表达的影响。结果与正常血清组比较,Co Cl2处理组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均降低(P<0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均升高(P<0.05);与Co Cl2处理组比较,含药血清组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均升高(P<0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均降低(P<0.05)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可能通过上调PHD2的表达,促进HIF-1α的降解,后者下调CTGF的表达,从而抑制肾间质纤维化。

缺氧诱导因子及其抑制因子在不同妊娠阶段绒毛及胎盘组织中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其抑制因子——PHD1、PHD2和因子抑制低氧诱导因子-1(FIH-1)在不同妊娠阶段绒毛和胎盘组织中的表达及意义。方法 2007年1月至2007年7月在中国医科大学附属盛京医院,采用免疫组化方法检测14例10周以内早孕者、11例10～12周早孕者、8例中孕者及24例正常晚期妊娠者绒毛和胎盘组织中的HIF-1α、PHD1、PHD2和FIH-1基因的蛋白水平。对四组的表达水平进行比较分析。结果 (1)HIF-1α、PHD1、PHD2和FIH-1基因的蛋白均主要表达在合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆中。(2)HIF-1α、PHD1、PHD2和FIH-1在10周以内早孕组(强阳性率分别为50.00%、0、28.57%及0)、10～12周早孕组(强阳性率分别为0、81.82%、0及90.91%)、中孕组(强阳性率分别为0、37.50%、0及25.00%)及正常晚孕组(强阳性率分别为8.33%、29.17%、8.33%及54.17%)中表达差异均有统计学意义(P<0.001;P<0.001;P=0.002;P<0.001)。其中HIF-1α和PHD2均在10周以内的早孕期表达最强,10～12周早孕期显著下降,中孕期有所升高,至晚孕期进一步升高。PHD1和FIH-1与之相反,均在10周以内的早孕期表达最低,10～12周早孕期显著增强,此后在中孕期有所下降,至晚孕期进一步下降。结论 PHD1、2和FIH-1可能在妊娠进展过程中通过调节HIF-1α参与对滋养细胞浸润的调控和胎盘发育,对于妊娠成功起重要调节作用。