缺氧诱导因子-1α通过调控MDA和SOD抑制急性缺血性脑卒中小胶质细胞焦亡的体外实验研究

目的体外实验探究缺氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)调控丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)对急性期缺血性脑卒中小胶质细胞(BV2)焦亡的调节作用及机制。方法构建小胶质细胞急性期氧糖剥夺复氧模型(OGD/R),应用CCK-8法确定模型最佳干预时机。对HIF-1α进行稳定剂GF-4592过表达和HIF-1α小分子干扰RNA(HIF-1α-siRNA)抑制表达,分为空白组(A组)、OGD/R模型组(B组)、OGD/R+FG-4592干预组(C组)、OGD/R+siRNA阴性对照组(D组)、OGD/R+HIF-1α-siRNA组(E组)。通过CCK-8法检测5组细胞增殖情况,流式细胞技术检测细胞焦亡情况。ELISA检测MDA、SOD、细胞上清IL-18、IL-1β水平。Western blot法检测不同组HIF-1α、GSDMD-D、GSDMD-N、cle-Caspase-1和NLRP3蛋白表达水平。结果确定缺氧6 h复氧12 h为最佳干预时间。与B组和D组比较,C组细胞增殖升高,细胞焦亡降低,MAD、SOD、IL-18、IL-1β水平显著降低,GSDMD-D、GSDMD-N、cle-Caspase-1和NLRP3靶蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);而E组细胞增殖降低,细胞焦亡增加,MAD、SOD、IL-18,IL-1β,GSDMD-D、GSDMD-N、cle-Caspase-1和NLRP3靶蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论HIF-1α因子能有效调控小胶质细胞焦亡。HIF-1α可能通过调控MDA和SOD抑制急性缺血性脑卒中小胶质细胞焦亡。

缺氧诱导因子在大鼠肾缺血再灌注损伤中的表达和意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和氧自由基在肾脏缺血再灌注损伤中的表达情况。方法:SD大鼠随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组、RNAi阴性对照缺血组及HIF-1αRNAi预处理后的缺血组和预处理后缺血再灌注组,利用RT-PCR和westernblot技术检测各组大鼠肾脏中HIF-1α和bcl-2的表达情况。检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量,间接反应氧自由基的生成量。测定各组大鼠肾功能。取各组大鼠肾组织切片并做HE染色。结果:缺血组HIF-1α的表达在5组中最高(P<0.05)。与缺血组对比,缺血再灌注后HIF-1α和bcl-2的表达降低,同时氧自由基的生成增加(P<0.05),肾功能明显降低,但经HIF-1αRNAi预处理后上述指标与假手术组相比改变甚微,肾功能得到明显改善。HE染色可见缺血及再灌注组排列紊乱,胞浆萎缩,纹状缘消失,细胞间质增宽,经HIF-1αsiRNA预处理后,接近假手术组水平。结论:HIF-1α的过度表达可能导致氧自由基生成增加,肾功能受损,从而加重缺血再灌注肾脏的损伤,而HIF-1αRNAi可以减轻并改善这一状况,其机制可能与上调凋亡抑制基因有关。

KGF和HIF-1α联合对大鼠肠缺血再灌注致肠黏膜氧化应激损伤的防护作用

目的研究携带缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和角质细胞生长因子(KGF)的重组减毒沙门菌(TPHK)对大鼠肠黏膜氧化应激损伤的防护作用。方法雄性Wistar大鼠126只,随机分为NC组(6只)及TC、Ty21a、TPH、TPK、TPHK组,各实验组又分为2、6、12、24 h四个时间点,每个时间点6只。建模前给予相应基因药物10^(9) CFU/只,共4次,隔日1次,随后建立肠缺血再灌注(I/R)模型。检测各组小肠组织HIF-1α和KGF蛋白表达,并进行组织病理学观察,比较各组小肠组织和血浆超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果与NC组比较,各实验组小肠组织HIF-1α表达水平在I/R后6 h时达峰值,且TPHK组HIF-1α表达水平在6、12、24 h高于TPK和TPH组(P<0.05,P<0.01);与NC组比较,TPK和TPHK组小肠组织KGF表达水平在I/R后6 h时达峰值,后开始下降,TPHK组小肠组织KGF表达水平在I/R后2、6、24 h高于TPK和TPH组(P<0.05)。I/R后24 h组织病理学观察显示,TPHK组较其他实验组黏膜和腺体结构完整,隐窝深度深,炎性细胞浸润少,黏膜固有层结构近似正常。与NC组比较,各实验组小肠组织和血浆SOD活力在I/R后6 h达峰值,TPHK组SOD活力在I/R后6、12、24 h高于TPK和TPH组(P<0.05);I/R后6 h时各实验组小肠组织和血浆MDA含量达峰值,TPHK组小肠组织和血浆MDA含量在I/R后6、12、24 h低于TPK和TPH组(P<0.01)。结论TPH、TPK和TPHK对大鼠肠I/R应激致肠黏膜氧化应激损伤有较好防护作用,其中TPHK抗氧化应激作用优于TPH与TPK,KGF和HIF-1α对氧化应激损伤有协同防护作用。

亚低温上调冷休克蛋白RBM3表达减轻肾脏缺血-再灌注损伤

目的探讨亚低温对肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)的作用,以及RNA结合基序蛋白3(RBM3)及其下游效应分子在这一过程中的表达情况。方法健康SD雄性大鼠18只,随机分为正常对照(NC)组、IRI组和亚低温预处理(MHP)组,每组6只。通过检测血清肌酐水平评价肾功能,苏木素-伊红(HE)染色检测肾脏组织损伤情况,蛋白质印迹法检测肾脏组织的RBM3、Yes相关蛋白1(YAP1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量,免疫组织化学染色进一步检测RBM3及YAP1蛋白的表达情况,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肾脏组织细胞凋亡情况,通过测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性检测肾脏组织氧化应激水平。结果与NC组相比较,IRI组和MHP组血清肌酐水平、肾脏组织病理损伤评分均升高,RBM3、YAP1和Nrf2蛋白表达水平均升高,Bcl-2/Bax比值均降低,细胞凋亡率均升高,MDA含量均升高,SOD活性均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与IRI组相比较,MHP组血清肌酐水平、肾脏组织病理损伤评分均降低,RBM3、YAP1和Nrf2蛋白表达水平均升高,Bcl-2/Bax比值升高,细胞凋亡率降低,MDA含量降低,SOD 活性升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 亚低温对肾脏IRI 具有保护作用,可减轻IRI 所致细胞凋亡和氧化应激损伤,其机制可能为亚低温上调RBM3 及其下游效应分子YAP1 和Nrf2 的表达水平。

白介素-1受体拮抗剂对大鼠肠缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探究白介素^(-1)受体拮抗剂(interleukin^(-1) receptor antagonist,IL^(-1)Ra)对大鼠肠缺血/再灌注损伤的保护作用。方法将35只♂SD大鼠随机分为假手术(S)组、模型(I/R)组、不同剂量给药组(C1、C2、C3)。采用夹闭肠系膜上动脉法制备肠缺血/再灌注模型,缺血1 h后松开动脉夹再灌注1 h,给药组于再灌注前15 min尾静脉注射10、20、50mg·kg^(-1)的IL^(-1)Ra。结果缺血/再灌注2 h后,与S组相比,I/R组肠黏膜严重损伤,髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量增高,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性降低,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素^(-1)β(interleukin^(-1)β,IL^(-1)β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)大量释放,差异有显著性。给药组大鼠的肠黏膜病理损伤均明显改善,氧化应激和炎症反应指标有不同程度的改善。结论 IL^(-1)Ra通过缓解氧化应激反应和炎症反应,对肠缺血/再灌注损伤有明显的保护作用,有望用于临床上肠缺血/再灌注损伤的治疗。

大蒜素及缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及机制研究

目的:探讨缺血预处理和大蒜素注射液预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及机制。方法:建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型。将75只SD大鼠随机分成对照组(Control group,CON组)、缺血再灌注组(Ischemia reperfusion,IR组)、缺血预处理组(Ischemic preconditioning group,IPC组)、大蒜素预处理组(Allitride preconditioning group,APC组)、大蒜素及缺血预处理(Allitridpreconditi oning and ischemic preconditioning group,AIPC组)共5组,每组15只。各组均于术后24h采集肾组织及血样标本,用HE法观察肾组织病理形态、测定血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(Creatinine,Cr)含量、TBA法测定丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性;免疫组化法观察肾组织中粘附分子(Interce llular adhesionmolecule-1,ICAM-1)的表达。结果:IPC或APC后HE染色坏死较IR组减少,BUN、Cr、MDA含量较IR组下降(P<0.01),SOD活性较IR组升高(P<0.01),肾组织ICAM-1表达较IR组下降(P<0.01)。AIPC处理后各项指标较IPC或APC单一处理有显著区别(P<0.01)。结论:缺血预处理和大蒜素预处理对肾缺血再灌注有保护作用,两种处理因素对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护有协同作用,可能是通过下调ICAM-1的表达实现的。

珍宝丸预处理对心搏骤停大鼠脑缺血缺氧损伤的影响及机制

目的探讨珍宝丸预处理对心搏骤停大鼠脑缺血缺氧损伤的保护作用及机制。方法选取清洁级雄性老年SD大鼠72只,随机分为对照组、模型组和珍宝丸预处理组,每组24只,且又分为3个时间点6 h、12 h和24 h各8只。模型组和珍宝丸预处理组均给予心搏骤停脑缺血缺氧模型构建,其中预处理组构建模型前灌胃珍宝丸0.03 g/kg,每天1次,共7 d;对照组和模型组灌胃生理盐水3 ml,每天1次,共7 d;3组灌胃时间相同直至实验结束。采用物理烘干检测不同时间点(6 h、12 h和24 h)各组脑组织含水量;采用生物化学方法和酶联免疫学法检测不同时间点(6 h、12 h和24 h)各组脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、缺氧诱导因子(HIF)-1α及小泛素相关修饰蛋白(SUMO)1、2、3的表达水平;分析珍宝丸预处理对脑缺血缺氧损伤的保护机制。结果与对照组比较,模型组和珍宝丸预处理组脑组织含水量、MDA含量均增加,6 h较轻、12 h明显、24 h略有好转,且模型组各时间点较预处理组明显,两组各时间点差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,模型组和珍宝丸预处理组SOD含量均降低,且模型组较预处理组明显,两组各时间点差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,模型组和珍宝丸预处理组HIF-1α及SUMO1、2、3含量均升高,6 h较高、12 h达高峰、24 h略降低,且预处理组较模型组升高显著,两组各时间点差异有统计学意义(P<0.05)。结论珍宝丸预处理对心搏骤停大鼠脑缺血缺氧损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与降低脑组织水肿和MDA含量,提高SOD含量及激活HIF-1α和SUMO1、2、3表达密切相关。

己酮可可碱对大鼠肾缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨己酮可可碱（PTX）预处理对大鼠肾缺血．再灌注损伤（IRI）的保护作用及其具体保护机制。方法75只雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组（SO组）、缺血一再灌注组（IRI组）、PTX治疗组（PTX组），每组25只。SO组：单纯剖腹术，游离双侧肾蒂血管后不作结扎，等待45min后关闭腹腔。通过无损伤动脉夹阻断双肾血流45min建立大鼠的肾IRI模型。PTX组术前0．5h予PTX20mg／kg静脉注射，术中PTX6mg／（kg·h）微泵维持。SO组、IRI组术前0．5h予等量生理盐水静脉注射及微泵维持。3组分别于缺血前、缺血．再灌注即刻、再灌注后1h,4h、24h5个时间点监测肾功能、肾脏病理及肾组织匀浆的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）变化情况。采用单因素方差分析，组间两两比较采用q检验，并对部分数据行相关性分析。结果肾IRI后，表现为肾小管上皮细胞不同程度的肿胀、变性、坏死，炎性细胞浸润，给予PTX预处理后肾脏病理改变明显减轻，炎性细胞浸润减少。与SO组相比，IRI组在再灌注后各时间点血清肌酐水平，肾小管损伤评分，肾组织匀浆的TNF-α水平、ICAM-1水平显著升高（P〈0．01），肾组织匀浆的SOD水平显著下降（P〈0．01）；与IRI组相比，PTX组在相应时间点的血清肌酐水平、肾小管损伤评分显著下降（P〈0．05）；在再灌注即刻、1h、4h、24h肾组织匀浆的TNF—α水平明显下降（P〈0．05），肾组织匀浆的MDA、ICAM-1水平在再灌注后4h，24h显著下降（P〈0．01），肾组织匀浆的SOD水平在再灌注后4h、24h显著升高（P〈0．05）。相关性分析显示，TNF-α与MDA、SOD、ICAM-1之间的相关系数分别为0．801、-0．895、0．838，（P〈0．01）结论PTX对肾IRI有保护作用，该作用可能与PTX直接抑制肾组织中TNF-α的表达有关，从而减轻了氧化应激、抑制了ICAM-1的表达，减轻炎性细胞肾内浸润而发挥保护作用。