缺氧诱导因子-1α通过miR-126/JAK2-STAT3轴调控慢性肾病小鼠肾纤维化

目的:探究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通过miR-126/JAK2-STAT3轴促进慢性肾病小鼠肾纤维化的分子机制。方法:选取8周龄雄性C57/BL6小鼠,分为假手术组、模型组、HIF-1αmimic组、miR-126 mimic组、HIF-1α+miR mimic组、WP1066组、miR-126 mimic+WP1066组;用全自动生化仪检测小鼠肾24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平,qRT-PCR检测肾组织内miR-126相对表达量,免疫印迹检测肾组织内HIF-α,肾纤维化关键蛋白fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA,JAK2/STAT3信号通路关键蛋白表达;Masson染色分析小鼠肾病理形态及间质纤维化程度。结果:模型组模型建立后miR-126表达受到抑制,差异有统计学意义。与假手术组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白、BUN、SCr水平均上调,肾组织肾小管、间质结构紊乱,肾纤维化明显,fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达上调;HIF-1α过表达进一步上调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;miR-126过表达下调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;HIF-1α过表达可以逆转miR-126过表达抑制肾纤维化的趋势,差异有统计学意义。与模型组相比,JAK2/STAT3信号通路被阻断后,p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达明显下调,miR-126的过表达可以进一步下调小鼠肾组织内p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达,差异有统计学意义。结论:小鼠肾纤维化促进肾组织内HIF-1α高表达,HIF-1α通过抑制miR-126提升JAK2-STAT3信号通路活性,最终促进肾纤维化进展。

M2型丙酮酸激酶、缺氧诱导因子-1α在子宫内膜癌组织中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨M2型丙酮酸激酶(PKM2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及与患者临床特征的关系。方法取41例EC患者的EC组织及相应癌旁组织和10例子宫内膜良性疾病患者的正常子宫内膜组织。采用免疫组化法检测PKM2、HIF-1α的表达情况。比较EC组织、癌旁组织及正常子宫内膜组织中PKM2、HIF-1α的阳性表达率及不同临床特征EC患者EC组织中PKM2、HIF-1α的表达情况。结果EC组织中HIF-1α的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。p53突变型、分化程度为低分化EC患者EC组织中PKM2的阳性表达率分别明显高于p53野生型、分化程度为中高分化患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。有脉管浸润的EC患者EC组织中HIF-1α的阳性表达率高于无脉管浸润患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论HIF-1α在EC组织中的阳性表达率较高。PKM2、HIF-1α表达与EC患者的临床特征有关,或可作为EC患者的有效治疗靶点。

不同尿白蛋白排泄率2型糖尿病患者微小RNA-34a、缺氧诱导因子-1α水平及意义

目的 分析不同尿白蛋白排泄率(AER)水平的2型糖尿病(T2DM)患者微小RNA-34a(miR-34a)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平及意义。方法 选取90例T2DM患者纳入T2DM组,另选取同期门诊体检的90名健康成年体检者纳入对照组。根据AER水平的不同,将T2DM组患者分为正常组、微量组和大量组,每组30例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组血清HIF-1α含量,并采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组血清miR-34a表达水平。比较各组血糖、血清HIF-1α、血清miR-34a水平和AER水平,分析T2DM患者AER水平与血清miR-34a水平、血清HIF-1α水平的相关性,并分析miR-34a与HIF-1ɑ的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估HIF-1α、miR-34a对T2DM的预测价值。结果 正常组、微量组、大量组T2DM患者的AER、血清HIF-1α、血清miR-34a、血糖水平高于对照组健康体检者,且微量组水平高于正常组,大量组水平高于微量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,T2DM患者AER水平与血清HIF-1α水平、血清miR-34a水平均呈正相关(r=0.75、0.73,P<0.05),且血清HIF-1α水平与血清miR-34a水平呈正相关(r=0.55,P<0.05)。ROC曲线显示,HIF-1α、miR-34a对T2DM有较高的预测价值,AUC分别为0.991、0.934。结论 T2DM患者尿白蛋白含量越高,病情越严重,且其血清HIF-1α水平与血清miR-34a水平呈正相关,提示miR-34a、HIF-1α是T2DM病情的影响因素,且对T2DM有较高的预测价值。

缺氧诱导因子1α、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3在儿童创伤性脑损伤中的表达及意义

目的动态观察缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B19kDa-interacting protein 3,BNIP3)在儿童创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)中的变化,并评估其预测儿童TBI病情轻重及预后的临床价值。方法前瞻性纳入2021年1月—2023年7月47例中重度TBI患儿为研究对象,根据格拉斯哥昏迷评分分为中度亚组(9~12分)和重度亚组(3~8分);以同期因腹股沟斜疝诊治且无基础疾病的30例患儿为对照组。比较各组HIF-1α、BNIP3、自噬相关蛋白Beclin-1及S100B水平的差异,采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B对TBI病情轻重及预后的预测价值。结果TBI组患儿血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于对照组(P<0.05);TBI患儿中,重度亚组HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于中度亚组(P<0.05)。相关性分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平与格拉斯哥昏迷评分呈负相关(P<0.05)。治疗7 d后,非手术TBI和手术TBI患儿的血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B水平均较治疗前下降(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平预测重度TBI的曲线下面积分别为0.782、0.835、0.872、0.880(P<0.05),预测TBI预后不良的曲线下面积分别为0.749、0.775、0.814、0.751(P<0.05)。结论TBI患儿血清HIF-1α、BNIP3及Beclin-1水平显著升高,检测其水平有助于临床判断TBI患儿的病情轻重及预后。

急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2、血红素加氧酶-1、脂肪酸结合蛋白4、缺氧诱导因子1α表达意义及其与肝功能指标相关性研究

目的:探讨急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达意义及其与肝功能指标的相关性。方法:回顾性选取62例急性药物性肝损伤患者的临床资料作为病例组,另选80例健康体检者的临床资料作为对照组。比较两组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及肝功能指标水平,用Pearson相关性分析急性药物性肝损伤患者血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平与肝功能的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值。结果:病例组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,急性药物性肝损伤患者血清Nrf2水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.763、-0.741、-0.685,均P<0.05);血清HO-1水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.489、-0.524、-0.568,均P<0.05);血清FABP4水平与血清AST、TBIL水平呈正相关(r=0.509、0.512,均P<0.05);血清HIF-1α水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈正相关(r=0.527、0.486、0.542,均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测诊断急性药物性肝损伤的曲线下面积(AUC)值为0.919,高于血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平单独检测(0.787、0.822、0.824、0.772,均P<0.05)。结论:血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α在急性药物性肝损伤患者中呈高表达,其表达水平与患者肝功能损伤有关,且四者联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值更高。

高血压脑出血患者血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2、缺氧诱导因子1α表达水平与预后的关系

目的观察高血压脑出血患者血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达水平及其与患者预后的关系。方法选取2019年4月至2021年3月间在梁平区人民医院治疗的高血压脑出血患者65例作为观察组,同时选取同期在本院进行治疗的未发生脑出血的高血压患者68例作为对照组,检测所有患者血浆中Lp-PLA2、HIF-1α表达水平,并分析Lp-PLA2、HIF-1α与高血压脑出血患者预后的关系。根据患者临床资料分析影响高血压脑出血患者预后的因素;多因素Logistic回归分析高血压脑出血患者预后的影响因素。结果观察组患者的血浆中Lp-PLA2、HIF-1α表达水平高于对照组,预后不良组患者血浆中Lp-PLA2、HIF-1α表达水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(t=15.314、14.580、4.086、3.495,均P<0.05)。预后不良组高血压脑出血患者年龄、高血压病程、发病至入院时间、初始血肿量及合并糖尿病与预后良好组比较,差异均有统计学意义(χ^(2)/t=2.480、2.580、2.307、5.101、5.532,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示患者血浆中Lp-PLA2、HIF-1α高表达水平是高血压脑出血的影响因素(OR=2.498、2.635,均P<0.05)。结论高血压脑出血患者血浆中Lp-PLA2、HIF-1α表达水平均显著升高,是患者预后不良的影响因素。

血清缺氧诱导因子-1α、前列腺素E2水平与动脉瘤性蛛网膜下腔出血关系及对脑血管痉挛的预测价值

目的:探究血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、前列腺素E2(PGE2)与动脉瘤性蛛网膜下腔出血的关系及其对脑血管痉挛的预测价值。方法:选择90例动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者为研究组,另选同期100例体检健康者为对照组,检测两组血清HIF-1α、PGE2水平,分析HIF-1α、PGE2水平与研究组患者病理特征的关系,经数字减影血管造影或经颅多普勒血流分析发现脑血管痉挛患者30例,无脑血管痉挛患者60例,对比脑血管痉挛组和无脑血管痉挛组患者血清HIF-1α、PGE2水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析术后3d患者血清HIF-1α、PGE2、HIF-1α+PGE2水平对脑血管痉挛的诊断价值。结果:①研究组患者血清HIF-1α、PGE2水平均明显高于对照组(均P<0.05);②研究组血清HIF-1α、PGE2水平与患者的Hunt-Hess分级、Fisher分级有关(均P<0.05);③脑血管痉挛组患者的血清HIF-1α、PGE2水平明显高于无脑血管痉挛组患者(均P<0.05);④通过绘制血清HIF-1α、PGE2水平对脑血管痉挛预测ROC曲线,计算其AUC分别为0.749、0.811,联合检测的AUC为0.854。结论:动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者血清HIF-1α、PGE2水平均升高,且能够有效预测脑血管痉挛的发生。

含jumonji结构域的蛋白2B和缺氧诱导因子1α在儿童非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及意义

目的探讨含jumonji结构域的蛋白2B(jumonji domain-containing protein 2B,JMJD2B)和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-lα)在儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)组织中的表达和意义。方法应用免疫组化检测46例NHL儿童(观察组)和24例反应性增生儿童(对照组)淋巴结组织标本中JMJD2B和HIF-1α的表达,分析JMJD2B和HIF-1α与NHL患儿临床病理特征和预后的关系,以及在NHL组织中JMJD2B和HIF-1α表达的相关性。结果观察组JMJD2B(87%vs 21%)和HIF-1α(83%vs 42%)表达阳性率均高于对照组(P<0.05)。JMJD2B和HIF-1α表达与NHL患儿血清乳酸脱氢酶水平和国际预后指数危险度相关(P<0.05)。JMJD2B与HIF-1α在NHL患儿组织中的表达呈正相关(rs=0.333,P=0.024)。结论JMJD2B和HIF-1α在儿童NHL组织中表达增高,二者在儿童NHL发生发展过程中可能起协同作用;JMJD2B可作为儿童NHL辅助诊断、评估病情、指导治疗、评估预后的新指标.

缺氧诱导因子-1α在糖尿病伴牙周炎患者牙周组织中的表达及其与牙龈微循环障碍的关系

目的:探究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在糖尿病伴牙周炎患者牙周组织中的表达特点以及HIF-1α与牙龈微循环参数的关系。方法:选择2019年3月~2022年3月于我院就诊的2型糖尿病患者237例作为研究对象,根据患者是否合并牙周炎分为合并牙周炎组(105例)和未合并牙周炎组(132例)。Logistic回归模型分析HIF-1α表达水平与糖尿病患者合并牙周炎的风险关系。限制性立方样条模型分析HIF-1α与牙周炎发生剂量-反应关系。多因素Logistic回归分析糖尿病患者合并牙周炎发生的影响因素。Cox回归分析HIF-1α、牙龈微循环参数的交互作用。建立结构方程预测模型并进行验证。结果:校正混杂因素后,HIF-1α与糖尿病患者合并牙周炎呈正相关。HIF-1α表达水平和糖尿病患者合并牙周炎不存在非线性剂量-反应关系,和性别无关。HIF-1α、牙龈微循环参数等是牙周炎发生的重要影响因素。HIF-1α和牙龈微循环参数的交互作用会增加糖尿病患者合并牙周炎的发病风险。HIF-1α联合牙龈血流量的交互效应最高。结构方程模型整体适配情况较优,能很好地反映各影响因素与牙周炎发生的关系。预测模型区分度、独立性较好。结论:HIF-1α是糖尿病患者合并牙周炎的危险因素。HIF-1α和牙龈微循环参数交互作用会增加糖尿病患者合并牙周炎的发病风险。

缺氧诱导因子-1α及脯氨酸羟化酶2在子宫内膜腺癌中的表达意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及脯氨酸羟化酶2(PHD2)在子宫内膜腺癌中的表达意义。方法选取2019年7月至2020年6月丹东市中心医院收治的40例子宫内膜腺癌患者作为子宫内膜腺癌组,选取同期40例增殖期子宫内膜患者作为增殖期内膜组,另选取同期40例不典型增生子宫内膜患者作为不典型增生组。3组均使用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测HIF-1α、PHD2,比较3组HIF-1α、PHD2表达,分析子宫内膜腺癌病理特征与HIF-1α、PHD2阳性表达情况。结果3组HIF-1α、PHD2阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜腺癌组HIF-1α阳性率高于不典型增生组、增殖期内膜组,且不典型增生组高于增殖期内膜组,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜腺癌组PHD2阳性率低于不典型增生组、增殖期内膜组,且不典型增生组低于增殖期内膜组,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜腺癌患者HIF-1α、PHD2的组织学分级、临床分期、肌层浸润、淋巴结转移占比比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α和PHD2表达异常会影响子宫内膜腺癌患者的肌层侵润、组织学分级、临床分期,因此,在子宫内膜腺癌疾病检查、诊断和治疗具有重要意义,能为子宫内膜腺癌的诊治提供可靠依据。

T细胞受体γ位点反义RNA 1、人抗原R、三元基序家族蛋白21、缺氧诱导因子-1α在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨T细胞受体γ位点反义RNA 1(TRG-AS1)、人抗原R(HuR)、三元基序家族蛋白21(TRIM21)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集103例结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测HuR、TRIM21、HIF-1α表达情况,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TRG-AS1相对表达量。比较结直肠癌组织和癌旁组织中TRG-AS1、HuR、TRIM21、HIF-1α的表达情况,分析TRG-AS1、HuR、TRIM21、HIF-1α表达情况与结直肠癌患者临床特征和预后的关系。结果结直肠癌组织中TRG-AS1相对表达量及HuR、HIF-1α阳性率均明显高于癌旁组织,TRIM21阳性率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同分化程度、淋巴结转移情况、血管侵犯情况结直肠癌患者结直肠癌组织中TRG-AS1相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同浸润深度、TNM分期、淋巴结转移情况结直肠癌患者结直肠癌组织中HuR、TRIM21、HIF-1α阳性率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。至随访结束,TRG-AS1低表达患者的累积生存率为55.6%,高于TRG-AS1高表达患者的31.5%(P﹤0.05);HuR阴性患者的累积生存率为56.9%,高于HuR阳性患者的37.0%(P﹤0.05);TRIM21阴性患者的累积生存率为22.4%,低于TRIM21阳性患者的59.0%(P﹤0.05);HIF-1α阴性患者的累积生存率为72.0%,高于HIF-1α阳性患者的36.6%(P﹤0.05)。结论结直肠癌组织中TRG-AS1、HIF-1α及HuR表达均升高,TRIM21表达降低,TRG-AS1、HuR、TRIM21、HIF-1α表达情况与结直肠癌侵袭、转移及患者预后密切相关,对评估结直肠癌患者病情及预后具有一定的临床价值。

lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探究胃癌(GC)组织中长链非编码RNA HOXC反义RNA1(lncRNA HOXC-AS1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)mRNA表达水平与患者临床病理特征及术后5年内生存的关系。方法:选取我院2015年5月至2018年4月收治的GC患者139例,手术收集GC组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达。对GC患者进行术后随访5年,记录GC患者生存情况,分为生存组88例,死亡组51例。比较GC组织和癌旁组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平、不同临床病理特征患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况、生存组和死亡组临床病理特征和GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平。分析GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平的相关性、GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况与术后5年生存的关系、影响GC患者术后5年内生存的危险因素。结果:与癌旁组织相比,GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度相关(P<0.05);lncRNA HOXC-AS1高表达组、IGF2BP2 mRNA高表达组患者术后5年总生存率分别显著低于lncRNA HOXC-AS1低表达组、IGF2BP2 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);死亡组患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平显著高于生存组(P<0.05);TNM分期为III期、肿瘤低分化、lncRNA HOXC-AS1高表达、IGF2BP2 mRNA高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。结论:GC患者癌组织中lncRNA HOXC-AS1及IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高,且术后5年内死亡的GC患者较存活患者更高,二者与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关,二者高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素。

缺氧诱导因子1α基因修饰牙髓干细胞的体外成骨及成血管分化

背景:如何有效地修复和重建临界骨缺损是临床医学的难题。牙髓干细胞作为转基因靶细胞修复受损组织或器官具有一定优势。目的:探究缺氧诱导因子1α对牙髓干细胞体外成骨及成血管的作用。方法:选取临床上12-18岁患者因正畸治疗需要拔除的健康、完整双尖牙的牙髓组织分离、培养牙髓干细胞,实验组将缺氧诱导因子1α基因转染至牙髓干细胞,对照组不做任何处理,采用qPCR检测缺氧诱导因子1α的基因表达以及Western blot检测成骨及成血管因子的蛋白表达。结果与结论:(1)牙髓干细胞为短梭形的成纤维样细胞,细胞呈集落式生长。(2)缺氧诱导因子1α基因稳定转染至牙髓干细胞内,随着时间延长缺氧诱导因子1α基因表达逐渐增高,至14 d达到高峰,21 d明显降低。(3)与对照组相比,实验组的成血管相关因子表达水平更高。转染后1 d,血管内皮生成因子、基质细胞衍生因子1、促血管生成素2、胎盘生长因子蛋白表达明显增高,4 d达到高峰,随后实验组成血管相关蛋白表达虽略有降低,但与对照组相比明显增高。(4)与对照组相比,实验组的成骨相关因子表达水平更高。转染后1 d,人骨形态发生蛋白2、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2蛋白表达明显增高,4 d达到高峰。(5)结果表明,缺氧诱导因子1α能够促进牙髓干细胞成骨及成血管因子的表达。

siRNA干扰缺氧诱导因子-2α对乳腺癌细胞增殖能力的影响

目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factors-2α,HIF-2α)siRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响及相关机制。方法采用CoCl2处理细胞,建立细胞缺氧模型,应用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α的表达;运用RT-PCR技术检测转染后MCF-7细胞中HIF-2αmRNA的表达;绘制细胞生长曲线,观察细胞生长速度和倍增时间;通过流式细胞术观察细胞周期分布的改变;采用RT-PCR技术检测增殖相关基因的表达。结果细胞缺氧模型建立成功。RNA干扰结果显示:缺氧+siRNA组HIF-2αmRNA的表达与单纯缺氧组相比明显降低(P<0.05);细胞生长曲线结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,细胞生长速度明显减慢,倍增时间显著延长(P均<0.05);细胞周期结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,S期和G2/M期细胞比例显著减少(P<0.05);RT-PCR结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,p21基因表达上调(P<0.05),Cyclin B基因表达下调(P<0.05)。结论 HIF-2αsiRNA可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖能力,可能与p21基因表达上调、Cyclin B基因表达下调有关。

siRNA干扰缺氧诱导因子2α对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及相关机制

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)-2αsiRNA对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响及相关机制。方法采用RNA干扰(RNAi)技术沉默已建立的缺氧细胞模型MCF-7细胞中HIF-2α的表达;RT-PCR方法检测转染后MCF-7细胞中HIF-2αmRNA的表达;采用划痕实验和侵袭实验探讨细胞侵袭能力的变化;采用Western印迹和RT-PCR方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达。结果 RNAi结果显示,缺氧+siRNA组HIF-2αmRNA的表达与单纯缺氧组相比均明显降低(P<0.05);转染后划痕实验结果显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比细胞伤口愈合速度明显减慢。Transwell侵袭实验显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比穿膜细胞数显著减少(P<0.05);Western印迹和RT-PCR结果显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,MMP-2蛋白及mRNA表达均下调(P<0.05)。结论 HIF-2αsiRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的机制之一可能与MMP-2基因的表达下调有关。

红细胞分布宽度和血管生成素2及缺氧诱导因子1α对慢性心力衰竭远期预后的影响

目的探究外周血红细胞分布宽度(RDW)、血管生成素2(Ang-2)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达水平对慢性心力衰竭(心衰)患者远期预后的影响。方法选择慢性心衰急性发作患者287例,根据远期预后情况分为存活组244例和死亡组43例,比较2组血清Ang-2、RDW、HIF-1α、B型钠尿肽(BNP)水平,采用ROC曲线分析预测价值。结果与存活组比较,死亡组血清Ang-2、RDW、HIF-1α、BNP水平明显升高(P=0.000)。血清Ang-2、RDW、HIF-1α水平与慢性心衰患者远期预后呈正相关(r=0.542,r=0.443,r=0.477,P=0.000),是慢性心衰患者远期不良预后的危险因素(P<0.01)。3项指标联合检测预测慢性心衰患者远期预后的曲线下面积为0.974(95%CI:0.947~1.000),明显高于各项指标单独检测(P<0.05)。结论血清Ang-2、RDW、HIF-1α增加是慢性心衰患者远期不良预后的危险因素,3项指标联合检测对慢性心力衰竭患者远期预后有较高的预测价值。

缺氧诱导因子HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的:研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)与缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2alpha,HIF-2α)在宫颈癌组织中的表达和相关性。方法:免疫组织化学染色方法检测宫颈癌组织中HIF-1α与HIF-2α的表达。用SPSS统计软件分析HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的相关性。结果:原位癌组、浸润癌组HIF-1α蛋白阳性表达率分别为57.7%、78.6%;HIF-2α蛋白阳性表达率分别为65.4%、85.7%,宫颈癌组织中HIF-1α阳性表达得分为1.56±1.60,HIF-2α阳性表达得分为4.51±1.04,HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达呈显著正相关(rs=0.855,P<0.05)。结论:宫颈原发癌、浸润癌中,HIF-1α、HIF-2α表达与宫颈癌临床病理特征有密切关系,且两者表达呈显著正相关,两者在宫颈癌的发生发展及浸润转移过程中可能起协同作用。

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:观察RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对胃癌细胞增殖﹑凋亡﹑侵袭性的影响并探讨其可能的分子机制。方法:将HIF-1α短发夹RNA(shRNA)重组质粒pGCsi-shHIF-1α稳定转染人胃癌细胞SGC-7901;采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α mRNA、蛋白表达水平,Western blot法检测葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及趋化因子受体CXCR4蛋白表达;MTT法、流式细胞仪、transwell试验分别检测转染细胞的增殖、凋亡及侵袭迁移能力。结果:稳定转染pGCsi-shHIF-1α后,SGC-7901细胞HIF-1α表达在mRNA及蛋白水平均受到明显抑制,Glut-1﹑MMP-2﹑CXCR4蛋白表达较对照组降低;细胞增殖能力较对照组明显降低,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);细胞体外侵袭迁移能力受到明显抑制(P<0.01)。结论:pGCsi-shHIF-1α能有效沉默胃癌细胞SGC-7901 HIF-1α基因表达,抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭并诱导其凋亡,提示HIF-1α可能通过上调Glut-1﹑MMP-2和CXCR4等从而调节肿瘤细胞生长及转移。

复方丹参滴丸对2型糖尿病大鼠代谢、生化指标及缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子通路的影响

目的探讨复方丹参滴丸(DSP)对2型糖尿病(T2DM)大鼠代谢、生化指标及缺氧诱导因子(HIF)-1α/血管内皮生长因子(VEGF)通路的影响。方法选择48只6~8周龄的清洁级健康雄性SD大鼠,根据简单随机抽样方法分为对照组(NC组,n=10)和造模组(n=38),其中对照组给予常规饲料喂养,造模组采用高糖高脂饲料喂养,以30 mg/kg的剂量腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ)溶液,制备T2DM大鼠模型。32只成模大鼠以血糖水平分为糖尿病对照组(DM组,n=16)和DSP治疗组(DSP组,n=16),分别灌胃给予等量体积的生理盐水及400 mg·kg^(-1)·d^(-1)的DSP生理盐水混悬液治疗,疗程均为8 w。分别采用AU2700全自动生化仪和自动放射免疫仪测定3组大鼠血清糖脂代谢指标及生化指标水平,采用BNII全自动蛋白分析仪检测血清24 h尿微量白蛋白(24 h UAlb),显微镜下观察肾皮质组织切片的病理变化及进行肾小球细胞外基质(ECM)堆积指数的评估,采用Western印迹方法检测三组大鼠肾组织中HIF-1α及VEGF的表达水平,并比较三组各指标的差异。结果显微镜下显示,与NC组比较,DM组及DSP组大鼠的肾小球基底膜及系膜区呈现明显肿胀、扩张,DSP组大鼠的肾小球病变程度较DM组有所减轻;DM组及DSP组大鼠的肾小球ECM堆积指数积分高于NC组,而DSP组低于DM组(P<0.05);三组大鼠血清中糖脂代谢指标水平整体比较差异均有统计学意义(P<0.05);与NC组比较,DM组及DSP组大鼠血清中空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、胰岛素抵抗指数(HOMAIR)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均升高,而HDL-C水平降低(P<0.05);除高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)外,DSP组其他指标水平均低于DM组(P<0.05);DM组与DSP组大鼠血清肌肝(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h UAlb水平及肾组织中HIF-1α和VEGF的相对含量均明显高于NC组,而DSP组明显低于DM组(P<0.05)。结论 DSP可有效改善T2DM大鼠的糖脂代谢紊乱,延缓肾脏损害进程,其机制可能与HIF-1α/VEGF通路的调控作用有关。

反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响

目的观察反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响。方法实验分组:(1)缺氧条件下(0.5%O2)体外培养4 h,未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为缺氧对照组;(2)常氧条件下体外培养,未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为常氧对照组;(3)缺氧条件下(0.5%O2)体外培养4 h,稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为实验组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(W estern B lot)检测各组的HIF-1α和survivin表达情况。流式细胞术和MTT比色法检测不同剂量的化疗药物(5-氟尿嘧啶、阿霉素、吉西他宾)对各组的凋亡率和生长抑制率的影响。结果实验组HIF-1α和survivin的表达明显降低(P<0.0 5),与对照组相比,实验组的凋亡率、抑制率与剂量成正比,高剂量引起高抑制(P<0.0 5)。结论反义HIF-1α可能通过阻断survivin的表达而增强胰腺癌对化疗的敏感性。据此可望通过阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供一种新途径。