广西汉族人群中缺氧诱导因子3A基因rs11672731和rs2072491的多态性

目的探讨缺氧诱导因子3A(HIF3A)在广西汉族人群中的分布特征,并比较它们与不同人群的分布差异。方法我们对纳入本研究的286例广西人rs11672731和rs2072491位点采用单核苷酸多态性分型检测(SNPscan)技术进行基因分型检测,统计学分析基因型和等位基因频率与人类基因组单体型图(HapMap)公布的HapMap-CEU、HapMap-HCB、HapMap-JPT、HapMap-GIH和HapMap-MEX数据间的差异。结果rs11672731位点存在AA、AG和GG 3种基因型,频率分布分别为42.7%、45.5%和11.8%,A、G的等位基因频率分别为65.5%和34.5%;rs2072491位点存在CC、CT和TT 3种基因型,其分布频率分别为47.6%、43.0%和9.4%,C、T的等位基因频率分别为69.1%和30.9%。两个位点的基因型和等位基因频率与男女性别无关,差异均无统计学意义(P>0.05)。与来自HapMap的CEU、HCB、JPT、GIH、TSI和MEX人群的基因分型资料比较,广西汉族人群基因型和等位基因频率与HCB和JPT数据比较差异均无统计学意义(P>0.05);与HapMap公布的CEU、GIH、TSI和MEX人群数据相比,两位点的基因型和等位基因型频率与上述地区差异均有统计学意义(P<0.05)。结论广西人群HIF3A基因rs11672731和rs2072491存在多态性,且在不同人群间存在不同程度差异。

缺氧诱导因子-3α甲基化与DNA损伤诱导转录物4在妊娠期糖尿病中的表达水平及其与妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血中HIF-3α基因甲基化、HIF-3αmRNA、DDIT4mRNA的表达水平及其与妊娠结局的关系,为GDM孕妇的妊娠监督及临床诊治提供思路,以降低不良妊娠结局的风险。方法随机选取2023年3月至2024年3月于徐州医科大学附属医院住院分娩的GDM孕妇80例,分为血糖控制良好组(GDM1组,40例)和血糖控制不良组(GDM2组,40例),另选取同期无妊娠合并症或并发症孕妇40例为对照组。采用甲基化特异PCR法检测HIF-3α甲基化率,实时荧光定量PCR法检测HIF-3αmRNA、DDIT4 mRNA水平。对比分析3组数据,统计不良妊娠结局,分析HIF-3αmRNA、DDIT4 mRNA与各项不良妊娠结局的相关性,并进行不良妊娠结局logistic回归分析。结果GDM1组及GDM2组孕前BMI、FPG、HbA1c、TC、TG、LDL-C、FINS、HOMA-IR均高于对照组(P<0.05),HOMA-β低于对照组(P<0.05)。GDM1组及GDM2组各项不良妊娠结局发生率均高于对照组,且GDM2组与对照组差异有统计学意义(P<0.05),而GDM1组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,GDM1组及GDM2组HIF-3α基因甲基化率更高,HIF-α、DDIT4 mRNA表达水平更低,且GDM2组与对照组差异有统计学意义(P<0.05),GDM1组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。GDM孕妇各项不良妊娠结局与HIF-3α及DDIT4 mRNA表达水平均呈负相关(r<0,P<0.05)。HIF-3αmRNA和DDIT4 mRNA是不良妊娠结局发生的保护因素(OR<1,P<0.05)。结论HIF-3α甲基化率升高、HIF-3α及DDIT4基因表达降低与GDM发生发展有关,可能是导致不良妊娠结局的重要因素。

缺氧诱导因子-3α(HIF-3α)对肝癌细胞生物钟基因表达的影响

目的:研究缺氧诱导因子-3α(HIF-3α)对肝癌细胞生物钟基因表达的影响。方法:将HIF-3α过表达的慢病毒载体感染HepG2细胞,构建稳定过表达HIF-3α肝癌细胞系,同时通过siRNA干扰HepG2细胞中HIF-3α的表达。然后通过Real-time PCR和Western Blot检测HIF-3α感染前后肝癌细胞中生物钟基因Clock、Bmal1、NPAS2、Per1、Per2、Per3、Timeless、Cry1、Cry2、REV-ERBA、Rora、CKIε的表达水平。结果:Real-time PCR结果显示HIF-3α使Per3、CKIεmRNA表达升高(P均<0.05),Bmal1、Per1、Per2、Cry1、REV-ERBA、Rora mRNA表达降低(P均<0.05),HIF-3α对Clock、NPAS2、Timeless、Cry2 mRNA的表达无明显影响(P均>0.05)。Western Blot结果与PCR结果相一致。结论:HIF-3α可引起肝癌细胞生物钟基因的紊乱,可能是肝癌生物钟基因表达异常的原因之一。

缺氧诱导因子-3的研究进展

缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor，HIF）是广泛存在于人和哺乳动物体内的一种转录因子，可以上调多达150种靶基因的表达，是细胞在缺氧应答反应中最重要的调节因子。目前发现的缺氧诱导因子成员有HIF-1、HIF-2、HIF-33种，其中HIF-3是1998年Gu等首先发现，目前国内外研究的较少。现有的研究显示HIF-3主要在心脏、胎盘、骨骼肌和肺组织中表达，在肝脏和肾脏组织中表达量较低，可能是缺氧调控靶基因表达的负性调节因子。

缺氧诱导因子-3α基因rs3764609A/G和rs3764611T/C单核苷酸多态性在广西人群中的分布

目的:观察缺氧诱导因子-3α(HIF3A)在广西人群中的分布特点,并比较其与其他地区人群的分布差异。方法:采用SNPscan技术检测187例广西志愿者rs3764609A/G和rs3764611T/C位点基因分型,分析其基因型和等位基因频率在不同性别和组间的分布差异。结果:rs3764609A/G位点存在3种基因型GG、AG和AA,分布频率分别为14.4.%、53.5%和32.1%;rs3764611T/C位点存在3种基因型CC、CT和TT,其分布频率分别为16.0%、47.6%和36.4%。2个位点的基因型和等位基因频率在不同性别间差异均无统计学意义(P>0.05)。与人类基因组计划(HapMap)公布的欧州人(CEU)、日本人(JPT)、约鲁巴人(YRI)和北京汉族人(HCB)人群的SNP分型数据相比,广西人群rs3764609和rs3764611基因型和等位基因频率与CEU、JPT和YRI差异均有统计学意义(P<0.05),与HCB相比,rs3764609基因型频率差异有统计学意义,等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);rs3764611基因型频率差异有统计学意义,等位基因频率差异无统计学意义。结论:广西人群HIF3A基因rs3764609A/G和rs3764611T/C基因多态性在不同人群间存在不同程度差异。

MiR-873对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨微小RNA(micro RNA,miR)-873在心肌细胞缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤中的作用及其相关机制。方法:采用体外培养大鼠H9c2心肌细胞构建H/R模型,并转染miR-873模拟物(mimic),实验分为对照组、H/R组、阴性对照组及miR-873 mimic组。Real-time PCR检测各组miR-873的表达水平;蛋白质印迹法检测egl-9家庭缺氧诱导因子3(egl-9 family hypoxia inducible factor 3,Egln3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达水平;ELISA试剂盒以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing,aspartate-specific proteases-3,caspase-3)活性检测试剂盒分别用来检测细胞凋亡和caspase-3活性;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-873对Egln3的作用靶点,并将实验分为阴性对照组、携带野生型(wild type,WT)报告基因的Egln3 3'-非编码区(3'-untranslated regions,3'-UTR)组(WT组)和携带突变型(mutant type,MUT)报告基因的Egln3 3'-UTR组(MUT组)。为进一步检测Egln3对miR-873 mimic作用的影响,实验构建了Egln3过表达细胞,并将其分为H/R组、H/R+miR-873 mimic组、H/R+pcDNA3-Egln3(pcEgln3)组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组。结果:与对照组相比,H/R组中miR-873表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,miR-873 mimic组中H9c2心肌细胞凋亡和caspase-3活性下降,Bax/Bcl-2比值下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);荧光素酶活性检测结果表明:与阴性对照组相比,WT组荧光素酶活性显著下调,差异有统计学意义(P<0.05),而MUT组荧光素酶活性无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。过表达实验结果表明:与H/R组相比,miR-873 mimic组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值均显著下降(均P<0.05);与miR-873 mimic组相比较,H/R+pcEgln3组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值显著上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:MiR-873通过靶向作用于Egln3而抑制H/R心肌细胞凋亡。

JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路对脑卒中的影响

信号转导和转录激活因子3(STAT3)是信号转导和转录激活因子的一种,其作用体现在细胞信号的交流和基因的转录等方面,Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/STAT3/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路对脑卒中的影响极为重要。然而,JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路在大脑中所起到的具体作用,尤其是在脑卒中之后是保护或是损害,至今仍无定论。该文阐述JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的激活或抑制在脑卒中(特别是脑缺血再灌注)中所发挥的作用,提出脑卒中急性期抑制JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、康复期激动JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、抑制与激动的结合运用可能是今后对JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的研究方向。

利心冲剂通过SIRT3/PFKFB3/HIF-1_(α)信号通路促进心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌血管新生的作用机制

目的通过检测心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌组织沉默调节蛋白3(SIRT3)/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶3(PFKFB3)/缺氧诱导因子1_(α)(HIF-1_(α))的表达,探讨利心冲剂促进心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌血管新生的可能机制。方法将C57BL/6J雄性小鼠结扎左冠状动脉前降支4周建立心力衰竭模型。将小鼠随机分为对照组、模型组、利心冲剂低剂量组(28 g/kg)、利心冲剂高剂量组(56 g/kg)和美托洛尔组(0.06 g/kg),连续给药4周。采用免疫组化CD31染色检测血管密度,蛋白免疫印迹法检测SIRT3、PFKFB3和HIF-1_(α)表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠心脏功能变差,血管新生减少,心肌SIRT3、PFKFB3、HIF-1_(α)蛋白水平下降(P<0.05)。利心冲剂各剂量组小鼠心脏功能明显改善,血管新生增加,心肌SIRT3、PFKFB3、HIF-1_(α)蛋白水平升高(P<0.05),且与剂量成正比。结论利心冲剂可能通过调控SIRT3/PFKFB3/HIF-1_(α)信号通路,促进心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌血管新生。

HIF-3α对肝细胞癌多药耐药的影响及其机制

目的探讨缺氧诱导因子3α(HIF-3α)对肝细胞癌多药耐药的影响及其机制。方法构建HIF-3α过表达慢病毒并鉴定;包装慢病毒,并测定慢病毒滴度。体外常规培养HepG2细胞,选择传2代、对数生长期、生长状态良好细胞,随机分为HIF-3α组、阴性对照组、空白对照组。HIF-3α组和阴性对照组分别转染HIF-3α过表达慢病毒、GV287空载体,空白对照组不予转染。收集各组转染72 h细胞,采用real-time PCR法检测HIF-3α、多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)、肺耐药蛋白(LRP)、谷胱甘肽硫转移酶pi(GST-pi)、拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)mRNA表达。结果本研究成功构建了HIF-3α过表达慢病毒,其测序结果与GeneBank中HIF-3α的基因编码序列完全一致。该基因编码序列慢病毒包装后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,说明慢病毒包装成功,经计算,慢病毒滴度为1.0×10~8 TU/mL。HIF-3α组HIF-3αmRNA相对表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而阴性对照组与空白对照组比较P>0.05。HIF-3α组GST-pi、LRP mRNA相对表达量均明显高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05),MDR1、MRP2、TopoⅡαmRNA相对表达量组间两两比较P均>0.05。结论 HIF-3α可能与肝细胞癌多药耐药有关,其机制与上调多药耐药相关基因GST-pi、LRP表达有关。

miRNA-4295在乳腺癌中的表达及作用机制

目的探讨微小RNA(miRNA)-4295在乳腺癌中的表达及作用机制。方法收集36例乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁组织,选取乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7、SKBR-3和人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-4295相对表达量。选取MCF-7细胞,分为对照组(不做任何处理)、miRNA-NC组(转染空白序列)和miRNA-4295组(转染miRNA-4295过表达序列),采用qRT-PCR检测miRNA-4295和egl-9家族缺氧诱导因子3(EGLN3)相对表达量,蛋白质印迹(Western blot)法检测EGLN3蛋白表达水平,CCK8法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移情况,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。miRNA-4295与EGLN3的相关性采用Spearman相关性分析。结果乳腺癌组织中miRNA-4295相对表达量明显低于癌旁组织(P﹤0.01),乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和SKBR-3中miRNA-4295相对表达量均低于人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P﹤0.01)。miRNA-4295组MCF-7细胞中miRNA-4295相对表达量均高于对照组和miRNA-NC组(P﹤0.05)。转染后24、48、72、96 h,miRNA-4295组MCF-7细胞光密度(OD)值均明显低于对照组(P﹤0.01)。miRNA-4295组MCF-7细胞的迁移率低于对照组和miRNA-NC组(P﹤0.05)。miRNA-4295过表达会增加S期MCF-7细胞比例,降低G2期MCF-7细胞比例。乳腺癌组织中EGLN3 mRNA相对表达量和EGLN3蛋白表达水平均高于癌旁组织。miRNA-4295与EGLN3表达呈负相关(r=-0.656,P=0.002)。miRNA-4295组MCF-7细胞中EGLN3 mRNA相对表达量低于对照组和miRNA-NC组(P﹤0.05)。结论过表达miRNA-4295可以抑制乳腺癌细胞增殖和迁移,并阻滞细胞周期。miRNA-4295和EGLN3可能是乳腺癌的潜在诊断和治疗靶点。

序列相似性家族107成员A抑制前列腺癌进展的实验研究

目的 探讨序列相似性家族107成员A(FAM107A)调控缺氧诱导因子3A(H1F3A)对前列腺癌(PCa)迁移、侵袭、凋亡的影响.方法 通过生物信息学技术筛选目的基因并进行分析.体外培养人PCa细胞PC-3,采用反转录病毒稳定转染,采用蛋白质印迹法(Western blot)技术验证HIF3A及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达量;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;焦磷酸测序检测启动子甲基化程度;细胞功能试验验证对PCa迁移和侵袭的影响.两组间差异表达采用独立样本t检验方法比较.结果 生信分析提示FAM107A基因在PCa组织中表达低于正常前列腺组织(P<0.01),Gleason评分(GS)越高,FAM107A表达量越低(P<0.01).划痕实验、Transwell侵袭实验提示过表达 FAM107A会抑制 PCa 细胞的迁移(C4-2:0.337±8.930 比 29.334±2.651,t=-7.260,P<0.05;PC-3:18.672±10.494 比 52.043±3.512,t=-6.024,P<0.05)、侵袭(DU145:117.703±12.845 比 242.303±21.401,t=10.273,P<0.05;PC-3:51.674±9.502 比 139.303±13.394,t=16.025,P<0.05),促进凋亡(17.180±0.700 比 0.527±0.121,t=40.600,P<0.05).细胞周期实验表明oe-FAM107A-ENZ组细胞G1期比例高于对照组(80.410±0.786比35.583±0.714,t=73.130,P<0.05),S 期比例低于对照组(11.233±0.374 比 38.747±1.809,t=25.790,P<0.05),细胞分裂被阻滞在S期.蛋白免疫印迹实验证明过表达FAM107A组的DNMT1表达量低于对照组(0.277±0.032 比 0.900±0.026,t=25.93,P<0.05),HIF3A 表达量高于对照组(0.657±0.040 比0.523±0.043,t=4.041,P<0.05).sh-FAM107A-5-aza 组的 HIF3A 的表达量明显恢复(0.550±0.020比0.427±0.067,t=3.073,P<0.05).蛋白免疫印迹实验证明过表达FAM107A时E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达量高于对照组(0.773±0.095 比 0.307±0.046,t=7.683,P<0.05),N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达量低于对照组(0.380±0.060 比 0.733±0.045,t=8.154,P<0.05),波形蛋白(Vimentin)表达量低于对照组(0.347±0.107 比 0.700±0.040,t=5.361,P<0.05).结论 FAM107A高表达可抑制HIF3A启动子甲基化促进其表达,进而抑制PCa的迁移、侵袭,是PCa进展的生物标志物.