光动力学疗法治疗脑胶质瘤亚急性期大鼠缺氧诱导因子lα和血管内皮细胞生长因子的表达

目的观察光动力学疗法（PDT）治疗Fischer344大鼠9L胶质瘤亚急性期肿瘤内及肿瘤旁组织中血管内皮细胞生长因子（VEGF）及缺氧诱导因子1α（HIF—α）的表达情况。方法32只雄性Fischer344大鼠颅内种植9L脑胶质瘤细胞后，随机分为对照组、PDT治疗组（40J／cm2组、80J／cm2组和120J／cm2组）。接种9L细胞后第7天治疗组大鼠接受相应能量的5-氨基乙酰丙酸（ALA）介导的PDT治疗。治疗后第7天处死所有动物，通过HE染色法检测颅内肿瘤的生长情况；利用Westernblot法检测肿瘤内和肿瘤旁组织中VEGF及HIF-1d的表达情况。结果对照组及治疗后40J／cm2组、80J／cm2组和120J／cm2组的肿瘤体积分别为（103．27±8．83）、（73．93±7．55）、（57．89±7．53）、（48．57±6．86）mm3。与对照组比较，所有PDT治疗组的肿瘤体积明显减小，差异有统计学意义（F=216．183，P=0．000）。与40J／cm2相比，80J／cm2和120J／cm2组的肿瘤体积减少得更明显，差异有统计学意义（P均〈0．001）。Westernblot检测发现对照组及不同能量ALA—PDT组中治疗后肿瘤组织内的VEGF和HIF-1α的表达均很高，多组间比较差异无统计学意义（VEGF：F=1．867，P=0．155；HIF-α：F=2．106，P=0．119）；但在肿瘤旁组织中，对照组的VEGF和HIF-α略有表达，随着ALA-PDT治疗能量的增高，VEGF和HIF-1α的表达较对照组明显增高（VEGF：F=37．065，P=0．000；HIF1α：F=39．775，P=0．000），尤以120J／cm2组最为显著。结论ALA—PDT可有效治疗脑胶质瘤，但ALA—PDT在治疗的同时可促进肿瘤旁组织中的HIF-1α和VEGF的表达增高。

缺氧诱导因子1α在糖尿病并发症中的作用机制研究进展

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是一种转录调节因子,通过其下游基因的调控,在糖尿病并发症的发生发展中起重要作用。高血糖使心血管系统HIF-1α活性过高,促进心血管并发症及增殖性糖尿病性视网膜病变的发生与发展,加重糖尿病机体缺血/再灌注损伤的打击。HIF-1α及血管内皮生长因子与糖尿病神经病变程度相关。高血糖通过对肾脏及皮肤HIF-1α的水平和活性的改变,损害肾脏对缺氧状态的适应性反应,延缓皮肤创伤愈合的过程。HIF-1α在糖尿病并发症的防治中有潜在的临床意义。

曲古抑菌素A体外对结肠癌细胞凋亡及低氧状态下其缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)体外对结肠癌HT-29细胞凋亡及低氧状态下其缺氧诱导因子(HIF)-1α表达的影响。方法:体外培养结肠癌HT-29细胞,给予TSA 100、200、400、600、800 nmol/L分别处理12、24、48、72 h,对照组加入同等体积的DMSO。MTT法检测各组HT-29细胞的存活率;Annexin V、TUNEL法检测HT-29细胞凋亡率;RT-PCR、免疫印迹法分别检测低氧状态下(37℃、1%O_2)HT-29细胞HIF-1αmRNA及蛋白的表达。结果:MTT法检测结果发现.与对照组相比,TSA处理组HT-29细胞活力明显降低(P<0.05),随着浓度的增大、时间的延长.其抑制作用逐渐增强。Annexin V、TUNEL法检测结果发现.TSA能诱导HT-29细胞的早期凋亡.TSA(200、400、600、800 nmol/L)处理组凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。低氧条件下,TSA抑制HT-29细胞HIF-1α蛋白的表达,随着浓度的增大,其抑制作用逐渐增强;而对HIF-1αmRNA的表达无影响。结论:TSA体外可能通过抑制低氧条件下HT-29细胞HIF-1α蛋白的表达.诱导细胞凋亡.抑制细胞增殖。

抑制性PAS蛋白抑制血管内皮生长因子的表达

目的:探讨抑制性PAS蛋白质(inhibitory PAS do-main protein, IPAS)对缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的活性和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的抑制作用。方法:在缺氧条件和正常氧条件,采用脂质体转染法,将pcDNA3-HIF-1α质粒、含促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)增强子的荧虫素酶(lu-ciferase)报告基因和不同量的pcDNA3-IPAS质粒共转染NIH 3T3细胞,通过检测荧虫素酶的活性以反映HIF-1α的活性;以转染pcDNA3-IPAS为IPAS组,转染pcDNA3为对照组,采用半定量RT-PCR法,检测转染两组NIH-3T3细胞中VEGF mRNA的表达。结果:转染pcDNA3-IPAS的NIH 3T3细胞的荧虫素酶活性较对照组明显降低,且随转染量的增加荧虫素酶的活性降低越明显;转染pcDNA3-IPAS的NIH 3T3细胞的VEGF mRNA表达较对照组明显降低。结论:IPAS通过降低HIF-1α的活性抑制了VEGF mRNA的表达。

缺氧诱导因子1α和自噬相关蛋白Beclin-1在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和自噬相关蛋白Beclin-l在结肠癌中的表达及其临床意义。方法选取2017年1月至2018年12月丹东市第一医院收治的120例结肠癌患者,采用免疫组织化学SABC法检测癌组织和相应癌旁组织中HIF-1α、BeClin-1蛋白的表达,并探讨其与结肠癌患者临床病理特征的关系。应用蛋白质印迹法检测20例新鲜结肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α和Beclin-1蛋白的表达。结果免疫组织化学结果显示,HIF-1α和Beclin-l在结肠癌组织中的阳性表达率均高于癌旁组织[75.0%(90/120)比21.7%(26/120),60.8%(73/120)比12.5%(15/120)],差异均有统计学意义(X^2值分别为68.343、60.359,均P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,20例新鲜结肠癌组织中HIF-1α、Beclin-l蛋白的相对表达量较癌旁组织中升高(1.98±0.66比0.76±0.55,1.50±0.40比0.46±0.35),差异均有统计学意义(t值分别为6.912、8.315,均P<0.01)。结肠癌组织中HIF-1α和Beclin-1的表达均与肿瘤TNM分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和神经侵袭有关(HIF-1α:X^2值分别为9.074、15.215、10.101、11.610、9.979;Beclin-1:X^2值分别为11.285、4.858、24.436、9.354、4.632;均P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤直径及脉管癌栓均无关(均P>0.05)。HIF-1α和Beclin-1蛋白在结肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.483,P<0.01)。结论HIF-1α和Beclin-1蛋白在结肠癌组织中表达升高,两者相互作用共同参与了结肠癌的发生与发展。

双链小片段干扰RNA抑制缺氧条件下乳鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达

目的 构建含缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)小片段干扰RNA(siRNA)靶序列的U6启动子表达框结构 ,观察其对缺氧条件下乳鼠心肌细胞HIF 1α表达的影响。 方法 分离培养乳鼠心肌细胞 ,分为常规培养液对照组、RNA干扰 (RNAi)组 (转染无效干扰序列Ⅳ )、RNAi抑制组 (转染有效干扰序列并按下游引物不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组 )。设计、合成 3对 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ )含HIF 1α编码基因片段(正、反义 )和 1对 (Ⅳ )随机序列 (正、反义 )的PCR下游引物。PCR法构建U6启动子表达框及相应正、反序列表达框 ,同时转染心肌细胞。每组每时相点 5皿细胞。于缺氧 1h后 ,用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定其蛋白水平表达 ,免疫组织化学法检验干扰效果。缺氧 6h后采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达。 结果 筛选出的最佳抑制片段为Ⅱ组序列。缺氧 1h,对照组、RNAi组心肌细胞HIF 1α蛋白水平显著增高 ,Ⅰ、Ⅱ、ⅢRNAi抑制组HIF 1α蛋白水平较对照组明显降低 ,其中Ⅱ组降低最为显著 (P <0.0 1);缺氧 6h,RNAi组心肌细胞HIF 1αmRNA水平较常氧条件下明显增高 (P <0.0 1);RNAi抑制Ⅱ组未见明显增高 (P >0.0 5 )。 结论 构建的HIF 1αⅡ组表达框能有效地抑制缺氧乳鼠心肌细胞HIF

甲状腺乳头状癌中HIF-1α、VEGF、COX-2及VEGF-C表达与侵袭转移的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、COX-2和VEGF-C的表达及与血管及淋巴管生成的关系。方法采用免疫组化EnVision法检测PTC中HIF-1α、VEGF、COX-2与VEGF-C的表达,并用CD34与D2-40双重免疫组化技术标记检测微血管密度(micro-vascular density,MVD)及微淋巴管密度(micro-lymphatic vessel density,MLVD),结合临床病理学特征和随访资料进行分析。结果 PTC中HIF-1α、VEGF、COX-2及VEGF-C的阳性率分别为79.5%、72.6%、82.2%和89.0%,均高于非毒性甲状腺肿(P<0.05)。PTC中有淋巴结转移者HIF1α、VEGF、COX-2和VEGF-C表达均高于无淋巴结转移者(P<0.05),HIF-1α、VEGF、COX-2与VEGF-C的表达存在相关性(P<0.05)。淋巴结转移组的MVD及MLVD高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论 PTC中HIF-1α、VEGF、COX-2和VEGF-C的高表达可能促进肿瘤的侵袭和转移,且VEGF、VEGF-C的表达可能由HIF-1α和COX-2协同调节,共同参与淋巴结转移过程。

HIF-αl、Caspase-3、Survivin蛋白的表达与食管鳞癌发生关系的研究

目的研究缺氧诱导因子-lα(HIF-lα),Caspase-3,Survivin在食管癌的发生、发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测49例食管鳞癌中HIF-lα、Caspase-3、Survivin蛋白的表达。结果HIF-lα蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为51.0%(25/49),显著高于正常食管黏膜0(0/32)(P<0.05);Caspase-3蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为34.7%(17/49),显著低于癌旁正常黏膜100%(32/32)(P<0.05);Survivin蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为57.1%(28/49),显著高于癌旁正常黏膜6.3%(2/32)(P<0.05)。结论HIF-lα蛋白Survivin蛋白的高表达和Caspase-3蛋白的低表达,在食管鳞癌发生、发展中起重要作用,HIF-lα蛋白的阳性表达可能下调下Caspase-3蛋白的表达,使Survivin蛋白的表达增加。联合检测HIF-1α、Caspase-3与Survivin可作为判断食管癌生物学行为的客观指标,对判断食管癌的预后具有重要意义。