缺氧诱导基因结构域家族构件1A在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的观察结直肠癌患者中缺氧诱导基因结构域家族构件1A(HIGD1A)的表达及对于肿瘤预后的影响。方法免疫组织化学分析江南大学附属医院2008年1月至2011年12月行结直肠癌根治术的157例患者中HIGD1A的表达,收集年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤部位(结肠或直肠)、淋巴结转移、神经侵犯、脉管内癌栓、TNM分期等临床病理参数,随访总生存期(overall survival,OS),组间比较采用。结果HIGD1A在结直肠癌中低表达组为93例(59.2%),高表达组为64例(40.8%)。HIGD1A高表达组在Ⅰ~Ⅱ期的表达率为50.6%,明显高于在Ⅲ~Ⅳ期中的表达率(49.4%,χ2=6.115,P<0.05)。在不同TNM分期的患者中的表达差异有统计学意义(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤部位(结肠或直肠)、淋巴结转移、神经侵犯、脉管内癌栓等临床病理参数无明显相关(P>0.05)。HIGD1A低表达组的OS为(73.6±3.5)个月;HIGD1A高表达组的OS为(89.5±3.0)个月,明显高于HIGD1A低表达组(χ2=11.183,P<0.05)。多因素风险比例模型显示,HIGD1A[风险比(HR)=0.315,95%可信区间(CI)=0.135~0.738,P<0.05]可作为评估预后的独立危险因素。结论HIGD1A的表达有助于评判结直肠癌的预后。

Egl-9家族缺氧诱导因子1的研究进展及与肺癌的关系

氧敏感因子Egl-9家族缺氧诱导因子1(EGLN1)为哺乳动物体内重要的氧传感器,通过编码脯氨酰羟化酶结构域(PHD)中的PHD2,羟基化缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),促进HIF-1α蛋白酶体的降解,从而影响机体的红细胞生成、糖酵解、铁代谢等。EGLN1与红细胞增多症、心脏疾病、脑代谢疾病等多种疾病相关,也可通过抑制肿瘤血管生成、与抑癌基因相互作用等影响肿瘤的发生与发展,但其在不同癌症中具有不同的作用。肺癌作为最常见和恶性程度最高的肿瘤,与EGLN1的关系也越来越受到人们的关注,但其具体机制尚不完全清楚。本文系统阐述EGLN1的结构及作用机制、在肿瘤中的表达及意义以及与肺癌的关系,旨在对EGLN1基因的研究进展及与肺癌的关系进行进一步探讨,从而为肺癌的靶向治疗提供新的思路。

HIF-1α诱导m6A阅读蛋白YTHDF1表达对缺氧复氧诱导的小鼠心肌细胞自噬的影响

目的探究缺氧诱导因子(HIF)-1α对缺氧/复氧(H/R)诱导的小鼠心肌细胞自噬的影响及可能的作用机制。方法体外培养小鼠心肌细胞,分为对照组、H/R组、pcDNA3.1-NC组(pcDNA3.1-HIF-1α的阴性对照转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达组(pcDNA3.1-HIF-1α转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达+si-NC组(pcDNA3.1-HIF-1α和YTHDF1 siRNA阴性对照共转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达+si-YTHDF1组(pcDNA3.1-HIF-1α和YTHDF1 siRNA共转染至心肌细胞),转染48 h后采用缺氧24 h复氧6 h的方法建立H/R模型。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中HIF-1α和YTHDF1 mRNA表达;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(cTn)I、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)水平;自噬双标腺病毒mCherry-GFP-LC3B免疫荧光法检测心肌细胞自噬;Western印迹检测心肌细胞HIF-1α、YTH结构域家族蛋白(YTHDF)1及自噬相关蛋白的表达。结果与对照组相比,H/R组心肌细胞中HIF-1α和YTHDF1的mRNA和蛋白表达、自噬体和自噬溶酶体数量、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、自噬相关蛋白2同源物A(ATG2A)、自噬相关蛋白(ATG)14表达显著增加,心肌细胞活力显著降低,细胞凋亡率、心肌细胞培养上清液中LDH、cTnI、CK-MB水平显著升高(均P<0.05);与H/R组相比,HIF-1α过表达组和HIF-1α过表达+si-NC组心肌细胞中HIF-1α和YTHDF1的mRNA和蛋白表达、自噬体和自噬溶酶体数量、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、ATG2A、ATG14表达显著增加,心肌细胞活力显著升高,细胞凋亡率、心肌细胞培养上清液中LDH、cTnI、CK-MB水平显著降低(均P<0.05);而在HIF-1α过表达基础上使用YTHDF1 siRNA转染心肌细胞下调YTHDF1的表达后,HIF-1α过表达对心肌细胞增殖、自噬的促进作用及对细胞凋亡的抑制作用被明显减弱。结论在缺氧条件下,HIF-1α可能通过上调YTHDF1表达,促进H/R诱导的小鼠心肌细胞自噬。

小脑血管网织细胞瘤中缺氧诱导因子-1α表达水平的改变

目的:研究小脑血管网织细胞瘤中缺氧诱导因子(H ypoxia Inducible Factor,H IF)-1α表达水平的改变。方法:取本院20例小脑血管网织细胞瘤患者手术切除标本,抽提病变组织中的总RNA,通过RT-PCR方法检测其中H IF-1α的表达水平。结果:20例小脑血管网织细胞瘤患者中,6例为家族性血管网织细胞瘤,14例为散发性血管网织细胞瘤。病变组织中,H IF-1α的表达水平均有不同程度的上升,达到正常对照组的(2.88±1.04)倍(P<0.01)。家族性与散发性血管网织细胞瘤患者之间,H IF-1α的表达水平未见有明显差异(P>0.05)。结论:在小脑血管网织细胞瘤中,H IF-1α的表达水平往往会有升高,这可能与VH L(Von H ippel-Lindau,VH L)基因突变有关。

益气升清方调节HIF-1α/NLRP3信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响

目的 探究益气升清方调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组(S组),模型组(M组),益气升清方低、中、高剂量组(3.465、6.930、13.860 g/kg)及益气升清方高剂量+HIF-1α激活剂DMOG组(13.860 g/kg益气升清方+40 mg/kg DMOG),每组15只。采用线栓法构建脑卒中模型。造模成功后进行神经功能缺陷评估;TTC染色评估脑梗死体积;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;HE染色检测缺血皮质区病理变化;TUNEL染色检测神经元凋亡;Western blot检测焦亡及HIF-1α/NLRP3通路相关蛋白表达。结果 与S组比较,M组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、胞膜穿孔蛋白D-N端(GSDMD-N)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均上升(P<0.05);与M组比较,低、中、高剂量益气升清方组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、GSDMD-N、Caspase-1、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均下调(P<0.05);DMOG减弱了高剂量益气升清方对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的改善作用。结论 益气升清方可能通过下调HIF-1α/NLRP3信号通路减轻缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡。

类乌齐牦牛EGLN1基因克隆、生物信息学分析及差异表达

为了对牦牛egl-9家族缺氧诱导因子1 (EGLN1)基因的CDS区核苷酸序列进行克隆,预测其编码的蛋白结构和功能,并分析其在牦牛和黄牛心脏、肺脏、肝脏及大脑等器官中的表达差异,试验根据GenBank中公布的黄牛EGLN1基因mRNA序列设计特异性引物,运用RT-PCR技术获取牦牛EGLN1基因的cDNA序列,对牦牛EGLN1基因CDS区核苷酸序列与蛋白质结构进行生物信息学分析,并构建系统进化树,利用荧光定量PCR技术检测黄牛和牦牛心脏、肺脏、肝脏、大脑中EGLN1基因的相对表达水平。结果表明:牦牛EGLN1基因CDS区序列长度为1 263 bp,编码420个氨基酸;EGLN1的半衰期为30 h,属于碱性蛋白,表现为亲水性,无信号肽及跨膜结构;磷酸化位点共30个,存在3个低复杂区域和1个P4Hc结构功能域;二级结构以无规则卷曲为主,三级结构由无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角构成。牦牛和其他9种动物EGLN1基因序列构建系统进化树中,牦牛与水牛亲缘关系最近,同源性高达99.3%,与褐家鼠亲缘关系较远。EGLN1基因在黄牛和牦牛肝脏、大脑、心脏、肺脏4个器官中均有表达,表达量依次递减;EGLN1基因在牦牛各器官中的相对表达量均显著高于黄牛(P<0.05),其中牦牛肝脏中的相对表达量约为黄牛的5.5倍。说明EGLN1基因可作为牦牛低氧适应性研究的重要基因之一。

线粒体Higd 1a在新生儿缺氧缺血性脑损伤中的研究进展

缺氧缺血性脑损伤是重症医学不得不面对的重大问题,近年来的研究已经明确线粒体损伤在脑缺氧缺血过程中所占据的重要地位,保护线粒体成为保护脑细胞免受损伤及抗细胞凋亡不可或缺的重要课题。然而对于线粒体损伤的靶向治疗仍然没有明确的方向,研究发现线粒体缺氧诱导基因结构域蛋白-1a(Higd 1a)在损伤的脑细胞中表达量明显增加,且在缺氧早期,Higd 1a可以起到对脑细胞的保护作用,这为新生儿缺氧缺血性脑病的靶向治疗提供了新的方向。

缺氧对人乳腺癌细胞微球体生长及化疗耐药性的影响

目的研究缺氧对人乳腺癌细胞微球体(mammospheres,MSs)培养效率及其化疗耐药性的影响。方法分别在常氧及缺氧条件下对人乳腺癌MDA-MB-231细胞进行无血清悬浮培养,观察记录MSs的生长速率及体积变化。MTT比色法检测各组人乳腺癌微球体细胞(mammospheres-derived cells,MSDCs)及MDA-MB-231细胞在不同浓度、不同药物作用下的存活率(survive rate,SR)。免疫组织荧光化学法检测HIF-2α、ABCG2在各组MSDCs中的表达。Western blot检测乳腺癌干细胞标志物CD44及ALDH1在各组MSDCs中的表达。Western blot及Real-time RT-PCR检测HIF-2α、ABCG2、P-gp及MDR1在各组MSDCs中的表达。结果缺氧组MSs生长速率及球体体积优于常氧组。缺氧组MSDCs在不同化疗药物作用下的SR高于常氧组MSDCs及MDA-MB-231细胞(P<0.05)。免疫组织荧光化学检测发现HIF-2α及ABCG2在缺氧组MSDCs中的表达强于常氧组。Western blot检测发现CD44与ALDH1在缺氧组MSDCs中表达量高于常氧组。缺氧组MSDCs中HIF-2α、ABCG2及P-gP蛋白表达量均高于在常氧组MSDCs及MDA-MB-231细胞中的表达(P<0.05)。Real-time RT-PCR检测发现缺氧组MSDCs中HIF-2α、ABCG2及MDR1 mRNA的表达量均高于常氧组MSDCs及MDA-MB-231细胞(P<0.05)。结论以HIF-2α为启动因子,ABCG2、MDR1及P-gP等为效应因子的生物化学反应可能是缺氧状态加快MSs的成球速度、提高其球体体积、增强其化疗耐药能力的可能机制。

艾灸通过TGFβ1/TSC22D1信号通路干预乳腺癌化疗性中性粒细胞减少症的机制

目的:探讨艾灸通过转化生长因子β1(TGFβ1)/转化生长因子β诱导基因22结构域家族蛋白1(TSC22D1)信号通路干预乳腺癌化疗性中性粒细胞减少症的作用机制。方法:以4T1乳腺癌细胞接种于Balb/c小鼠第3对乳腺脂肪垫下构建乳腺癌小鼠模型,以环磷酰胺(CTX)溶液腹腔注射乳腺癌小鼠构建乳腺癌化疗性中性粒细胞减少症(CIN)小鼠模型。分为正常对照组、荷瘤对照组、化疗模型组、艾灸组和西药组,每组4只。艾灸组取“神阙”“足三里”“三阴交”穴进行艾灸,西药组予以人粒细胞集落刺激因子10μg/kg皮下注射。干预结束后采用HE染色观察骨髓组织病理变化,取眼眶静脉血采用磁珠吸附法提取外周血中性粒细胞,流式细胞术鉴定提取纯度,采用ELISA法检测小鼠中性粒细胞TGFβ1、TSC22D1、JAM3、ESAM、ICAM-1、VCAM-1蛋白含量,RT-qPCR法和Western Blot法检测TGFβ1、TSC22D1、JAM3、ESAM、ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结果:与荷瘤对照组比较,化疗模型组TGFβ1、JAM3 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05),TSC22D1、ESAM、ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05);与化疗模型组比较,艾灸组、西药组TGFβ1、JAM3mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),艾灸组TSC22D1、ESAM、ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:艾灸通过干预TGFβ1/TSC22D1信号通路并调控JAM3、ESAM、ICAM-1、VCAM-1黏附分子的表达,增加中性粒细胞黏附功能,可能是艾灸改善乳腺癌化疗性中性粒细胞减少症的机制之一。

结缔组织生长因子和缺氧诱导因子1α在胰腺癌组织中的表达及意义

结缔组织生长因子（CTGF）属于一种即刻早基因CCN家族成员之一，位于人染色体6q23．1，广泛存在于人类多种组织器官中，在介导细胞的增殖、迁移、分化、生存及血管生成中起重要作用。缺氧诱导因子1α（HIF-1α）是一个在缺氧状态下发挥活性的核转录因子，在多种肿瘤组织中高表达，在肿瘤的生长及浸润转移中具有重要意义。本实验检测胰腺癌的CTGF、HIF-1α蛋白表达，探讨二者在胰腺癌中的作用和相互关系。

4种血清肿瘤标志物在宫颈癌诊断中的应用

目的探讨血清中4种肿瘤标志物(TM)鳞状上皮抗原(SCC-Ag)、诱骗受体3(DcR3)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)和缺氧诱导因子(HIF)-1α联合检测对早期诊断宫颈癌的价值。方法选取宫颈癌患者60例宫颈癌组、健康体检妇女30例(对照组)为研究对象,采用ELISA法检测并分析2组血清中SCC-Ag、DcR3、RhoA及HIF-1α的表达水平。结果宫颈癌组4种TM水平均显著高于对照组(P<0.05),且其表达水平高低与宫颈癌的TNM分期有关。淋巴转移者SCC-Ag和HIF-1α表达水平显著高于非淋巴转移者(P<0.05);宫颈鳞癌中SCC-Ag表达水平显著高于宫颈腺癌(P<0.05)。结论联合检测SCC-Ag、DcR3、RhoA和HIF-1α可作为普查项目,为宫颈癌的筛查、诊治、评估预后提供新的方法和思路。

急性冠脉综合征患者HIGD-1A及HIGD-1B蛋白水平及意义

目的 通过检测急性冠脉综合征(ACS)患者血清缺氧诱导基因结构域蛋白-1A(HIGD-1A)、缺氧诱导基因结构域蛋白-1B(HIGD-1B)蛋白水平,分析其与急性冠脉综合征发生发展的关系。方法 选择2019年9月—2021年9月就诊于蚌埠医学院第一附属医院心血管内科经冠状动脉造影确诊为ACS的患者106例,包括急性心肌梗死(AMI)患者50例、不稳定型心绞痛(UAP)患者56例,稳定型心绞痛(SAP)患者20例,选取同时期冠脉造影未见异常的患者34例作为正常组,采用ELISA法检测HIGD-1A、HIGD-1B蛋白,评估各组间差异。结果 ACS组血清HIGD-1B蛋白与正常组比较差异有统计学意义(P<0.001)。ACS组、SAP组、正常组血清HIGD-1A蛋白差异无统计学意义(P=0.123)。根据Gensini积分,将冠脉病变程度分为轻度病变组29例,中度病变组40例,重度病变组37例,不同病变程度ACS患者HIGD-1B水平差异有统计学意义(P<0.001)。经Pearson相关性分析,ACS患者HIGD-1B水平与Gensini积分成正相关关系(r=0.685,P<0.001)。绘制ROC曲线,血清HIGD-1B水平预测急性冠脉综合征的AUC为0.940,灵敏度为84.0%,特异度为94.1%,约登指数为0.781,具有一定的诊断参考价值。结论 急性冠脉综合征患者血清HIGD-1B蛋白显著升高,且与冠脉严重程度成正相关关系,这对于ACS的诊断具有重要意义。