牛磺熊去氧胆酸干预缺糖缺氧条件下脊髓神经元的凋亡

背景:牛磺熊去氧胆酸是一种亲水性胆汁酸衍生物,在多种神经系统疾病模型中均有神经保护作用,但目前鲜有报道研究牛磺熊去氧胆酸对脊髓损伤的作用。目的:观察缺糖缺氧条件下牛磺熊去氧胆酸对脊髓神经元凋亡的作用,以及对脊髓损伤后小鼠运动功能恢复的影响。方法:①体外实验:从孕13.5 d的C57 BL/6小鼠胚胎中分离提取原代脊髓神经元,培养72 h后,分3组处理:正常组加入Neurobasal完全培养基,置于CO_(2)培养箱(体积分数5%CO_(2)+95%空气)内培养24 h;氧糖剥夺组加入无糖的Neurobasal培养基,置于三气培养箱(体积分数94%N2+5%CO_(2)+1%O_(2))培养12 h,更换为Neurobasal完全培养基后置于CO_(2)培养箱内培养12 h;实验组处理过程大致同氧糖剥夺组,其中在加入无糖Neurobasal培养基的同时加入牛磺熊去氧胆酸。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞活性,免疫荧光染色检测细胞βⅢ微管蛋白表达。②动物实验:采用随机数字表法将60只C57 BL/6小鼠分为假手术组、脊髓损伤组与实验组,每组20只,脊髓损伤组与实验组采用Allen打击法建立T_(9)-T_(10)脊髓损伤模型,造模后第1天开始,实验组灌胃给予牛磺熊去氧胆酸溶液,假手术组与脊髓损伤组灌胃给予生理盐水,1次/d。连续给药14 d后,采用行为学和组织学方法评估脊髓组织修复情况。结果与结论:①体外实验:TUNEL染色、CCK-8与免疫荧光染色检测显示,氧糖剥夺组细胞凋亡数量高于正常组(P<0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达低于正常组(P<0.01);实验组细胞凋亡数量低于氧糖剥夺组(P<0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达高于氧糖剥夺组(P<0.01)。②动物实验:旷场实验BBB评分与后肢足迹实验显示,实验组小鼠行走与运动功能恢复程度好于脊髓损伤组。苏木精-伊红染色显示,脊髓损伤组小鼠脊髓损伤部位可见明显畸形和空洞,神经细胞数量明显减少;与脊髓损伤组比较,实验组脊髓损伤病变面积显著减小,脊髓畸形程度更小、空洞更少,神经细胞数量增加。免疫荧光染色显示,脊髓损伤组神经元胞核标记神经元细胞数量少于假手术组(P<0.01),实验组神经元胞核标记神经元细胞数量高于脊髓损伤组(P<0.01)。③结果表明:牛磺熊去氧胆酸能减少缺糖缺氧引起的脊髓神经元凋亡、轴突的丢失,促进脊髓损伤小鼠运动功能的恢复。

Sev对低氧缺糖诱导的脑神经元细胞损伤的影响

目的 研究七氟醚(Sev)调控Toll样受体4 (TLR4)/核转录因子κB (NF-κB)信号通路抑制低氧缺糖对脑神经元细胞损伤的保护作用。方法 将大鼠皮质神经元细胞分为对照组、模型组、1.0MAC和2.0 MAC七氟醚组;细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-8 (IL-8)水平;蛋白印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)、TLR4、磷酸化核因子κB抑制蛋白α (p-IκBα)和核因子κB抑制蛋白α (IκBα)蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组细胞存活率、SOD、CAT活性降低(均P<0.05),凋亡率、MDA含量、TNF-α、IL-6、IL-8水平升高(P<0.05),TLR4、p-IκBα蛋白表达升高;与模型组比较,Sev显著升高细胞存活率、SOD、CAT活性(P<0.05),显著降低细胞凋亡率、MDA含量、TNF-α、IL-6、IL-8水平(P<0.05),TLR4、p-IκBα蛋白表达降低(P<0.05)。结论Sev可减轻低氧缺糖诱导的脑神经元细胞损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

脑泰方含药血清对缺氧缺糖/复氧PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨脑泰方含药血清通过内质网应激相关通路调控缺氧缺糖/复氧PC12细胞凋亡,从而阐明脑泰方对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法将PC12细胞分为正常组(常规培养)、模型组(OGD/R)、抑制剂(4-PBA)组及脑泰方低浓度(10%)、中浓度(15%)、高浓度(20%)组。CCK8法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测LDH活性;Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化;Tunel染色检测细胞凋亡率;免疫荧光法和Western blot检测细胞Beclin-1、LC3、GRP78、CHOP、PERK蛋白表达情况。结果模型组LDH活性增加,细胞凋亡率增加,细胞存活率下降(P<0.01),GRP78、PERK、CHOP、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达明显增加,LC3Ⅰ蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,抑制剂(4-PBA)组、脑泰方中浓度组、脑泰方高浓度组LDH活性降低,细胞凋亡率减少,细胞存活率明显增加(P<0.05,P<0.01),GRP78、PERK、CHOP、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达明显降低,LC3Ⅰ蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论脑泰方含药血清可有效抑制缺氧缺糖/复氧PC12细胞的凋亡,调控GRP78/PERK/CHOP信号通路,表明脑泰方可能缓解受损神经细胞内质网应激导致的过度自噬状态,进而抑制细胞凋亡,发挥一定的神经保护作用。

小檗碱下调NLRP3减轻PC12细胞缺氧缺糖/复氧复糖损伤的作用

目的探讨小檗碱通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路降低神经元焦亡的作用机制。方法以大鼠PC12培养细胞构建缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)诱导的细胞模型,实验分组为正常对照组、OGD/R损伤组、小檗碱低、高剂量组。MTT检测细胞活性(LDH)、TUNEL法检测细胞凋亡、免疫荧光检测GSDMD表达、酶联免疫法检测IL-1β及IL-18的分泌、Western blotting检测NLRP3、GSDMD、Caspase-1蛋白表达。结果经小檗碱处理后,与OGD/R损伤组比较:(1)神经元细胞活性明显下降(P<0.01);(2)细胞凋亡减少(P<0.01);(3)GSDMD荧光表达下降(P<0.01);(4)IL-1β及IL-18表达下降(P<0.01);(5)NLRP3、GSDMD、Caspase-1蛋白表达均有不同程度降低(P<0.01)。结论小檗碱能够抑制OGD/R诱导的神经元细胞损伤,其机制可能为通过NLRP3/Caspase-1信号通路抑制OGD/R诱导的细胞焦亡。

盐酸纳洛酮调控TRL4/NF-κB通路对缺氧缺糖诱导的BV2细胞炎症反应的影响

目的:观察盐酸纳洛酮通过调控Toll样受体4(TRL4)/核转录因子κB(NF-κB)通路对缺氧缺糖诱导的BV2细胞炎症反应的影响。方法:培养BV2细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK)-8测定不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、5.00、10.00、20.00、40.00μmol/L)盐酸纳洛酮对BV2细胞活性的影响。将BV2细胞分为对照组、缺氧缺糖诱导组、盐酸纳洛酮低浓度组(0.01μmol/L)、盐酸纳洛酮高浓度组(5.00μmol/L)、盐酸纳洛酮高浓度+TLR4激活剂组(5.00μmol/L盐酸纳洛酮+1 mg/L脂多糖)。采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测盐酸纳洛酮对BV2细胞的毒性;CCK-8法检测盐酸纳洛酮对BV2细胞增殖率的影响;倒置显微镜观察BV2细胞形态;检测BV2细胞培养上清液一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平;逆转录定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测BV2细胞TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、IL-1β mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测BV2细胞TRL4/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:浓度为0.01~5.00μmol/L的盐酸纳洛酮对BV2细胞活性无明显影响。与对照组比较,缺氧缺糖诱导组BV2细胞增殖率及LDH、NO、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、TRL4、细胞核NF-κB p65均升高(P<0.05),细胞质NF-κB p65水平降低(P<0.05);与缺氧缺糖诱导组比较,盐酸纳洛酮低浓度组、盐酸纳洛酮高浓度组BV2细胞增殖率及LDH、NO、IL-1β、TNF-α、IL-6、 IL-1βmRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、TRL4、细胞核NF-κB p65降低(P<0.05),细胞质NF-κB p65水平升高(P<0.05);与盐酸纳洛酮高浓度组比较,盐酸纳洛酮高浓度+TLR4激活剂组BV2细胞增殖率及LDH、NO、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、TRL4、细胞核NF-κB p65升高(P<0.05),细胞质NF-κB p65水平降低(P<0.05)。结论:盐酸纳洛酮可能通过抑制TRL4/NF-κB通路,降低缺氧缺糖诱导的BV2细胞炎症反应。

不同浓度补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖/复氧复糖损伤的大鼠CTX-TNA2细胞系修复作用观察

目的探讨不同浓度补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)损伤大鼠星形胶质细胞系CTX-TNA2的修复作用。方法将处于对数生长期的CTX-TNA2细胞系分为观察组、血清组、模型组、正常组。正常组不做任何处理,常规培养;模型组弃去原培养基,加入不含糖、含钙镁的无糖培养基6 h(缺氧缺糖处理),然后把无糖培养基全部更换为完全培养基培养24 h(复氧复糖);观察组和血清组细胞缺氧缺糖处理6 h后,分别用含0.5%、1%、3%、5%、10%补阳还五汤含药血清(观察1、2、3、4、5组)或含0.5%、1%、3%、5%、10%空白血清(血清1、2、3、4、5组)的完全培养基培养24 h。采用MTS法检测细胞存活率,LDH法检测细胞乳酸脱氢酶漏出率,倒置相差显微镜观察细胞状态。结果与正常组相比,模型组细胞存活率降低,且乳酸脱氢酶漏出率升高(P均<0.01);与模型组比较,观察组细胞存活率升高(P<0.01)、乳酸脱氢酶漏出率降低(P<0.01);与血清4组比较,观察4组细胞存活率高(P<0.01)、乳酸脱氢酶漏出率低(P<0.05)。观察组细胞的胞体状态和胞间突起较模型组有所恢复,且比血清组细胞好转更显著。结论与其他浓度的补阳还五汤含药血清比较,5%补阳还五汤含药血清可修复CTX-TNA2细胞OGD/R损伤。

缺糖缺氧/再灌注对星形胶质细胞外泌体miRNAs表达的影响

目的探讨缺糖缺氧/再灌注(OGD/R)对星形胶质细胞外泌体中微小RNA(miRNAs)表达的影响。方法对新生原代培养的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞进行缺糖缺氧(OGD)或OGD/R处理,采用超高速离心法分别收集培养基上清液和细胞内的外泌体。通过透射电镜和流式细胞术鉴定外泌体。采用Illumina Hiseq2500测序平台检测外泌体miRNAs的表达谱,从中选取表达受OGD及OGD/R处理影响的miRNAs。并用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)对生物信息学分析中差异有统计学意义的miRNAs进行实验验证。使用metascape和miRWalk预测高表达miRNAs的靶基因,再将挑选出的共同靶基因在Webgestalt中进行KEGG富集分析。采用Western blot(WB)检测OGD/R及其星形胶质细胞外泌体对全反式维甲酸(ATRA)诱导分化的SH-SY5Y细胞Erk磷酸化水平的影响。结果与对照组相比,OGD 4 h处理改变了星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达谱;而再灌注24 h后改变的miRNAs大部分恢复到对照组水平。qPCR验证显示:3种miRNAs在外泌体中的分布水平远高于细胞,而且这种富集作用可能不受OGD刺激的影响。KEGG富集分析显示:表达上调miRNAs的靶基因信号通路主要为代谢通路,包括PI3K-AKT、MAPK和mTOR信号通路等。OGD、OGD/R及正常星形胶质细胞外泌体处理均能上调相应培养条件下SH-SY5Y细胞的p-Erk1和p-Erk2水平。结论OGD处理能显著影响星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达,其外泌体中富集分布的miRNAs均靶向作用于代谢通路,如PI3K-AKT、MAPK和mTOR等信号通路。

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca2 + ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P <0 .0 1)和 4 .94 % (P <0 .0 1)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca2 + ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.4 6nmol·L-1(P <0 .0 1)和 16 .5 9% (P <0 .0 1) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca2 + ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca2 + ]i浓度有关。

川芎嗪对缺氧缺糖培养心肌细胞蛋白质、RNA合成及一氧化氮合酶基因表达的影响

目的：观察川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。方法：本实验利用心肌细胞缺氧缺糖损伤模型，采用同位素掺入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析方法，观察川芎嗪注射液对心肌细胞缺氧缺糖时蛋白质、ＲＮＡ合成及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果：川芎嗪注射液可提高培养心肌细胞缺氧缺糖时３Ｈ亮氨酸（Ｌｅｕ）和３Ｈ尿嘧啶核苷（ＵＲ）的掺入率，促进蛋白质、ＲＮＡ合成，诱导ＮＯＳｍＲＮＡ在缺氧缺糖心肌细胞的表达。

黄芪注射液抑制缺氧缺糖后复氧复糖大鼠海马神经细胞凋亡的研究

目的观察黄芪注射液对缺氧缺糖后复氧复糖大鼠海马神经细胞凋亡的抑制作用。方法取体外原代培养8d的正常乳鼠海马神经细胞,缺氧缺糖0.5h后正常培养,并用黄芪注射液进行干预。MTT法测定细胞活性,光学显微镜下观察细胞形态,AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测凋亡细胞百分率。结果与正常对照组比较,缺氧缺糖后复氧复糖组(模型组)在复氧复糖后各个时间点海马神经细胞的活性明显下降(P<0.05),其中复氧复糖后6h海马神经元活性最低,与其他时间点比较差异显著(P<0.05)。各时间点黄芪注射液低浓度组和高浓度组的细胞活性与同时间点模型组相比无显著性差异(P>0.05)黄芪注射液中浓度组各时间点的细胞活性明显增高(P<0.05)。模型组各时间点细胞凋亡率较正常对照组明显升高(P<0.05),黄芪注射液组各时间点细胞凋亡率较模型组组明显下降(P<0.05)。光镜下观察模型组可见大量凋亡细胞,细胞核皱缩、碎裂,核深染并可见凋亡小体;坏死细胞肿胀,细胞膜连续性破坏;黄芪注射液组凋亡细胞明显减少且以细胞核皱缩为主,细胞坏死程度较模型组明显减轻。结论黄芪注射液可以抑制缺氧缺糖后复氧复糖大鼠海马神经细胞的凋亡,提高细胞的活性,对缺氧缺糖后复氧复糖大鼠海马神经细胞有保护作用。

黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

目的 观察黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷、栀子苷治疗脑缺血/再灌注损伤的作用机制。方法 选用SH-SY5Y细胞,采用缺氧、复氧结合缺糖、复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血再灌注损伤,观察黄芩苷、栀子苷对此损伤的治疗作用。结果 缺氧、缺糖8 h结合复氧、复糖12 h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞突起皱缩、变圆,可见有部分细胞漂起,细胞轮廓不清,凋亡率明显上升,线粒体的活性下降;而黄芩苷、栀子苷可以显著减轻上述损伤。结论 黄芩苷、栀子苷对缺氧缺糖/再灌注损伤的神经细胞有保护作用。

丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果:缺氧/缺糖损伤2h,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著。而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P<0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多。丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。

丁苯酞可减轻缺氧缺糖条件下血管内皮细胞的线粒体损伤

目的:探讨丁苯酞(DL-3-n-butylphthalide,NBP)对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下内皮细胞中线粒体的保护作用及相关机制。方法:对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)予以OGD损伤,使用MitoTracker Green对线粒体进行定位并观察线粒体形态的变化。使用MitoSOX Red标记线粒体内的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),免疫荧光法观察NBP对OGD条件下细胞线粒体内ROS产生的影响。使用SOD活性试剂盒检测NBP对OGD条件下HUVECs内SOD活性的影响。结果:NBP明显减少了OGD诱导后内皮细胞中线粒体的断裂,抑制了线粒体内ROS的生成,提高了OGD诱导后细胞内SOD的活性。结论:NBP可能是通过保护OGD条件下内皮细胞线粒体的功能和增加细胞内ROS清除,减少线粒体内ROS生成,最终减轻了线粒体损伤。

川芎嗪对缺氧缺糖状态下培养的血管内皮细胞ECV-304的影响

目的 :观察缺氧缺糖条件下血管内皮细胞 (ECV 30 4 )释放乳酸脱氢酶 (LDH)、一氧化氮 (NO)、丙二醛(MDA)水平和细胞膜流动性的变化及川芎嗪对它们的影响。方法 :缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤 ,自动生化分析仪测定培养液和细胞层中LDH活性 ;用比色法测定细胞培养液中NO水平 ;用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物MDA以评价脂质过氧化程度 ;荧光偏振法测定内皮细胞膜流动性。结果 :缺氧缺糖引起的血管内皮细胞LDH释放增加、MDA生成增多和膜流动性增高 ,NO水平降低。而川芎嗪可抑制缺氧缺糖引起的血管内皮细胞释放LDH ,MDA生成和降低细胞膜流动性 ,提高NO水平。结论 :川芎嗪可保护缺氧缺糖诱导血管内皮细胞的损伤 ,其作用机制有待进一步研究。

丁苯酞对缺氧缺糖条件下血管内皮细胞VEGF和HIF-1α表达的影响

目的:探讨丁苯酞(NBP)保护缺氧缺糖(OGD)细胞损伤的机制。方法:对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)予以OGD损伤,MTT法检测细胞活性;Hoechst 33342染色检测细胞核形态;免疫荧光法观察血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达,IPP软件分析荧光强度,进行定量分析;Western blotting检测加以验证。结果:NBP在0.01-10μmol/L浓度之间剂量依赖性减少了OGD导致的细胞活性下降和细胞核形态改变。NBP促进了OGD后HUVECs内VEGF和HIF-1α的表达,均高于OGD组,荧光定量分析差异显著。两者表达的高峰分别为OGD后6h和8h。结论:NBP可以促进内皮细胞在缺氧缺糖条件下HIF-1α的表达,从而引起下游VEGF的表达增多,最终保护内皮细胞免受缺氧缺糖损伤。

黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的保护作用

目的 :探讨黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞的影响。方法 :取SD乳鼠的心脏 ,经消化 ,分离及纯化制成心肌细胞悬液并接种至 2 4孔培养板中 ,通过缺氧缺糖 ,建立心肌细胞“缺血性”损伤的实验病理模型 ,在此基础上观察黄芩苷对缺氧缺糖心肌细胞形态及细胞内SOD、MDA水平及NO分泌的影响。结果 :0 1～ 10 μg/ml的黄芩苷可显著提高缺氧性心肌细胞中SOD活性 ,10 μg/ml的黄芩苷显著抑制MDA的生成 ,1μg/ml黄芩苷显著增加NO分泌 ,10 μg/ml黄芩苷又抑制NO分泌。 结论 :黄芩苷对缺氧缺糖性心肌细胞损伤具有一定的保护作用。

银杏二萜内酯葡胺注射液对缺糖缺氧损伤的SH-SY5Y细胞保护作用

目的探讨银杏二萜内酯葡胺注射液(YXETNZ)对缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用及可能的机制。方法 SHSY5Y细胞OGD损伤4 h后,与药物一起复氧1 h,然后测定细胞存活率(CCK-8法)、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量;蛋白质免疫印迹检测细胞中p-Akt、p-PKA、p-Bad蛋白量的变化。结果 OGD明显提高SH-SY5Y细胞caspase-3/7酶活力和细胞质中核小体含量,明显降低细胞的存活率。YXETNZ能明显提高OGD损伤的SH-SY5Y细胞的存活率,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,上调p-Akt、p-PKA和p-Bad激酶蛋白量,提高Akt和PKA活性,保护神经细胞。结论 YXETNZ对OGD损伤的SHSY5Y细胞具有明显的保护作用,其保护机制可能与细胞内PI3K/Akt/Bad/caspase-3/7、c AMP/PKA/Bad/caspase-3/7细胞通路的激活有关。

党参皂苷L1抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参皂苷L1对神经细胞凋亡的抑制作用。方法胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle s液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo3法流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,评价药效。结果(1)细胞存活率(%)与模型组(29.89±6.28)比较党参皂苷L11.0mg L组(46.05±8.92)、0.1mg L组(46.83±6.76)、0.01mg L组(41.05±9.18)均能显著提高细胞存活率(P<0.01和P<0.05);(2)细胞坏死率(%)与模型组(44.99±12.81)比较,党参皂苷L11.0mg L组(19.45±2.31)、0.1mg L组(18.78±4.95)和0.01mg L组(22.37±4.44)能显著降低细胞坏死率(P<0.001);(3)原位双染法细胞凋亡率(%)与模型组(17.44±4.82)比较,党参皂苷L11.0mg L组(8.75±1.88)、0.1mg L组(9.73±1.76)能显著降低细胞凋亡率(P<0.01和P<0.05);(4)流式细胞术检测细胞凋亡率(%)与模型组(8.55±3.84)比较,党参皂苷L11.0mg L组(4.21±2.31)、0.1mg L组(3.83±2.95)能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);(5)细胞内Ca2+平均荧光值,与模型组(47.37±9.68)比较,?

黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3的表达

目的观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关蛋白c-Jun氨基末端激酶3(c-Jun N ter-minal kinase 3,JNK3)及其mRNA表达的影响,探讨黄芪注射液防治海马神经元凋亡可能的作用机制。方法取原代培养8d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液组和黄芪溶剂对照组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液组和黄芪溶剂对照组进行缺氧缺糖0.5h再复氧复糖,并于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120h采用Western blot、ELISA和RT-PCR方法检测海马神经元JNK3蛋白及其mRNA的表达。结果缺氧缺糖/复氧复糖组在0、0.5、2、6、24和72h海马神经元JNK3蛋白条带平均光密度值及蛋白活性均较正常对照组增加(P<0.05),而复氧复糖120h组较正常对照组降低(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,除120h之外,黄芪注射液组在各个时间点JNK3蛋白条带的平均光密度值及蛋白活性均降低(P<0.05);而黄芪溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比则差异无显著性(P>0.05)。缺氧缺糖/复氧复糖组在0、0.5、2、6、24、72和120h海马神经元JNK3mRNA平均光密度值均较正常对照组增加(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,除120h之外,黄芪注射液组在各个时间点JNK3mRNA的平均光密度值均降低(P<0.05);而黄芪溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比则差异无显著性(P>0.05)。结论黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因JNK3mRNA表达,从而抑制JNK3蛋白表达,降低了JNK3蛋白活性,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖引起大鼠海马神经元凋亡的作用。

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及其mR-NA表达的影响。方法:取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、溶剂对照组(缺氧缺糖/复氧复糖+黄芪注射液溶剂处理组)和黄芪注射液处理组(缺氧缺糖/复氧复糖+黄芪注射液处理组)。除正常对照组外,各组均进行缺糖缺氧0.5 h,再分别于复氧复糖后0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h采用Western blotting法检测海马神经元Bcl-2和Bax蛋白的表达,RT-PCR法检测海马神经元bcl-2和bax mRNA的表达。结果:Western blotting结果显示:与正常对照组比,模型组Bcl-2和Bax蛋白表达明显升高,而Bcl-2/Bax比值下调(P<0.05);与模型组比,黄芪注射液处理组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05),而溶剂对照组Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax比值则无显著变化(P>0.05)。bcl-2 mRNA、bax mRNA表达趋势同蛋白。结论:黄芪注射液可提高缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值,抑制Bax表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖引起的海马神经元凋亡。