丹皮酚对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经元EAA、NMDA受体表达的影响及机制探讨

目的观察丹皮酚对缺糖缺氧（OGD）再灌注损伤大鼠海马神经元兴奋性氨基酸（EAA）、N．甲基．D．天门冬氨酸（NMDA）受体表达的影响，探讨该药的神经保护作用机制。方法原代培养新生大鼠海马神经元8～12d后随机分为4组，其中对照组正常换液培养；模型组、丹皮酚组、地佐环平（MK-801）组均制备OGD再灌注损伤模型，在此基础上丹皮酚组于每个再灌注时间点前分别加入丹皮酚，MK-801组则加入MK-801溶液；倒置相差显微镜下观察神经元一般形态学变化，用MTr法测定神经元存活率，分别采用放射配基结合实验及RT-PCR法测定NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达，以氨基酸分析仪检测EAA含量。结果模型组神经元肿胀或变形，突起缩短并逐渐消失，胞质内颗粒变性明显、甚至完全崩解；丹皮酚组及MK-801组神经元形态改变均较模型组减轻，胞体完整，突起较清楚，基本保持完整。与对照组比较，模型组神经元存活率明显降低，NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达及E从含量明显升高，而丹皮酚组及MK_801组上述指标均较模型组明显改善（P均〈0．05）。结论丹皮酚对离体培养的大鼠海马神经元OGD再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能与抑制EAA及NMDA受体表达有关。

miR-214-3p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制

目的探讨miR-214-3 p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用数据库TargetScan 7.2预测miR-214-3 p和B淋巴细胞瘤因子2样蛋白2(BCL2L2)之间的结合位点;选取人胚肾293T细胞共转染分为BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+miR-214-3 p mimic(wt+mimic)组、BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+mimic negative control(wt+NC)组、BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+miR-214-3 p mimic(mut+mimic)组及BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+mimic NC(mut+NC组),检测4组293T细胞荧光素酶的发光活性;肾上腺嗜铬神经细胞瘤12(PC12)细胞转染miR-214-3 p mimic(mimic组)、miR-214-3 p mimic NC(mimic NC组)、miR-214-3 p inhibitor(inhibitor组),miR-214-3 p inhibitor NC(inhibitor NC组),采用蛋白免疫印迹法检测BCL2L2蛋白表达;PC12细胞作为对照(Control组),用缺氧缺糖(OGD/R)处理PC12细胞构建缺血再灌注细胞模型(OGD/R组),用miR-214-3 p mimic转染PC12细胞,然后用OGD/R处理PC12细胞(OGD/R+mimic组),采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测Control组和OGD/R组miR-214-3 p及BCL2L2 mRNA表达,采用蛋白免疫印迹法检测Control组、OGD/R组及OGD/R+mimic组裂解胱天蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)及B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果数据库Targetscan 7.2预测结果表明,miR-214-3 p与BCL2L2的3′UTR区之间存在结合位点;荧光素酶报告基因实验结果表明,wt+mimic组荧光素酶活性低于wt+NC组,mut+mimic组和mut+NC中荧光素酶活性无明显差异;mimic NC组BCL2L2的蛋白表达高于mimic组,inhibitor NC组BCL2L2的蛋白表达低于inhibitor组(P<0.05);与Control组比较,OGD/R组PC12细胞中BCL2L2 mRNA和蛋白表达水平降低、miR-214-3 p mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);OGD/R组Cleaved-caspase-3和Bax表达分别高于Control组、低于OGD/R+mimic组,但Bcl2表达分别低于Control组、高于OGD/R+mimic组(P<0.05)。结论过表达miR-214-3 p可靶向结合并下调BCL2L2的表达,从而加速PC12细胞的凋亡。

缺糖缺氧/再灌注对星形胶质细胞外泌体miRNAs表达的影响

目的探讨缺糖缺氧/再灌注(OGD/R)对星形胶质细胞外泌体中微小RNA(miRNAs)表达的影响。方法对新生原代培养的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞进行缺糖缺氧(OGD)或OGD/R处理,采用超高速离心法分别收集培养基上清液和细胞内的外泌体。通过透射电镜和流式细胞术鉴定外泌体。采用Illumina Hiseq2500测序平台检测外泌体miRNAs的表达谱,从中选取表达受OGD及OGD/R处理影响的miRNAs。并用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)对生物信息学分析中差异有统计学意义的miRNAs进行实验验证。使用metascape和miRWalk预测高表达miRNAs的靶基因,再将挑选出的共同靶基因在Webgestalt中进行KEGG富集分析。采用Western blot(WB)检测OGD/R及其星形胶质细胞外泌体对全反式维甲酸(ATRA)诱导分化的SH-SY5Y细胞Erk磷酸化水平的影响。结果与对照组相比,OGD 4 h处理改变了星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达谱;而再灌注24 h后改变的miRNAs大部分恢复到对照组水平。qPCR验证显示:3种miRNAs在外泌体中的分布水平远高于细胞,而且这种富集作用可能不受OGD刺激的影响。KEGG富集分析显示:表达上调miRNAs的靶基因信号通路主要为代谢通路,包括PI3K-AKT、MAPK和mTOR信号通路等。OGD、OGD/R及正常星形胶质细胞外泌体处理均能上调相应培养条件下SH-SY5Y细胞的p-Erk1和p-Erk2水平。结论OGD处理能显著影响星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达,其外泌体中富集分布的miRNAs均靶向作用于代谢通路,如PI3K-AKT、MAPK和mTOR等信号通路。

黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用

目的观察黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷治疗脑缺血-再灌注损伤的作用机制。方法选用SH-SY5Y神经细胞,采用缺氧-复氧结合缺糖-复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血-再灌注损伤,观察黄芩苷对此损伤的治疗作用。结果缺氧、缺糖8h结合复氧、复糖12h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞线粒体的活性下降,凋亡率明显上升;而黄芩苷可以显著减轻上述损伤。结论黄芩苷对缺氧、缺糖-再灌注损伤的神经细胞有保护作用。

黄芩苷对小鼠脑片和大鼠皮质神经元缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

目的在离体水平，探讨黄芩苷对缺氧缺糖／再灌注（OGD／RP）诱导的脑片及神经元损伤的保护作用及机制。方法小鼠离体脑片OGD／RP模型中，以2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TFC）产物白腊评价脑片活性；原代培养大鼠皮层神经元OGD／RP模型中，以噻唑蓝（MTT）还原和乳酸脱氢酶（IDH）活性测定神经元活性变化，用2，7一二氯荧光素二乙酸盐（DCF-DA）测定细胞内自由基水平。观察不同时间给予黄芩苷对损伤的保护作用。结果在脑片，全程给药和OGD时给予黄芩苷0.01—1μmol·L^-1，再灌注时给予黄芩苷0．1～1μmol·L^-1，可显著减轻损伤。在神经元，全程给予黄芩苷0．1～1μmol·L^-1可减轻神经元损伤，并降低神经元内自由基水平升高。结论黄芩苷对OGD／RP损伤有浓度依赖性保护作用，再灌注时给药亦有效，其作用至少部分与抗自由基有关。

神经节苷脂GM1对体外缺糖缺氧/再灌注大鼠海马脑片保护作用的研究

目的 :探讨神经节苷脂GM 1对体外缺糖 /缺氧再灌注 (OGD/Rep)大鼠海马脑片的保护作用。 方法 :采用测定脑片OGD/Rep后光通透度改变和 2 ,3 ,5 三苯基氯化四氮唑 (TTC)染色。结果 :①在 0 (对照 )、0 .1、1.0、10 μmol/LGM1四个处理组中 ,1μmol/LGM1组脑片光通透度峰值明显低于对照组和 0 .1μmol/LGM1组 (P <0 .0 1,ANO VA) ,10 μmol/LGM 1组脑片的峰值明显低于其他组 (P <0 .0 1)。脑片OGD后光通透度到达峰值的时间在四组间有显著性差异 (P <0 .0 5 ,Kruskal Wallistest) ,1μmol/LGM1组较对照组有显著差异 (P <0 .0 1,Mann WhitneyUtest)。②GM1与OGD/RP后大鼠海马脑片TTC染色呈现一定的剂量反应关系。在 0 (对照 )、0 .0 1、0 .1、1.0、10μmol/LGM1五组中 ,1μmol/LGM 1组脑片TTC染色最深 (P <0 .0 5vs对照、0 .0 1和 0 .1μmol/L组 ,ANOVA) ,10 μmol/LGM 1组次之 (P <0 .0 5vs对照和 0 .0 1μmol/L组 ,ANOVA)。 结论 :GM 1可以有效的保护体外大鼠海马脑片缺糖 /缺氧再灌注损伤。

银杏蜜环口服溶液对缺氧缺糖再灌注诱导脑微血管内皮细胞和SH-SY5Y细胞炎性损伤的保护作用与机制

目的:探讨银杏蜜环口服溶液对缺氧缺糖再灌注诱导脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细胞SH-HY5Y损伤的保护机制,以及其对e NOs介导的Beclin-1依赖的自噬通路的影响。方法:本研究采用缺氧缺糖再灌注诱导大鼠脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细胞SH-HY5Y构建糖氧剥离+复糖复氧模型,同时给予不同浓度的银杏蜜环口服溶液(5.15 mg/m L、2.575 mg/m L和1.545 mg/m L)及有效组分进行干预,通过观察细胞培养上清炎性因子IL-1β、TNF-α和IL-6的浓度和自噬通路的活化,并采用PI/Annexin V双染色分析细胞凋亡率,探讨银杏蜜环有效成份的脑保护机制。结果:银杏蜜环口服溶液5.15 mg/m L、2.575 mg/m L和1.545 mg/m L3个剂量组均可抑制脑微血管内皮细胞上清液TNF-α、IL-1β和IL-6含量,银杏蜜环口服溶液2.575 mg/m L和1.545 mg/m L可抑制Caspase3、LC3II和Beclin-1表达。同时,银杏蜜环口服溶液2.575 mg/m L明显促进e NOs的磷酸化。其中对L-1β和IL-6的作用明显优于银杏叶提取物和天麻蜜环菌。银杏蜜环口服溶液2.575 mg/m L和1.545 mg/m L还可降低SH-SY5Y细胞的凋亡率(Annexin V+/PI-细胞),差异有统计学意义。结论:银杏蜜环口服溶液可通过促进一氧化氮合酶e NOs的磷酸化来抑制缺糖缺氧再灌引发的细胞凋亡和自噬。

枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧再灌注损伤的影响

目的:观察枸杞多糖对HT22细胞缺糖缺氧再灌注损伤的影响。方法:构建HT22细胞缺糖缺氧再灌注损伤模型,设正常组、模型组、枸杞多糖100,50和25 mg·L^(-1)组,检测细胞存活率;并通过HE染色观察形态学改变;检测细胞内SOD,GSH-PX,MDA,T-AOC;利用流式细胞术检测线粒体膜电位。结果:枸杞多糖100和50 mg·L^(-1)组能明显提高细胞存活率,显著改善缺氧缺糖再灌注损伤引起的形态改变;可显著提高细胞内SOD,GSH-PX及T-AOC,减少MDA的产生;改善线粒体膜电位下降。结论:枸杞多糖能够显著减轻缺糖缺氧再灌注损伤引起的HT22细胞过氧化损伤。

TRPC通道对PC12细胞缺氧缺糖再灌注后氧化损伤的保护作用

瞬时受体电位C通道(transient receptor potential canonical,TRPC)属于瞬时受体电位(TRP)离子通道家族成员之一,与Ca2+调控及氧化应激关系密切.然而,TRPC通道在缺血缺氧性脑损伤中的作用仍有争议.本实验采用MTT法、台盼蓝排斥实验、LDH漏出实验联合Annexin/PI染色流式分析等显示,当采用通道阻断剂—SKF96365特异阻断TRPC通道时,PC12细胞对缺氧缺糖再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD-R)引起的损伤变得更敏感,细胞凋亡增加.尽管同时采用SKF96365、NMDA受体、AMPA受体和L-型钙通道阻断剂可引起细胞损伤和死亡减弱,但仍呈现明显的SKF96365浓度依懒性,提示TRPC通道参与细胞对缺氧缺糖再灌注耐受的调节,具有保护作用.钙指示剂Fluo-3AM荧光标记结合激光共聚焦显微镜分析显示,SKF96365可明显降低缺氧缺糖再灌注后细胞内的Ca2+浓度.总之,实验结果提示,TRPC通道对缺氧缺糖再灌注引起的细胞损伤和凋亡具有保护作用,其机制可能涉及TRPC通道对细胞内钙浓度的调节,详尽机制有待进一步研究.

三七总皂苷对体外培养的海马神经干细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用

目的：探讨三七总皂苷对缺氧缺糖一再灌注损伤新生大鼠海马神经干细胞的保护作用及其机制。方法：新生24h内大鼠海马神经干细胞培养采用无血清培养法，选用缺氧一复氧结合缺糖一复糖的方法，对其进行造模，实验分对照组、缺血再灌注组与三七总皂苷大、中、小剂量组，行MTT法检测和免疫荧光双标显色。结果：MTT法显示，缺氧缺糖-再灌注组细胞活性和存活率较对照组明显降低；三七总皂苷大剂量组细胞活性和存活率较缺血再灌注组无显著差异；三七总皂苷中、小剂量组细胞活性和存活率与模型组比较显著升高，其中尤以小剂量组最为明显。缺血再灌注组阳性细胞数较对照组显著减少。三三七总皂苷小剂量组阳性细胞数较缺血再灌注组显著增多。结论：i七总皂苷对缺氧缺糖一再灌注损伤的新生大鼠海马神经干细胞有保护作用。

消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注损伤PC12细胞的保护作用

目的:观察消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注损伤肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的作用。方法:以PC12细胞缺氧缺糖再灌注损伤模拟脑缺血再灌注损伤,研究消栓肠溶胶囊在0. 01～10. 00 mg/L浓度范围内对其的作用,采用噻唑蓝法(MTT法)检测PC12细胞的存活率;乳酸脱氢酶(LDH)法检测PC12细胞损伤程度;酶联免疫(ELISA)法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和凋亡相关因子P53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,BCL-2)、BCL-2关联X蛋白(bcl2-associated X protein,Bax)和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)的水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测p53 mRNA、Bax mRNA和caspase-3 mRNA的表达;分光光度法检测超氧化歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平,以及采用荧光酶标仪检测活性氧(ROS)的表达。结果:与模型组比较,消栓肠溶胶囊各剂量组干预后,缺氧缺糖再灌注诱导的PC12细胞的存活率显著增加(P <0. 05),细胞外LDH比例显著减少(P <0. 05),MMP-9、P53、Bax、Caspase-3、MDA和ROS表达都显著减少(P <0. 05),而BCL-2表达和SOD活性都显著增加(P <0. 05)。结论:消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注诱导的PC12细胞损伤具有明显保护作用,能减少细胞凋亡相关因子表达,其机制可能与抑制MMP-9表达和减轻氧化应激损伤有关。

肌肽对大鼠脑片缺氧缺糖/再灌损伤的保护作用

目的在离体脑片缺氧缺糖/再灌损伤模型上,评价肌肽对脑组织的保护作用。方法肌肽预处理后,用缺氧缺糖/再灌(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/RP)来制备大鼠离体脑片损伤模型。以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法检测脑片活性;HPLC法检测海马脑片中ATP、ADP、AMP含量;荧光法检测脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)。结果与对照组相比,缺氧缺糖/再灌损伤可以明显损伤大鼠海马脑片,TTC染色颜色变浅,A490 nm明显下降,ATP和ADP含量明显降低,而AMP含量明显升高,ROS明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,缺氧缺糖/再灌损伤前预先加入1000、200、40μg/m L肌肽预处理15 min可显著抑制缺氧缺糖/再灌引起的损伤,TTC染色颜色加深,A490 nm明显升高,ATP、ADP、AMP含量升高,ROS含量降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论肌肽可减轻缺氧缺糖/再灌导致的损伤,其机制可能与其改善脑组织能量代谢,增强抗氧化能力有关。

乙酰葛根素对缺糖缺氧大鼠海马神经元NMDA受体的影响

目的：探讨乙酰葛根素（化合物N-2211）对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经元保护作用的机制。方法：原代培养大鼠海马神经元，根据再灌注不同时间（1h，6h，12h，24h）及药物不同剂量（1．6μmol·L^-1，0．4μmol·L^-1，0．1μmol·L^-1）将神经元随机分为17组，每组细胞均在倒置相差显微镜下动态观察低糖低氧再灌注不同时间一般形态学变化，MTT检测不同时间神经元活性，氨基酸分析仪测定谷氨酸含量，液闪测量法测定NMDA受体结合力，PT—PCR半定量检测NMDA受体NR1亚基的表达，荧光分光光度计测定神经元内游离Ca^2＋含量。结果：乙酰葛根素各浓度明显减轻神经元形态改变，MK-801（10μmol·L^-1）有相同作用；MTY结果提示乙酰葛根素可提高光密度，较MK-801作用显著；乙酰葛根素高、中浓度及MK-801均能降低再灌注各时间点谷氨酸含量，乙酰葛根素低浓度虽能降低谷氨酸含量，但无统计学意义；乙酰葛根素高、中、低浓度不同时间点的受体结合力均比损伤组降低，作用优于MK-801；RT—PCR结果显示乙酰葛根素低、中、高浓度及MK-801组不同时间点的NRI亚基mRNA表达均比损伤组降低；荧光检测结果提示三种浓度乙酰葛根素均可降低神经细胞内Ca^2＋浓度，MK-801组亦有相同作用。结论：乙酰葛根素可以减轻神经元的损伤，降低NMDA受体结合力，减少NMDA受体NR1亚基的表达及抑制缺糖缺氧再灌注所致的钙超载。

管花肉苁蓉醇提取物对缺氧/缺糖再灌注所致神经细胞损伤的保护作用及机制研究

探究管花肉苁蓉醇提取物(CTEE)对缺氧/缺糖再灌注(OGD/R)所致的PC12细胞损伤的抑制作用及潜在机制。实验以OGD/R诱导PC12细胞作为损伤模型,通过MTT法检测细胞存活率、通过AO/EB与Hoechst 33258染色法考察细胞凋亡、通过JC-1染色法考察线粒体膜电位变化、通过MitoSOX染色法考察线粒体氧化应激反应,通过Western blot法考察凋亡相关蛋白(PARP,cleaved PARP,caspase-3,cleavd caspase-3,Bax,Bcl-2)的表达,研究了CTEE(12. 5,25,50 mg·L-1)对神经细胞的保护作用。结果显示,CTEE可以有效保护OGD/R诱导的PC12细胞损伤,并提高PC12细胞存活率,AO/EB与Hoechst 33258染色法显示CTEE可以有效抑制细胞凋亡。此外,JC-1与MitoSOX染色法显示CTEE可显著降低细胞中线粒体的氧化应激及线粒体膜电位的失调,且呈剂量依赖性。同时,CTEE可明显抑制线粒体凋亡信号通路中关键蛋白caspase-3和PARP的激活,且明显抑制Bax的升高和Bcl-2的下调。以上结果表明,管花肉苁蓉醇提取物对OGD/R所致的PC12细胞损伤具有较好的保护作用,其潜在机制可能是通过抑制线粒体氧化应激及相关凋亡信号通路实现的。

毛蕊花糖苷抗缺氧缺糖/再灌注所致神经细胞损伤的保护作用及核心药效团发现

探究毛蕊花糖苷抗缺氧缺糖/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R)所致的PC12神经细胞损伤的保护作用及核心药效团结构。以OGD/R诱导的PC12细胞作为神经细胞损伤模型,通过MTT存活率及结晶紫染色分析,考察毛蕊花糖苷及其系列结构片段(咖啡酸3,4-二羟基苯乙酯、咖啡酸、3,4-二羟基苯乙醇)对神经细胞的保护作用;通过Hoechst33258细胞凋亡染色、JC-1线粒体染色以及透射电镜分析,考察毛蕊花糖苷及其系列结构片段通过线粒体途径发挥神经细胞保护的可能性;通过Western blot检测B淋巴细胞瘤2 (B cell lymphoma 2, Bcl 2)/Bcl 2相关X蛋白(Bcl 2 associated X protein, Bax)介导的线粒体半胱天冬氨酸蛋白酶3 (cysteinyl aspartate specific proteinase 3, caspase 3)/DNA修复酶(poly ADP-ribose polymerase, PARP)凋亡通路蛋白表达,考察毛蕊花糖苷及其核心活性片段咖啡酸发挥神经细胞保护的分子机制。结果显示,毛蕊花糖苷、咖啡酸3,4-二羟基苯乙酯、咖啡酸均可显著提高PC12细胞存活率并维持细胞正常形态,同时还可显著逆转OGD/R诱导的PC12细胞凋亡,抑制细胞线粒体的去极化,维持线粒体的正常结构。此外,毛蕊花糖苷及其核心活性片段咖啡酸可明显抑制线粒体凋亡蛋白caspase 3和PARP的剪切,下调Bax并提高Bcl 2蛋白的表达。综上表明,毛蕊花糖苷能够通过线粒体caspase 3/PARP凋亡通路保护缺氧缺糖/再灌注所致的神经细胞损伤,且咖啡酸可能是其发挥该作用的核心药效团结构。

辛酸钠对骨骼肌细胞缺糖缺氧/再灌注损伤的保护作用

该研究探索了辛酸钠对骨骼肌细胞缺糖缺氧/再灌注(OGD/Rep)损伤的保护作用。利用锥虫蓝染色法测定6种不同浓度的辛酸钠培养液对正常培养骨骼肌细胞24 h存活率的影响。随后采用缺糖缺氧后复糖复氧的方法构建骨骼肌细胞OGD/Rep损伤模型,将细胞随机分为对照组、OGD/Rep组、0.25 mmol/L辛酸钠组和0.50 mmol/L辛酸钠组。CCK8法测定各组细胞活性,检测各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物(·O_(2)^(-))以及超氧化物歧化酶(SOD)水平;JC-1荧光探针测定各组细胞线粒体膜电位水平;TUNEL染色法检测各组细胞凋亡数目,Western blot测定各组细胞Bax、Bcl-2、Mfn-2、Drp-1蛋白表达水平。结果表明,6种浓度辛酸钠处理组中,0.25 mmol/L辛酸钠组、0.50 mmol/L辛酸钠组与对照组细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,OGD/Rep组细胞活性降低,细胞LDH水平升高,细胞中·O_(2)^(-)产生量增加,SOD活性降低,线粒体膜电位降低以及细胞凋亡数目增多(P<0.05)。与OGD/Rep组相比,0.25 mmol/L辛酸钠组、0.50 mmol/L辛酸钠组细胞活性均增强,细胞LDH水平下降(P<0.05);0.25 mmol/L辛酸钠组·O_(2)^(-)水平有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);0.25 mmol/L辛酸钠组SOD活性增强(P<0.05)。0.25 mmol/L和0.50 mmol/L辛酸钠组与OGD/Rep组相比线粒体膜电位增加,细胞凋亡数目减少。与对照组相比,OGD/Rep组Bcl-2/Bax蛋白值降低,Drp-1和Mfn-2蛋白表达量降低;而与OGD/Rep组相比,0.25 mmol/L、0.50 mmol/L辛酸钠组Bcl-2/Bax蛋白值升高,Drp-1和Mfn-2蛋白表达量增加。研究表明,早期应用辛酸钠可减轻OGD/Rep引起的骨骼肌细胞损伤,抑制细胞的过氧化状态并减少细胞凋亡,其机制可能与辛酸钠调节线粒体结构动态平衡相关。

基于网络药理学与体外实验探讨川芎活性成分治疗缺血性脑卒中的作用机制

目的 运用网络药理学和体外细胞实验探究川芎活性成分治疗缺血性脑卒中的潜在作用机制。方法检索TCMSP数据库、Genecards数据库、Drugbank数据库等及相关文献,获得川芎活性成分、作用靶点及缺血性脑卒中相应疾病靶点,并将作用靶点与获得的疾病靶点的交集作为潜在靶点;利用String平台,对潜在靶点构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络;采用R语言软件包对潜在靶点进行基因本体(Gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,然后使用Cytoscape软件分析其网络拓扑结构,筛选其核心靶点,并进行分子对接验证。在此基础上,通过CCK-8法检测川芎中的活性成分对缺氧缺糖/再灌注损伤细胞模型的作用,免疫印迹法(Western blot)验证川芎单体成分对相关靶点蛋白的影响。结果 川芎治疗缺血性脑卒中的主要潜在活性成分有16个;药物-疾病靶点有53个;涉及的信号通路主要有神经元神经活性配体-受体相互作用信号通路、钙离子信号通路、血管内皮生长因子信号通路等;关键核心靶点与活性成分藁本内酯[(Z)-Ligustilide]、叶酸(Folic acid)、川芎哚(Perlolyrine)结合具有稳定构象。体外实验结果表明,川芎活性成分藁本内酯能提高缺氧缺糖/再灌注损伤细胞的存活率,并上调转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平。结论 川芎多种活性成分可能通过作用于血管内皮生长因子A(VEGFA)、前列素内环氧化物合成酶2(PTGS2)、雌激素受体(ESR1)、TGFB1等靶点治疗缺血性脑卒中,为川芎活性成分治疗缺血性脑卒中的作用机制研究提供了科学参考。

丹酚酸B对体外模拟脑缺血再灌注损伤新生大鼠海马神经干细胞的保护作用

目的:探讨丹酚酸B对新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:无血清法培养新生大鼠海马NSCs,将细胞分为对照组、缺糖缺氧-再灌注(OGD-R)组和丹酚酸B组。对照组正常培养,OGD-R组用无糖Earle’s液于缺氧后正常孵育,丹酚酸B组在OGD-R基础上用丹酚酸B干预培养。MTT法测定细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),DAPI染色检测细胞凋亡,Nestin/BrdU双标染色检测细胞增殖。结果:与对照组比较,OGD-R组细胞的OD值、细胞存活率及DAPI核染、Nestin/BrdU阳性反应明显降低,LDH漏出率明显升高(P<0.01)。与OGD-R组比较,丹酚酸B组细胞的OD值、细胞存活率及DAPI核染、Nestin/BrdU阳性反应的光密度、面密度及细胞数明显增多,LDH漏出率明显降低(P<0.01)。结论:丹酚酸B可提高OGD-R新生大鼠海马NSCs的细胞存活率,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖。