麝香保心丸对缺血再灌注大鼠心肌损伤及细胞自噬的调节作用

目的观察麝香保心丸(Shexiang baoxin pill,SBP)对缺血/再灌注损伤(Ischemia/reperfusion injury,I/R)大鼠心肌组织的保护作用及与自噬的调节关系。方法采用左冠状动脉前降支缺血再灌注建立I/R模型。将Sprague-Dawley(SD)大鼠30只按随机数字表法分为对照组、模型组及SBP组,每组各10只。通过心脏超声多普勒检测大鼠不同时期左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(Fractional shortening,FS)、左室舒张末期内径(Left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)和左心室收缩期内径(Left ventricular end systolic dimension,LVIDs)的变化,HE染色观察心肌组织病理改变,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,采用qRT-PCR方法检测白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和自噬相关基因(Autophagy-related genes,ATG)、BCL-2关联X蛋白(BCL-2 associated X protein,Bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达水平。采用Western blot检测自噬特异性基因(Beclin-1)、泛素结合蛋白p62(p62)和微管相关蛋白质1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达水平。结果与对照组比较,心肌缺血/再灌注损伤后,各组大鼠心脏LVEF、FS均下降,LVIDd、LVIDs均增大。术后随访发现SBP组大鼠心脏功能指标较模型组明显改善。HE染色见SBP减轻I/R大鼠心肌细胞水肿紊乱情况。TUNEL染色显示,与对照组比较,模型组心肌组织显示凋亡细胞增多,而经SBP处理的大鼠心肌组织中凋亡细胞减少,说明SBP可以减轻I/R导致的细胞损伤。通过qRT-PCR检测发现,与对照组比较,模型组大鼠ATG12表达水平明显上调。而SBP组大鼠在1个月随访时发现ATG12表达水平较模型组降低。说明SBP抑制I/R诱导的ATG12 mRNA表达上调。与对照组比较,模型组Bax表达增加,Bcl-2表达降低。与模型组比较,SBP处理后大鼠心肌组织中Bax表达降低,Bcl-2表达升高。表明SBP可以下调促凋亡蛋白,上调抗凋亡基因。与对照组比较,模型组Beclin-1、p62及LC3-II/LC3-I水平均明显升高。与模型组比较,SBP下调了心肌中Beclin-1、p62和LC3-II/LC3-I蛋白的表达水平。结论心肌缺血再灌注可增强自噬反应,促进细胞凋亡。麝香保心丸可能通过调节ATG12从而抑制自噬,对受损心肌发挥保护作用,改善心肌细胞凋亡。

电针预处理通过调控AKT/mTOR信号通路减轻缺血再灌注大鼠心肌损伤

目的观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠的影响并探讨其作用机制。方法30只SD大鼠随机抽取6只为假手术组(只穿线不结扎),剩余大鼠采用冠脉结扎法建立心肌缺血再灌注损失(MIRI)大鼠模型,并在造模前1周分别进行电针内关预处理、雷帕霉素预处理和雷帕霉素+电针内关预处理。造模结束后用HE染色法检测心肌细胞病理形态学变化;ELISA法检测血清中CK-MB和IL-6含量;Western-blot法检测Beclin1、Caspase3及磷酸化的AKT、mTOR蛋白表达。结果与模型组比较,电针组心肌纤维断裂减少、细胞间质出血减少,其损伤程度与假手术组较为接近;与雷帕霉素组比较,雷帕霉素+电针组心肌纤维断裂减少、细胞水肿程度减轻。与假手术组比较,模型组大鼠CK-MB、IL-6、Beclin1和Caspase3表达明显升高,p-AKT、p-mTOR表达明显下调(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠CK-MB、IL-6、Beclin1和Caspase3表达明显下调,p-AKT、p-mTOR表达明显升高(P<0.01);与电针组比较,雷帕霉素+电针组大鼠IL-6、CK-MB、Beclin1和Caspase3表达明显升高(P<0.05或P<0.01),p-AKT、p-mTOR表达明显下调(P<0.01)。结论电针内关预处理减轻大鼠MIRI可能与激活AKT/mTOR信号通路相关。

MOTS-c肽对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

目的 探讨线粒体衍生肽MOTS-c对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌的保护作用,并阐明其作用机制。方法 将SD大鼠随机分成假手术组(sham组)、模型组(MIRI组)、MOTS-c组和MOTS-c+PGC-1α抑制剂SR-18292组(MOTS-c+SR-18292组),每组10只。采用冠状动脉前降支结扎法建立大鼠MIRI模型。各组大鼠于术前1 h及术后即刻经尾静脉给予MOTS-c肽(1 mg/kg)、SR-18292(20 mg/kg)和等体积浓度为1%的二甲基亚砜干预。术后24 h,采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察各组心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理变化;原位末端标记法(TUNEL)染色检测各组心肌组织凋亡水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)和生化试剂盒测定各组血清中心肌损伤标志物和氧化指标水平;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组心肌组织线粒体DNA(mtDNA)相对拷贝数;Western blot检测各组心肌组织中线粒体生物合成相关蛋白表达水平。结果 与sham组比较,MIRI组大鼠心肌损伤严重,心肌组织梗死面积和凋亡水平升高(P<0.05),心肌组织mtDNA相对拷贝数降低(P<0.05),血清中CK-MB、LDH、cTnI及心肌组织中MDA含量升高(P<0.05),而SOD含量及PGC-1α、NRF-1、TFAM等蛋白表达水平降低(P<0.05)。与MIRI组比较,MOTS-c组大鼠心肌损伤明显改善,心肌组织梗死面积和凋亡水平降低(P<0.05),心肌组织mtDNA相对拷贝数升高(P<0.05),血清中CK-MB、LDH、cTnI及心肌组织中MDA含量降低(P<0.05),而SOD含量及PGC-1α、NRF-1、TFAM等蛋白表达水平升高(P<0.05)。与MOTS-c组比较,MOTS-c+SR-18292组大鼠心肌组织梗死面积和凋亡水平升高(P<0.05),心肌组织mtDNA相对拷贝数降低(P<0.05),血清中CK-MB、LDH、cTnI及心肌组织中MDA含量升高(P<0.05),而SOD含量及PGC-1α、NRF-1、TFAM等蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 MOTS-c肽可促进心肌细胞线粒体生物合成,抑制心肌细胞凋亡,改善MIRI大鼠心肌损伤,其机制可能与上调PGC-1α表达有关。

益气活血中药联合缺血后适应保护缺血再灌注大鼠心肌损伤的机制

目的:观察益气活血中药是否可增加缺血后适应(ischemic postconditioning,IPoC)保护缺血再灌注(ischemiareperfusion,I/R)大鼠心肌的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:SD大鼠75只,随机分为假手术组(冠状动脉前降支下置线不结扎,n=15),I/R组(冠状动脉前降支结扎30 min,再灌注1 h,n=15),IPoC组(冠状动脉前降支结扎30 min,3次10 s的再灌注/缺血循环,再持续灌注1 h,n=15),益气活血加IPoC组(心悦胶囊0.162 g/kg加芎芍胶囊0.135 g/kg,连续灌胃14 d,末次灌胃后2 h实施IPoC干预,n=15),福辛普利钠加IPoC组(福辛普利钠片0.9 mg/kg灌胃,n=15)。比色法测定血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)和肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的含量,氯化硝基四氮唑蓝染色检测大鼠左室心肌梗死面积,免疫组织化学法检测心肌组织Toll样受体(Toll-likereceptor,TLR)2、4的表达,酶联免疫吸附测定法检测心肌组织白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的含量。结果:与I/R组比较,IPoC组大鼠血清CK-MB活性和cTnT水平明显降低(P<0.01),心肌梗死面积显著减小(P<0.01),心肌组织TLR2、4表达和炎症因子IL-6、IL-1β含量明显下降(P<0.05,P<0.01);与福辛普利钠加IPoC组比较,益气活血加IPoC组心肌组织TLR2、4表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与IPoC比较,益气活血加IPoC可进一步减小I/R大鼠心肌梗死面积,降低血清CK-MB活性(P<0.01),减少心肌TLR2、4表达和IL-1β、IL-6含量(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血中药可加强缺血后适应对I/R大鼠心肌的保护作用,其机制可能与抑制TLR2、4以及其下游促炎性细胞因子的表达有关。

黄芩甙对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

采用大鼠心肌缺血再灌注模型观察黄芩甙对缺血再灌注后心律失常和心肌损伤的保护作用。实验大鼠分为假手术组、缺血再灌注组、黄芩甙I组、黄芩甙II组和维拉帕米组。观察对各组大鼠心电图、血清磷酸肌酸激酶(CPK)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)及心肌组织内超氧化物歧化酶 (SOD)、脂质过氧化物丙二醛 (MDA)的影响。结果表明 ,黄芩甙可显著减少再灌注性心律失常发生率 ,降低CPK活性和MDA含量 ,升高SOD和GSH PX活性。提示黄芩甙对再灌注心肌具有保护作用 。

槲皮素对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

采用大鼠心肌缺血再灌注模型 ,观察槲皮素对缺血再灌注心肌损伤的保护作用。实验大鼠分为假手术组、缺血再灌注组、槲皮素组和维拉帕米组。观察槲皮素对各组大鼠血清肌酸磷酸激酶 (CPK)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)以及ATP酶的影响 ,并通过光镜及电镜观察病理学改变。结果表明 :槲皮素可显著降低CPK活性 ,升高GSH Px和ATP酶活性。提示 :槲皮素对缺血再灌注心肌具有保护作用 ,病理结果进一步证实了这一点。推测其机制可能与抗脂质过氧化反应及增强心肌的能量代谢。

芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

目的观察芪丹通脉片预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞损伤的影响。方法雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组(A组)、缺血再灌注模型组(B组)、芪丹通脉片加缺血再灌注Ⅰ组(C组)、芪丹通脉片加缺血再灌注Ⅱ组(D组)。大鼠麻醉开胸,结扎冠状动脉前降支40min,再灌注4h。采用Evan’sBlue和TTC染色测定心肌梗死范围,并TUNEL法测定大鼠心肌组织的细胞凋亡,检测血清中肌酸激酶(CK)和肌钙蛋白I(cTnI)的水平。结果不同剂量(1.08g/kg,3.24g/kg)芪丹通脉片预处理组,缺血/再灌注后心肌梗死面积和凋亡指数显著小于模型组(P<0.05或P<0.01);与假手术组比较,缺血/再灌注4h后B组大鼠血清CK和cTnI有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而不同剂量芪丹通脉片预处理组再灌注后血清CK和cTnI含量明显降低,与B组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论芪丹通脉片预处理能够有效地抑制缺血/再灌注所致大鼠心肌损伤。

粉防己碱对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用及机制探讨

48只雄性SD大鼠,随机分为Sham组(假手术组)、I/R组(缺血再灌注组)和Tet组(手术与I/R组相同,术前20 min腹腔注射粉防己碱3 mg/kg)。检测再灌注结束后三组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平及心肌梗死范围(IS/AAR),应用透射电镜观察心肌超微结构变化。结果与I/R组相比,Tet组大鼠心肌LDH活性值和MDA水平明显降低,SOD水平升高,心肌梗死范围减小。与I/R组相比,Tet组透射电镜下心肌细胞形态改变显著减轻,肌原纤维排列较整齐,线粒体嵴光滑。认为粉防己碱对大鼠再灌注损伤心肌具有保护作用,其保护机制可能与其抗氧自由基作用有关。

利多卡因预处理对肾脏缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响

目的:观察利多卡因对肾脏缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响。方法:健康Wistar大鼠36只,体重300～350g,随机分为3组(n=12),假手术组(sham组)只分离肾动脉不夹闭;肾缺血再灌注组(I/R组),双肾缺血60min、再灌注4h;利多卡因组(L组)肾动脉阻断前静脉注射利多卡因5mg/kg,I/R组、sham组注射等量生理盐水,术中观察不同时间点的血压、心率。实验结束后处死大鼠,光镜观察心肌组织形态学改变,测定血浆心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)含量,心肌组织中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)含量,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:光镜下可见I/R组呈明显心肌损伤的形态学变化,L组心肌组织损伤明显改善。I/R、L组血浆H-FABP,心肌组织NE、TNF-α较sham组升高,但是I/R组高于L组(P<0.05)。结论:利多卡因预处理对肾脏缺血再灌注大鼠心肌损伤具有一定程度的保护作用,其机制可能与减轻肾缺血再灌注后心肌组织中性粒细胞浸润及下调TNF-α表达有关。

咪达唑仑对2型糖尿病心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤、氧化应激和炎症反应的影响

目的观察咪达唑仑对2型糖尿病心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤、炎症反应和氧化应激的影响。方法将Wistar雄性大鼠随机分为对照组和糖尿病组。观察组通过高脂饮食和链脲霉素方法诱导大鼠2型糖尿病模型。将糖尿病大鼠随机分为糖尿病假手术组(DS组)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组)、糖尿病心肌缺血再灌注大鼠给药组(DI/RM组);将对照组大鼠随机分为假手术组(sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、心肌缺血再灌注给药组(I/RM组)。结扎冠状动脉获得局部缺血构建心肌缺血再灌注模型。缺血给药前20 min,I/RM组和DI/RM组大鼠静脉注射咪达唑仑0.75 mg/kg,并以1 mg/(kg·h)微注射泵维持至再灌注结束。FDP-1 HRV和BRS分析系统测定心功能;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和心肌组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)表达水平;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶-1(NQO-1)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与DI/R组比较,DI/RM组大鼠心脏左室收缩压(LVSP)、心率(HR)和冠状动脉流量(CF)升高(P<0.01),左室舒张末期压力(LVEDP)及血清LDH和CK-MB活性、cTnI含量降低(P<0.01),心肌细胞逐渐恢复整齐排列,细胞变性坏死减少,心肌细胞凋亡率降低(P<0.01),GSH含量和SOD活性升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量减少(P<0.01),心肌细胞Nrf2、NQO-1和HO-1表达上调(P<0.01)。结论咪达唑仑可减轻2型糖尿病心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤,抑制氧化应激和炎症反应,可能与调节Nrf2通路有关。

肾上腺髓质素对肢体缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨外源性肾上腺髓质素(ADM)对大鼠肢体缺血再灌注(LIR)后心肌损伤的防治作用及其机制。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组(Control组)、肢体缺血再灌注组(LIR组)和ADM+LIR组(ADM组),每组10只。采用放射免疫方法测定大鼠血浆和心肌组织中内皮素-1(ET-1)含量的变化;比色法测定心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)含量的变化;检测心肌酶学的改变;观察心肌病理学改变;免疫组织化学法检测心肌组织中ET-1的表达。结果:大鼠LIR后,血浆肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及ET-1含量较对照组均明显升高(P<0.01),心肌组织ET-1、MDA和XOD含量明显升高(P<0.01),SOD含量降低(P<0.01);ADM注入后,血浆CK、CK-MB及ET-1含量降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织ET-1、MDA和XOD含量降低(P<0.01),SOD含量升高(P<0.05)。心肌病理学观察显示,LIR组心肌纤维连续性中断呈波浪样改变,形状紊乱,小血管充血明显,内有大量红细胞聚集;ADM注入后心肌损伤明显减轻。心肌组织ET-1免疫组织化学结果显示,LIR组心肌胞浆棕黄色颗粒增多,表达上调;ADM注入后心肌胞浆棕黄色颗粒明显减少(P<0.01)。结论:ADM可能通过抗氧化反应及抑制ET-1的合成对LIR后心肌损伤发挥防治作用。

罗布麻叶提取物预处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用

目的:观察罗布麻叶提取物(AVLE)预处理对心肌缺血再灌注(MI/R)大鼠心肌细胞凋亡和细胞信号转导系统中丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的影响。方法:采用SD大鼠MI/R模型(结扎冠脉左前降支起始部30min后再灌注4h),随机分为Sham组(假手术)、MI/R组、AVLE预处理组[AVLE(500mg/kg)灌胃,每日一次,连续灌胃7天后再行MI/R]。用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡,计算凋亡指数(AI);荧光免疫分析法检测各组心肌组织凋亡蛋白Caspase-3活性;Western Blotting测定心肌组织Akt和ERK1/2的表达水平和磷酸化水平。结果:与Sham组比较,MI/R组心肌细胞AI显著升高(P<0.05),心肌组织Caspase-3活性明显升高(P<0.05),心肌Akt和ERK1/2的磷酸化水平显著降低(P<0.05);与MI/R组比较,AVLE预处理组AI明显下降(P<0.05),心肌组织Caspase-3活性显著降低(P<0.05),Akt和ERK1/2磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结论:AVLE能够抑制缺血再灌注所致心肌细胞损伤,其作用与生存信号通路蛋白PI3K/Akt和ERK1/2的活化水平有关。

通阳宽胸颗粒对急性心肌梗死缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响

目的观察心肌缺血再灌注(MIR)大鼠应用通阳宽胸颗粒治疗后冠脉微循环变化情况及其通阳宽胸颗粒对MIR大鼠氧化损伤和内皮细胞功能等方面的影响,为其临床应用提供科学依据。方法制作大鼠在体心肌MIR模型后开始灌胃药物,持续4周。各组取10只测定血流动力学指标,然后进行墨汁灌流,制成心肌组织切片,观察各组心肌毛细血管墨汁灌流数。各组另取10只腹主动脉采血对血浆内皮素(ET)、血清一氧化氮(NO)含量及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测和相关分析。结果其结果表明通阳宽胸颗粒组大鼠与MIR模型组比较:缺血部位毛细血管墨汁灌流数明显增加;血清MDA含量及血浆ET含量明显减少,血清SOD活性及NO含量均显著升高。结论通阳宽胸颗粒能明显改善MIR大鼠的冠脉微循环障碍,从而改善血流动力学,对缺血再灌注心肌具有保护作用。其机制可能与减轻心肌细胞膜脂质过氧化损伤,增强心肌细胞的抗氧化能力,调整血管内皮细胞的平衡功能等机制有关。

异丙酚对急性全肝缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响

目的通过研究异丙酚对全肝缺血再灌注大鼠心肌组织肌浆网钙泵(SERCA)2表达的影响,探讨异丙酚在全肝缺血再灌注心肌损伤中的作用机制。方法清洁级SD雄性大鼠30只,体质量200~230 g,随机数字表法分成3组,假手术组6只(S组)、肝缺血再灌注组6只(IR组)、异丙酚预处理组18只(P组),P组按异丙酚用量分为P_(10)、P_(20)、P_(30)3个亚组,每组6只。S组仅解剖肝门,不结扎;IR组结扎肝蒂全肝缺血30 min、再灌注的方法建立大鼠全肝缺血再灌注模型;P_(10)组缺血前10 min经尾静脉缓慢注射负荷剂量的异丙酚10 mg/kg,再以10 mg·kg^(-1)·min^(-1)的速度经尾静脉持续泵注直至处死,P_(20)组缺血前10 min经尾静脉缓慢注射负荷剂量的异丙酚20 mg/kg,再以20 mg·kg^(-1)·min^(-1)的速度经尾静脉持续泵注直至处死,P_(30)组缺血前10 min经尾静脉缓慢注射负荷剂量的异丙酚30 mg/kg,再以30 mg·kg^(-1)·min^(-1)的速度经尾静脉持续泵注直至处死,余同IR组。各组于再灌注4 h时处死大鼠取左心室壁心肌组织,采用蛋白质印迹法测定大鼠心肌中SERCA2和胱天蛋白酶(caspase)3的表达,同时取肝左外叶组织,进行苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察肝组织病理学结果。结果与S组比较,IR组SERCA2表达明显降低(P<0.05),caspase3表达明显升高(P<0.05);与IR组比较,P_(10)、P_(20)、P_(30)各组SERCA2表达均明显升高(P<0.05),caspase3表达均明显下降(P<0.05);P_(10)、P_(20)、P_(30)组SERCA2表达依次逐渐升高(P>0.05),caspase3表达依次逐渐降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论异丙酚可以减轻大鼠肝缺血再灌注诱发的心肌损伤,其机制可能与使SERCA2表达增高,从而减轻心肌细胞凋亡有关。

活血化浊方对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的干预作用

目的探讨活血化浊方对缺血再灌注大鼠心肌损伤的干预作用及机理。方法 48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参组、活血化浊方高剂量组、活血化浊方中剂量组、活血化浊方低剂量组(各8只)。丹参组大鼠予丹参混悬液[1.5g(药物含量)/kg(大鼠体重)],活血化浊方高、中、低剂量组大鼠分别予活血化浊方混悬液5.0、1.5、0.5 g/kg,均用生理盐水稀释至2m L,假手术组及模型组予等量生理盐水。各组喂养4 W后,麻醉开胸,假手术组不做结扎,其余各组大鼠丝线结扎冠状动脉左前降支,30 min后,剪开丝线,再灌注60 min,建立实验性心肌损伤(I/R)模型。测定血清心肌酶谱五项(CK、CK-MB、AST、HBDH、LDH)水平;取大鼠心尖组织测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;观察各组大鼠心电图ST段变化情况。结果造模后大鼠血清心肌酶谱五项,心肌组织SOD、MDA及ST段平均值均有不同程度变化;活血化浊方高、中、低组血清CK、CK-MB、LDH、AST、HBDH水平明显低于模型组,其高、中剂量组优于其他组;活血化浊高、中剂量组大鼠心肌组织SOD水平明显高于模型组及低剂量组和丹参组;MDA水平明显低于模型组及低剂量组和丹参组。各组大鼠冠状动脉结扎再灌注后ST段平均值:活血化浊方高、中剂量组低于模型组、低剂量组和丹参组,活血化浊低剂量组与丹参组比较无显著性。结论活血化浊方对心肌缺血再灌注大鼠的心肌损伤有一定的干预作用,其机理可能与活血化浊方能够改善急性心肌缺血状态下的心肌酶谱,增加SOD的活性,减少MDA的产生,以及抑制心电图中ST段病理性抬高,保护心肌细胞免受损害相关。

不同时期远隔缺血处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤及氧化应激水平的影响

目的比较在心肌缺血前、心肌缺血同时、心肌缺血再灌注(IR)后远隔肢体缺血处理对IR大鼠心肌损伤及氧化应激的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为IR组、心肌缺血期肢体处理组(RIPerC组)、心肌缺血前肢体处理组(RIPreC组)、心肌IR后肢体处理组(RIPostC组),每组10只。各组均建立IR模型,除IR组外其他3组分别在相应时期给予远隔缺血处理。再灌注结束后立即检测各组大鼠心肌的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)的含量,以及血清磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cTNI)含量。结果与IR组相比,RIPerC、RIPreC、RIPostC组大鼠心肌SOD、CAT、NOS水平升高,心肌MDA含量、血清CK-MB和cTnI水平降低(均P<0.05)。但RIPerC组、RIPreC组、RIPostC组组间以上指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论在大鼠心肌IR不同时期给予远隔肢体缺血处理均可降低心肌氧化应激水平,减轻心肌损伤,且效果相当。

白芷乙素通过抑制ERK1/2和NF-κB p65的活化缓解心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤和氧化应激

目的探讨白芷乙素通过抑制细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和核转录因子-κB (NF-kappaB p65)的活化,减轻心肌缺血再灌注(MI/R)大鼠心肌损伤和氧化应激的作用机制。方法将SD大鼠随机分为五组:健康对照组(Control组),心肌缺血再灌注模型组(MI/R组),低、中、高剂量白芷乙素组(6.25、12.50、25.00 mg/kg)。小动物超声仪检测大鼠心率(HR)、左心室缩短分数(FS);酶联免疫吸附法(ELISA)检测心脏损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白(cTnI)水平;HE染色观察心肌组织损伤情况;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP镍端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3及通路蛋白ERK1/2和p65的表达情况;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醇(MDA)含量。结果与Control组比较,MI/R组的HR、FS降低(P<0.05);CK-MB和cTnI浓度升高(P<0.05);心肌组织损伤严重;凋亡细胞及Bax/Bcl-2表达比值增加(P<0.05);SOD活性降低(P<0.05),而MDA含量升高(P<0.05);ERK1/2和p65蛋白磷酸化升高(P<0.05)。白芷乙素给药后,逆转了MI/R大鼠的上述结果。与MI/R组比较,中、高剂量白芷乙素组的HR、FS回升(P<0.05);CK-MB和cTnI浓度回降(P<0.05);心肌组织损伤改善;凋亡细胞及Bax/Bcl-2表达比值回降(P<0.05);SOD活性回升(P<0.05),而MDA含量回降(P<0.05);ERK1/2和p65蛋白磷酸化回降(P<0.05)。结论白芷乙素可通过抑制ERK1/2和NF-κBp65通路蛋白活化,缓解MI/R大鼠心肌损伤及氧化应激。

木犀草素通过减少心肌细胞凋亡和自噬减轻缺血再灌注大鼠心肌损伤

目的:观察木犀草素(Lut)对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的作用,并探讨其可能机制。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、IR组和木犀草素组(Lut组)。缺血再灌注120 min后,检测血浆白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达水平。二氢乙锭(DHE)检测活性氧(ROS),末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,电镜观察自噬小体。免疫印迹检测Bax、Bcl-2、裂解caspase-9、AKT、p-AKT、STAT3、p-STAT3、LC3、p62、mTOR和p-mTOR的蛋白表达。结果:木犀草素可显著降低IR后血浆IL-1β、IL-6、MDA、CK-MB和cTnT水平,上调SOD和GSH-Px水平。此外,木犀草素可降低IR诱导的ROS累积、心肌细胞凋亡和自噬,并在IR过程中激活了AKT、STAT3和mTOR信号通路。结论:木犀草素可能通过抑制氧化损伤、细胞凋亡和自噬而在IR中起到心脏保护作用,其可能机制是通过激活AKT/mTOR/STAT3信号通路。

缺氧预处理后BMSCs来源外泌体对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及其机制

目的观察缺氧预处理后骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法分离培养大鼠BMSCs,采用ExoQuick试剂法分离提纯BMSCs来源外泌体。将50只SD大鼠随机分为正常组(常规饲养未接受任何干预的大鼠)、假手术组(开胸后仅打开心包而不结扎左冠状动脉前降支)、I/R组(建立心肌I/R模型)、缺氧干预组(建立心肌I/R模型并采用缺氧预处理后BMSCs来源外泌体400μg/g进行干预)和常氧干预组(建立心肌I/R模型并采用常氧预处理后BMSCs来源外泌体400μg/g进行干预),每组10只。各组干预1周后处死,取心肌组织,HE染色观察心肌病理变化,TTC染色后测定心肌梗死面积比,ELISA法检测心肌组织氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化力(T-AOC)]。采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测缺氧及常氧预处理BMSCs来源外泌体中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA和蛋白表达。结果正常组和假手术组大鼠心肌纤维排列整齐,结构清楚,细胞和间质无明显充血水肿及炎症细胞浸润。I/R组心肌纤维断裂、排列紊乱,存在细胞间质充血水肿及炎性细胞浸润。与I/R组相比,缺氧干预组、常氧干预组大鼠心肌纤维断裂、排列紊乱程度及细胞间质充血水肿程度均有所减轻。与正常组、假手术组比较,I/R组、缺氧干预组、常氧干预组大鼠心肌组织SOD、T-AOC表达均降低,心肌梗死面积比、MDA表达均升高;与I/R组比较,缺氧干预组、常氧干预组大鼠心肌组织SOD、T-AOC表达均升高,心肌梗死面积比、MDA表达均降低,且缺氧干预组变化更明显(P均<0.05)。缺氧预处理BMSCs来源外泌体中HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量分别为6.84±0.62、7.35±0.86,均高于常氧预处理BMSCs来源外泌体的4.27±0.39、5.14±4.76(P均<0.05)。结论 BMSCs来源外泌体可减轻I/R大鼠的心肌损伤,且低氧预处理能增强其心肌保护作用,其机制可能与诱导BMSCs来源外泌体HIF-1α表达上调、减轻心肌组织氧化应激反应有关。

盐酸氢吗啡酮降低缺血再灌注大鼠心肌损伤

目的探讨盐酸氢吗啡酮对缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的影响。方法健康SPF级雄性成年SD大鼠108只随机分为假手术(S)组、I/R组和盐酸氢吗啡酮预先给药(H)组,每组36只,建立大鼠I/R模型,于再灌注120min,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-10、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)浓度。2,3,5-氧化三苯基四氮唑(TTC)染色法确定心肌梗死面积。Western印迹检测心肌组织Toll样受体(TLR)-4、Bcl-2、Bax和酶切caspase3的蛋白表达。结果与S组比较,I/R组IL-6、IL-10和MDA的浓度均明显升高,SOD浓度明显降低,心肌梗死面积明显升高,TLR-4、Bax和酶切caspase3的蛋白表达均明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与I/R组比较,H组IL-6和MDA浓度均明显降低,IL-10和SOD浓度明显升高,心肌梗死面积明显降低,TLR-4、Bax和酶切caspase3的蛋白表达均明显降低,Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论盐酸氢吗啡酮可通过对炎性因子IL-6、IL-10、MDA和SOD,心肌梗死面积,TLR-4信号及凋亡相关的Bcl-2、Bax和酶切caspase3表达的调节对I/R大鼠心肌损伤起保护作用。