Drp1介导线粒体能量代谢拮抗大鼠缺血再灌注肾损伤

目的探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)介导线粒体能量代谢参与缺血再灌注肾损伤的分子机制。方法实验时间2020年10月14日。8~10周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和Drp1抑制剂组,每组5只,每只体质量为0.25~0.30 kg。通过手术建立大鼠肾脏缺血再灌注急性肾损伤模型,Drp1抑制剂组大鼠腹腔注射线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1)20 mg/kg体质量,其余各组大鼠注射等体积生理盐水,造模24 h留取血清及肾脏组织。比较组间大鼠血肌酐水平、肾组织病理学改变、肾组织细胞凋亡情况、线粒体超微结构、线粒体ATP酶活力,并建立体外HK-2细胞缺氧复氧模型,经处理后JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化。采用方差分析。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐明显升高[(41.12±1.895)μmol/L比(48.68±2.065)μmol/L],肾小管损伤评分升高[(1.29±0.426)分比(6.50±0.577)分],每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量增加[(2.40±0.547)个比(10.20±1.095)个],电镜下线粒体损伤更明显,线粒体ATP酶活力降低[(6.38±0.321)U/mg prot比(4.18±0.198)U/mg prot],HK-2细胞缺氧复氧模型中,模型组较假手术组线粒体膜电位降低的细胞比例增多[(9.81±0.251)%比(4.24±0.598)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组相比,Drp1抑制剂组大鼠血肌酐下降[(48.68±2.065)μmol/L比(43.28±0.895)μmol/L],肾小管损伤评分降低[(6.50±0.577)分比(4.50±0.578)分],每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量减少[(10.20±1.095)个比(6.60±1.140)个],线粒体结构损伤减轻,细胞线粒体ATP酶活力增加[(4.18±0.198)U/mg prot比(5.16±0.628)U/mg prot],HK-2细胞缺氧复氧模型中,Drp1抑制剂组较模型组线粒体膜电位降低的细胞比例减少[(5.90±0.360)%比(9.81±0.251)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论选择性抑制Drp1可通过抑制线粒体分裂,有效改善能量代谢障碍,减少细胞凋亡,减轻肾缺血再灌注损伤。

异氟烷对糖尿病模型大鼠缺血再灌注肾损伤的保护作用及其机制

目的研究异氟烷(Iso)对糖尿病模型大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制。方法清洁级雄性健康SD大鼠24只,单次ip注射链佐星60 mg·kg^-1制备糖尿病大鼠模型,72 h后空腹血糖>16.7 mol·L^-1认为造模成功。糖尿病模型大鼠分为3组:假手术组,肾I/R损伤组,2%Iso预处理+肾I/R损伤组(大鼠置2%Iso麻醉箱中预处理30 min,再进行肾I/R损伤模型制备)。肾I/R损伤手术后24 h,检测肾功能指标尿素氮(BUN)和肌酐(Cr),HE染色观察肾组织病理变化,TUNEL染色评估肾小管上皮细胞凋亡,免疫组化检测肾组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核因子-кB(NF-кB)的表达。结果与假手术组相比,糖尿病模型大鼠肾I/R损伤组的BUN和Cr升高,肾小管上皮细胞坏死和凋亡程度明显升高(P<0.01);TNF-α和NF-кB表达显著增高(P<0.01)。Iso预处理后显著抑制了BUN和Cr的升高,降低肾小管上皮细胞坏死和凋亡程度(P<0.01),明显抑制TNF-α和NF-кB的表达(P<0.01)。结论Iso预处理对糖尿病模型大鼠肾I/R损伤有保护作用,其机制可能与抑制BUN,Cr,TNF-α和NF-кB表达及肾小管上皮细胞坏死和凋亡有关。

lncRNA-XIST在小鼠急性缺血再灌注肾损伤中的表达情况

目的探讨长链非编码RNA-X染色体失活特异转录本(lncRNA-XIST)在小鼠急性缺血再灌注肾损伤(AIKI)中的表达情况。方法选取清洁级雄性C57小鼠90只,将其随机分为对照组、模型组与实验组,各30只。模型组与实验组均根据国际标准建立小鼠AIKI模型,实验组建模成功后注射干扰腺相关病毒lncRNA-XIST siRNA。于lncRNA-XIST siRNA表达2周后的第2、24、48、72小时及第7、14天各处死5只小鼠,采用实时定量PCR法检测小鼠肾组织中lncRNA-XIST的表达水平,于lncRNA-XIST siRNA表达2周后的第48、72 h检测小鼠的血尿素氮(BUN)及血肌酐(Scr)水平。结果在肾皮质及肾髓质中,模型组第2、24、48、72小时及第7、14天的lncRNA-XIST表达水平均高于对照组(P<0.05)。在肾皮质中,从第24小时开始,lncRNA-XIST表达水平呈不断升高趋势。模型组第48、72小时BUN、Scr水平高于对照组及实验组,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组第48、72小时血清BUN、Scr水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA-XIST在AIKI小鼠肾组织中高表达,特别是在肾皮质中,下调lncRNA-XIST有助于延缓早期急性肾损伤。

FVB小鼠急性缺血再灌注肾损伤中CHOP蛋白作用的探讨

目的通过对比ICR、FVB两种小鼠肾脏急性缺血再灌注后的差异，探索导致肾脏急性缺血再灌注损伤的关键致病分子，并探讨其可能机制。方法将ICR、FVB两种小鼠（雄性、8—10周龄）各随机分为模型组和正常对照组（n=12），两种小鼠的模型组采用相同的方法建立肾脏急性缺血再灌注模型（先切除右肾再夹闭左肾肾蒂45rain），再灌注24h后收集模型组小鼠的心脏血、肾脏，检测各小鼠血浆BUN浓度，观察小鼠肾组织病理损伤的程度，Western—blot检测肾组织CHOP蛋白的表达，对照组检测同样的指标。结果（1）。肾组织PAS染色可见：ICR、FVB小鼠模型组肾小管上皮细胞损伤明显重于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），ICR小鼠模型组肾小管上皮细胞损伤又明显重于FVB小鼠模型组（P〈0．01）；（2）血浆BUN浓度：ICR、FVB小鼠模型组高于对照组（P〈0．01），ICR小鼠模型组高于FVB小鼠模型组（P〈0．01）；（3）Western—blot：ICR、FVB小鼠模型组CHOP蛋白的表达量高于对照组（P〈0．01），ICR小鼠模型组CHOP蛋白的表达量高于FVB小鼠模型组（P〈0．05）。结论在急性肾缺血再灌注损伤模型中ICR小鼠肾小管上皮细胞损伤程度明显重于FVB小鼠，内质网应激相关蛋白CHOP表达也明显上调，提示CHOP在急性肾缺血再灌注损伤中发挥了重要的作用，FVB小鼠对急性肾缺血再灌注损伤存在抗性，机制可能与CHOP蛋白的表达有关。

细胞焦亡在肾缺血再灌注损伤中的研究进展

缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)是导致急性肾损伤的主要原因之一,目前尚无有效的治疗方法。探索肾IRI的发生机制及开发减轻肾IRI的有效靶向药物具有重要意义。细胞焦亡是一种新发现的炎症性程序性细胞死亡方式。研究发现细胞焦亡与肾IRI的发生发展密切相关。该文对细胞焦亡在肾IRI中的作用及机制进行综述,并讨论影响细胞焦亡的相关药物在肾IRI保护作用中的研究新进展,为肾IRI的治疗提供新思路。

细胞焦亡在肾缺血-再灌注损伤中的研究进展

细胞焦亡是调节性细胞死亡(regulated cell death, RCD)的一种形式,其特征是由GSDMD蛋白介导,释放大量的炎性细胞因子,参与机体免疫炎性反应。目前认为细胞焦亡在肾缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury, RIRI)发病机制中占据着重要地位。本文旨在对细胞焦亡在RIRI中的关键作用进行综述,并探讨了细胞焦亡调节RIRI过程的分子机制。此外,本文还分析了以细胞焦亡为靶点的多种分子药物治疗RIRI的可能性,为临床治疗RIRI提供新的思路。

环泊酚可抑制System Xc-/GPX4通路介导的铁死亡减轻大鼠肾缺血再灌注损伤

目的探讨环泊酚对减轻肾缺血再灌注损伤的作用及机制。方法建立SD大鼠肾缺血再灌注模型,单独或联合应用环泊酚、铁死亡抑制剂Fer-1及铁死亡激动剂Erastin干预造模大鼠,24 h后处死,取大鼠心脏血液检测肌酐及尿素氮,同时取大鼠肾,部分行苏木精和伊红染色及Paller评分评估大鼠肾损伤程度,另一部分检测铁死亡相关指标活性氧、谷胱甘肽、Fe^(2+)、丙二醛水平及胱氨酸/谷氨酸反向转运蛋白的主要亚基SLC7A11与下游功能蛋白GPX4的表达水平及转录水平。结果与模型组相比,环泊酚组与Fer-1组肾损伤指标血肌酐、血尿素氮及Paller评分、活性氧、亚铁离子、丙二醛水平较低(P<0.05);与模型组相比,环泊酚组谷胱甘肽、SLC7A11、GPX4水平,及SLC7A11、GPX4相关基因表达水平较高;与环泊酚组相比,环泊酚+Erastin组上述各项指标较低(P<0.05)。结论环泊酚可以减轻肾缺血再灌注损伤,其机制与System Xc-/GPX4通路有关。

硫氢化钠左肾动脉注入对大鼠肾缺血再灌注损伤的改善作用及其机制

目的 观察硫氢化钠(Na HS)对大鼠肾缺血再灌注损伤的改善作用,探讨其作用机制与Klotho蛋白的关系。方法 取18只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、Na HS干预组,每组各6只。模型组摘除右肾后,用无创动脉夹夹闭左肾蒂模拟急性肾缺血状态,夹闭45 min后解除动脉夹,模拟肾再灌注状态;Na HS干预组建立急性肾缺血模型后,向左肾动脉注入Na HS,随后进行再灌注;假手术组不予夹闭。再灌注24 h后,留取各组血液标本,采用比色法检测血清肾功能指标尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)。取各组肾组织标本,HE染色法观察肾组织病理学改变,比色法检测肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,Western blotting法检测肾组织Klotho、Nrf2蛋白。结果 与假手术组比较,模型组血清Scr、BUN升高,肾小管损伤加重,肾组织SOD活性下降、MDA含量升高,肾组织Klotho蛋白表达降低、Nrf2蛋白表达升高(P<0.05或<0.01);与模型组比较,Na HS干预组血清Scr、BUN下降,肾小管损伤减轻,肾组织SOD活性升高、MDA含量降低,Klotho、Nrf2蛋白表达均升高(P<0.05或<0.01)。结论 Na HS能够减轻急性肾缺血大鼠肾缺血再灌注损伤,其机制可能与上调Klotho蛋白表达、减轻氧化应激有关。

抗肾缺血再灌注损伤麻醉药物的研究进展

急性肾损伤(AKI)是临床常见的急危重症,而肾缺血再灌注损伤(RIRI)是导致AKI的最主要原因。RIRI在临床上常见于失血或中毒性休克、弥散性血管内凝血、肾移植、肾部分切除、肝移植、肝部分切除、复杂心血管手术等;目前已知其主要发病机制与自由基增多、细胞内钙超载、炎性反应过度激活以及细胞凋亡等有关。近年来研究发现,围手术期使用右美托咪定、丙泊酚、舒芬太尼、瑞芬太尼、氢吗啡酮、七氟烷等麻醉药物具有一定的抗RIRI作用。因此,科学选用麻醉药物,对预防和减轻围手术期AKI至关重要。

鸡血藤总黄酮对大鼠肾缺血再灌注损伤氧化应激及炎症反应的影响

目的 探讨鸡血藤总黄酮对大鼠肾缺血再灌注损伤氧化应激及炎症反应的影响。方法 SD大鼠分为假手术组、模型组及鸡血藤总黄酮低、中、高剂量组(40、80、160 mg/kg),连续灌胃给药7 d后,通过夹闭双侧肾蒂法复制肾缺血再灌注损伤模型,尿素酶-谷氨酸脱氢酶法、肌氨酸氧化酶法检测BUN及Scr水平,HE染色法观察肾组织病理变化,酶联免疫吸附法检测氧化应激指标及炎症反应指标,Western blot法检测肾组织NF-κB p65、Nrf2及HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,鸡血藤总黄酮组大鼠血清BUN、Scr水平降低(P<0.05,P<0.01),肾组织病理损伤缓解,血清及肾组织MDA、TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05,P<0.01),CAT、SOD活性及IL-10水平升高(P<0.05,P<0.01),肾组织Nrf2、HO-1和细胞浆NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),细胞核NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.01)。结论 鸡血藤总黄酮具有保护大鼠肾缺血再灌注损伤作用,该作用与活化Nrf2/HO-1信号通路,阻止NF-κB p65核转位,进而降低氧化应激水平及抑制炎症反应有关。

PI3K/Akt/mTOR信号通路与肾缺血再灌注损伤相关性的研究进展

肾缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury,RIRI)常发生于机体血流动力学不稳定、肾脏等器官手术之后。缺血及再灌注过程会导致机体出现应激反应,细胞凋亡和过度细胞自噬会使肾脏细胞受到损伤,从而造成急性肾损伤。PI3K/Akt/mTOR信号通路是调控细胞自噬的重要途径之一,该信号通路的激活或抑制可调节细胞自噬和细胞凋亡,从而减轻RIRI。本文对PI3K/Akt/mTOR信号通路与RIRI的相关性研究进展进行综述。

云南分心木对小鼠肾缺血-再灌注损伤的防护作用研究

目的探讨云南分心木中部分金属元素与小鼠双侧夹闭肾缺血-再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury,RIRI)防护作用的相关性,为明确分心木传统药用基础提供依据。方法利用强酸性阳离子交换树脂制备得去离子分心木水提物;运用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定分心木醇提物、水提物和去离子水提物中7种金属元素的含量;采用双侧夹闭法构建肾缺血-再灌注损伤小鼠模型,对分心木提取物中部分金属元素与RIRI小鼠的生化指标进行相关性分析。结果云南分心木提取物各剂量组均能不同程度的降低肾缺血-再灌注小鼠血清肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)水平,下调肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平,提取物中Mg、Zn元素含量与RIRI小鼠模型血清中CRE含量呈(负)显著相关;Mn元素含量与BUN呈(负)极显著相关,与IL-1β的水平呈负相关;Fe元素含量与TNF-α的水平呈负相关,显示分心木中部分金属元素具有防护RIRI作用。结论云南分心木中部分金属元素与其发挥防护小鼠双侧夹闭肾缺血-再灌注损伤作用具有相关性,在一定范围内具有防护RIRI的作用。

低温诱导的RBM3对各器官缺血再灌注损伤研究进展

缺血再灌注损伤(IRI)是一种复杂的血流动力学紊乱状态,致死率极高,且目前的治疗方法相对有限。亚低温治疗是临床上公认的一种缓解缺血、缺氧损伤的治疗方式,尤其在脑保护中的研究较多。多项研究表明,RNA结合基序蛋白3(RBM3)作为一种冷应激蛋白,主要在低温诱导下产生,可促进翻译,减轻氧化应激、降低细胞凋亡率。因此,诱导RBM3可能代表一种治疗IRI的新策略,代替亚低温治疗,减轻低温对机体的不良影响。基于这一观点,文章对RBM3蛋白功能的最新发现进行综述,重点关注RBM3对各器官IRI相关疾病的保护作用以及未来前景,为相关研究提供新思路。

甲基化酶WTAP通过调控FOXO1的表达参与肾缺血再灌注损伤

目的探讨m^(6)A甲基化酶WTAP在小鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤中的表达情况及对肾小管上皮细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。方法C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham组)、I/R组,8只/组,建立急性缺血肾损伤模型;全自动生化分析仪检测血中尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)水平评估肾功能;HE染色检测肾组织病理和形态改变;IHC检测肾组织中WTAP和FOXO1蛋白的表达;人肾小管上皮细胞(HK-2)分为Control、H/R、si-NC、si-WTAP、si-NC+H/R、si-WTAP+H/R组;Westernblot检测蛋白表达;qRT-PCR检测mRNA水平;CCK8检测细胞活性;TUNEL染色法检测细胞凋亡;试剂盒分别检测LDH的释放水平和Caspase-3活性;SRAMP(http://www.cuilab.cn/sramp/)网站预测FOXO1的m^(6)A修饰位点;RIP实验检测WTAP与FOXO1 mRNA的相互作用;MeRIP-qPCR检测m^(6)A修饰FOXO1的水平。结果与sham组相比,I/R组Scr、BUN水平显著升高(P<0.001),WTAPmRNA和蛋白水平都显著升高(P<0.001)。与正常HK-2细胞相比,H/R组细胞活性显著下降(P<0.01),LDH的释放水平显著升高(P<0.001),WTAP的mRNA和蛋白水平都显著升高(P<0.001)。抑制WTAP表达,上述细胞损伤减弱,FOXO1的mRNA和蛋白水平都显著下降(P<0.01)。WTAP与FOXO1 mRNA结合,抑制WTAP表达能够显著降低FOXO1 m^(6)A水平(P<0.001)。结论WTAP在体内外肾缺血再灌注损伤模型中表达均上调;体外抑制WTAP能够抵抗H/R诱导的凋亡损伤,这可能与其介导的FOXO1m^(6)A调控有关。

不同时点急性肾缺血再灌注损伤大鼠模型的构建与评价

目的:通过构建大鼠急性肾缺血再灌注损伤(IRI)模型,评价不同时点急性肾IRI大鼠的肾损伤程度。方法:将30只SPF级SD大鼠随机分成6组,每组5只,适应性饲养1周后,以2%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉,以背侧入径夹闭双侧肾蒂的方式构建急性肾IRI模型,不同的分组按照不同的缺血时间(0、5、15、30、45和60 min)进行处理,再灌注24 h后,腹主动脉采血2 mL用于检测肾功能(血尿素氮、血清肌酐和胱抑素C),取出肾脏,观察肾脏组织病理形态学、肾小管上皮细胞超微结构及细胞凋亡水平变化。结果:随着肾缺血时间延长,急性肾IRI模型大鼠肾功能进行性减退(P<0.05),肾组织病理损伤愈加严重(P<0.05),肾小管上皮细胞超微结构凋亡指数和细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而大鼠肾缺血60 min再灌注的肾损伤程度最严重。结论:大鼠肾脏控制缺血时间45 min再灌注时间24 h时构建的急性肾IRI模型较为合适。

激活TGR5缓解肾缺血再灌注后肾脏纤维化损伤

【目的】探讨激活胆汁酸受体TGR5在单肾缺血再灌注损伤合并对侧肾摘除(uIRIx)模型诱导的肾脏纤维化中的作用。【方法】体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分成假手术(Sham)组、uIRIx组及uIRIx+石胆酸(LCA)组,每组6只,使用uIRIx模型诱导肾脏纤维化,通过血和尿生化指标评估肾脏功能,利用HE染色评估肾脏损伤程度,使用Masson染色及免疫组化对肾脏纤维化程度进行评估,并用Western Blotting检测肾脏皮质纤维化相关指标蛋白表达;分别在TGR5+/+小鼠及TGR5-/-小鼠中设置Sham组及uIRIx组,每组6只,利用Western Blotting检测各组肾脏纤维化程度。体外实验:在人源肾上皮细胞系HK2细胞中给予TGF-β1诱导促纤维化反应,给予LCA进行药物干预,利用鬼笔环肽染色标记细胞骨架,使用Western Blotting检测HK2细胞内纤维化相关指标蛋白表达。【结果】体内实验:与Sham组相比,uIRIx组小鼠血浆肌酐水平(P=0.007)及尿白蛋白/肌酐比(P=0.041)明显增加,肾脏皮质蛋白TGR5表达(P=0.002)下降,Fibronectin表达(P=0.020)及COL1A1表达(P<0.001)上升,同时伴有肾脏结构受损及胶原沉积加重,LCA干预有效改善肾脏功能,缓解肾脏损伤及纤维化程度;TGR5+/+小鼠与TGR5-/-小鼠相比,uIRIx诱导引起的Fibronectin表达(P<0.001)及COL1A1表达(P=0.001)增加。体外实验:TGF-β1诱导HK2细胞形态改变,细胞骨架解聚重组,促纤维化指标蛋白上调;LCA可有效抑制TGF-β1诱导的细胞形态改变及骨架解聚重组,呈浓度依赖性下调纤维化相关指标蛋白表达。【结论】LCA缓解uIRIx模型诱导的肾脏纤维化,TGR5基因敲除加重uIRIx诱导的肾脏纤维化;在HK2细胞中,LCA缓解TGF-β1诱导的细胞促纤维化反应。研究结果提示激活TGR5缓解缺血再灌注后肾脏纤维化损伤进程。

丹皮酚对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制

目的探讨丹皮酚对大鼠肾缺血再灌注损伤(RIRI)的作用及其机制。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(RIRI组)、丹皮酚组(Pae组)、TLR4抑制剂组(TAK242组)及丹皮酚+TLR4抑制剂组(Pae+TAK242组),每组6只。缺血(45 min)再灌注(24 h)损伤模型成功建立后检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、胱抑素C(CysC)水平,ELISA检测血清中IL-1β和IL-18水平,HE染色观察各组肾脏组织形态学变化,免疫组化检测肾脏组织中TLR4、MyD88、IL-1β、IL-18、caspase 1表达及分布,Western blotting检测TLR4、MyD88、细胞焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、caspase 1、Gasdermin D(GSDMD)、IL-1β、IL-18蛋白表达水平。结果与Sham组比较,RIRI组Scr、Bun及CysC水平升高(均P<0.05),肾组织损伤较重,炎性细胞因子IL-1β、IL-18水平升高(均P<0.05),NLRP3、caspase 1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达均升高(均P<0.05)。与RIRI组比较,Pae组、TAK242组和Pae+TAK242组Scr、Bun及CysC水平均下降(均P<0.05),肾组织损伤均较轻,IL-18、IL-1β水平均降低(均P<0.05),TLR4、MyD88、NLRP3、caspase 1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达均下降(均P<0.05)。结论丹皮酚可减轻RIRI,其机制可能是通过抑制TLR4-MyD88-NLRP3通路,从而抑制细胞焦亡实现的。

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注肾损伤的保护作用

目的探讨外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注肾损伤的可能保护作用。方法取SD雄性大鼠骨髓,梯度离心法分离MSCs,采用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记。32只雌性SD大鼠建立缺血再灌注肾损伤模型后随机分为移植组和对照组,移植组于缺血45min后经下腔静脉注入用DAPI标记的MSCs,对照组注入等量生理盐水。术后每天经腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU),并分别于术后1、2、3、4d处死大鼠,留取血标本,观察血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平。留取肾组织,荧光显微镜及免疫组化染色方法观察移植MSCs在肾组织中的分布及肾细胞增殖状况,并采用蓖麻血凝素(RCA)对迁移入肾脏的MSCs分化状况进行鉴定。结果术后第1、2天,移植组大鼠血清BUN水平(31.93±1.49、19.58±1.58mmol/L)明显低于对照组(41.03±2.14、26.45±1.74mmol/L,P<0.05);第3、4天2组间BUN水平差异无统计学意义(P>0.05);第1、2、3天移植组大鼠血清Cr水平(77.47±4.77、57.45±2.41、44.93±3.97μmol/L)均显著低于对照组(102.37±3.59、67.50±2.92、53.25±2.73μmol/L),差异有统计学意义(P<0.05)。细胞增殖状况:术后第1天偶见BrdU阳性细胞,第2天2组大鼠肾组织中均可见较多BrdU阳性细胞,并随时间延长阳性细胞逐渐增多,且移植组阳性细胞数(33.71±8.50、57.60±4.88、116.29±6.99)明显多于对照组(19.67±5.20、26.88±5.89、71.71±8.44),差异有统计学意义(P<0.05)。移植组术后第3天肾组织内可见DAPI标记细胞,第4天DAPI标记细胞明显增多,且多数标记细胞能结合RCA。结论移植的外源性骨髓MSCs能够迁移、定居于缺血再灌注损伤后的肾组织中并分化为肾小管上皮细胞;MSCs移植可促进损伤肾组织的细胞再生,对缺血再灌注肾损伤具有一定的保护作用。

2型糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤及肾康注射液的治疗作用

目的:探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)的病理生理改变,并观察肾康注射液(SKI)对其治疗的效应。方法:利用高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素的方法建立T2DM大鼠模型,并采用高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验判定模型大鼠发生胰岛素抵抗的情况。将造模成功的SD大鼠随机分为糖尿病肾缺血再灌注组(DMIR)、糖尿病肾缺血再灌注SKI治疗组(DMIR+SKI)、糖尿病假手术组(DMS)和正常对照组(NCS)。应用右肾切除联合左肾动脉夹闭45 min,再灌注24 h的方法诱导肾IRI。DMIR+SKI组大鼠提前应用SKI(6.0 g·kg^(-1)·d^(-1))干预治疗8周。诱导肾IRI后,观察大鼠尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、肾损伤分子^(-1)(KIM^(-1))、肾功能改变和肾组织病理改变。结果:DMIR组大鼠尿NAG、KIM水平、血清肌酐和血尿素氮水平均明显高于DMS和NCS组(P<0.01),DMIR+SKI组大鼠上述指标则明显低于DMIR组(P<0.01)。DMIR组大鼠肾小管上皮细胞出现明显的肿胀、变性与坏死,肾小管刷状缘消失,管腔可见碎片或管型,DMIR+SKI组肾小管损伤程度则相对较轻,肾小管损伤评分低于DMIR组(P<0.01)。结论:SKI可降低T2DM大鼠肾IRI的血清肌酐和血尿素水平,降低肾小管损伤标志物尿NAG和KIM^(-1)水平,减轻肾组织病理损伤。

二氢槲皮素对大鼠肾缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨二氢槲皮素对肾缺血-再灌注损伤模型大鼠的保护作用。方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组(control组)、肾缺血-再灌注损伤模型组(model组)和二氢槲皮素组(DHQ组),每组6只。微板法和脲酶法检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,可见分光光度法和TBA法检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,并观察各组大鼠肾脏病理形态。结果与control组相比,model组大鼠血清BUN和Scr水平明显升高(t=6.06,P<0.001;t=11.16,P<0.001),MDA水平明显升高(t=5.985,P<0.001),SOD水平明显降低(t=8.663,P<0.001)。与model相比,DHQ组血清Scr水平下降(t=6.612,P<0.001),BUN水平明显下降(t=6.903,P<0.001),MDA水平明显下降(t=5.11,P<0.001),SOD水平明显上升(t=10.66,P<0.001)。model组大鼠肾小管水肿、空泡样病变,肾小球系膜基质扩张,炎性细胞浸润,而DHQ组大鼠肾小管部分仍能保留绒毛结构,水肿面积减少,未出现空泡样病变,肾小球系膜基质扩张减轻,炎性细胞浸润减轻。结论二氢槲皮素可以降低大鼠肾缺血-再灌注损伤导致的血清肌酐和尿素氮浓度升高,改善损伤肾小管的形态和功能,对肾缺血-再灌注损伤有一定保护作用,其机制与其抗损伤、抗氧化有关。