家兔髂总动脉结扎后不同时间缺血肢体病理变化特征研究

目的探讨家兔髂总动脉结扎后不同时间缺血肢体病理变化特征。方法雄性新西兰家兔26只,其中24只高脂高胆固醇饲料动脉粥样硬化造模42d,随机分为缺血第3、5、7天组和无缺血组,每组6只,正常对照组2只。结扎左侧髂总动脉作缺血肢体造模,分别在术后第3、5、7天检测计算双侧股动脉血流量差值和双侧后肢体趾端皮肤温度差值,检测小腿横纹肌组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)及CD34表达强度,观察小腿横纹肌组织形态学改变。结果第3、5、7天组和无缺血组双侧股动脉血流量和双侧后肢体趾端皮肤温度差值差异有统计学意义(P<0.01),VEGF及CD34表达强度差异有统计学意义(P<0.01)。无缺血组和正常对照组VEGF及CD34未表达。200倍光学显微镜见:缺血第3天组小腿横纹肌组织出现广泛水肿伴坏死,第5天组坏死伴钙化和单核细胞浸润,第7天组钙化伴萎缩和脂肪变性。无缺血组小腿横纹肌脂肪变性,正常对照组未见缺血组的病理改变。结论该动脉粥样硬化家兔髂总动脉结扎缺血肢体模型设计科学,造模手术容易掌握并且可重复性好,缺血前3天内病理变化为损伤,第3～5天为代偿,第5～7天为自我修复,各阶段效果明显。

磁性饲养笼低频电磁场对家兔缺血肢体新生血管形成的实验研究

目的探讨磁性饲养笼低频电磁场对家兔缺血肢体新生血管形成的促进作用。方法缺血组和缺血磁场组各24只新西兰家兔,动脉粥样硬化组和正常对照组各6只。缺血组和缺血磁场组动脉粥样硬化造模第42天作髂总动脉结扎缺血肢体造模,缺血磁场组手术当日放入磁性饲养笼内进行12毫特斯拉(mT)的低频电磁场实验,每12h1次,每次30min,第7天测量4组双侧后肢体趾端皮肤温度和股动脉血流量并计算差值,检测血清缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)及小腿横纹肌组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)、CD34表达密度,并用光学显微镜观察小腿横纹肌组织细胞形态学变化。动脉粥样硬化组和正常对照组不作缺血肢体造模和低频电磁场实验。结果缺血组术后第7天双侧后肢体趾端皮肤温度及股动脉血流量平均差值均明显大于缺血磁场组(P<0.01),血清HIF-1a测量值、小腿横纹肌组织VEGF及CD34表达密度均明显小于缺血磁场组(P<0.01)。动脉粥样硬化组和正常对照组小腿横纹肌组织VEGF及CD34未表达。光学显微镜观察缺血组小腿横纹肌组织第7天出现横纹肌片状坏死伴钙化、单核细胞浸润及横纹肌萎缩,缺血磁场组横纹肌空泡样变性并伴灶状坏死及横纹肌萎缩,动脉粥样硬化组小腿横纹肌组织脂肪变性。结论磁性饲养笼低频电磁场能明显促进家兔血清HIF-1a生成、缺血肢体VEGF及CD34表达和新生血管形成,改善缺血肢体供血。

严重缺血肢体新风险分级评分系统的研究与应用进展

[严重肢体缺血（CLI）在1982年被首次定义1],其概念仅适用于非糖尿病患者的严重缺血的肢体。CLI患者包括踝压（AP）小于40mmHg合并静息痛以及AP小于60 mmHg合并坏疽两种情况,但不包括合并神经性病变或败血症患者的缺血肢体。CLI与患者生活质量的降低、截肢率及死亡率的增加等密切相关,其五年死亡率为50%-60%,其中,心血管病事件和卒中占死亡原因的70%[2-5]。

外周血CD34^+细胞自体移植促进老年动脉粥样性缺血肢体的血管新生:前瞻性、单中心、开放性、随机对照临床试验方案

背景:老年动脉硬化闭塞症的主要临床表现为下肢缺血,目前治疗较为困难。自体干细胞移植可将干细胞移植到缺血的肢体肌肉中,使其分化形成新生毛细血管,改善和恢复下肢血流,达到治疗下肢缺血的目的。目前已有研究证实,内皮祖细胞标记物CD34^+细胞移植可促进动物的缺血肢体的血管新生。目的:试验假设采用老年动脉粥样性缺血患者外周血的CD34^+细胞自体移植,可有效促进血管新生。方法:研究为前瞻性、单中心、开放性、随机对照临床试验,在中国山东省,青岛大学附属医院完成。纳入老年动脉粥样性下肢缺血患者20例,随机分为2组,细胞移植组10例采用促血管生长因子-血管内皮生长因子165基因转染并纯化老年下肢动脉粥样硬化性缺血患者外周血的CD34^+细胞,自体移植至缺血侧肢体肌肉组织;对照组10例于缺血肌肉组织内注射生理盐水,随访6个月。试验的主要观察指标为两组移植前和移植后6个月踝肱指数的变化以评估下肢缺血情况。试验的次要观察指标为移植前和移植后6个月下肢肌肉组织微血管数量变化,CT血管成像显示的新生血管形态;移植后6个月患者血管内皮生长因子免疫阳性细胞数及不良反应发生率。试验在北美临床试验注册中心注册(NCT03098771)。试验经中国山东省青岛大学附属医院伦理委员会批准。研究符合世界医学会制定的《赫尔辛基宣言》的要求。参与者本人对治疗方案和过程均知情同意,并签署知情同意书。讨论:试验拟2018年1月开始,2019年12月完成,希望证实血管内皮生长因子165基因转染修饰的CD34^+细胞移植治疗老年动脉粥样性缺血肢体的确切疗效,研究结果有助于开拓下肢缺血性疾病治疗的新模式。

负压对缺血肢体血流动力学影响的实验研究

目的 :观察负压对肢体动脉闭塞犬患肢血流动力学的影响。方法 :犬 15只 ,随机分治疗组 10只和对照组5只。两组均采用切断犬后肢股动脉分支、动脉腔内置入螺旋状金属丝的方法 ,制作肢体缺血模型。在模型制作后 2wk ,治疗组行患肢负压治疗 10d ,对照组不做负压治疗。两组均于模型前、模型后 2wk及治疗结束后 ,用彩色多普勒观察患肢股动脉血流动力学指标 :收缩期最大流速 (Vmax)、平均流速 (Vmean)、阻力指数(R1)、搏动指数 (P1)的变化。结果 :治疗组在治疗后患肢股动脉Vmax、Vmean显著增加 (P <0 .0 0 1) ,RI、PI显著降低 (P <0 ,0 1) ;对照组各指标无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论 :负压对缺血肢体血流动力学表现为流速增加 ,阻力下降。

局部pUDKH基因治疗对实验性犬缺血肢体的某些生理、生化变化的影响

目的探讨携带人肝细胞生长因子基因的真核表达质粒pUDKH在治疗犬肢体缺血时对其生理、生化的影响。方法建立犬左下肢血管完全闭塞性血管病模型,一次性局部肌肉注射不同剂量pUDKH,并在不同时间点检测犬生理、生化指标。结果转染pUDKH组,能使损伤的血管功能恢复,股动脉血流量恢复,脉搏搏动有力,下肢活动正常,肌电图指标无明显改变。血液生化指标在正常值范围内波动。结论局部pUDKH基因治疗犬肢体缺血后对其生理、生化无明显影响。

动脉注射血管生长素促进缺血肢体血管生长作用的研究

为研究重组人血管生长素 (rhANG)动脉内注射对家兔缺血肢体血管生长的作用 ,制作家兔后肢缺血模型 ,于术后第 11天经动脉内导管一次性注射不同剂量的rhANG。分别作肢体动脉造影、放射性核素血流及肢体肌肉毛细血管密度测定。结果发现 ,大剂量组、中剂量组与小剂量组和对照组相比 ,各项指标差别有非常显著性意义 (P <0 0 1)。提示动脉内注射rhANG对家兔缺血肢体血管生长有明显促进作用 。

肢体负压抗犬缺血肢体的自由基损伤

肢体负压抗犬缺血肢体的自由基损伤马中１，宁莫凡１，严立军２，杨振东１（第四军医大学西京医院：１血管外科，２检验科，西安７１００３３）关键词肢体负压，脂质过氧化物，超氧化物岐化酶中图号Ｒ６５４．４肢体负压（ＬＮＰ）疗法由于具有安全、简便、无创伤及疗效显...

培哚普利促进糖尿病大鼠缺血肢体的血管新生

目的探讨培哚普利在糖尿病大鼠肢体缺血后血管再生中的作用及相关机制。方法采用链脲佐菌素建立1型糖尿病大鼠模型,切断一侧肢体股动脉,分为对照组和培哚普利治疗组。治疗4周后观察各组缺血肢体血管新生情况。逆转录-多聚酶聚合链反应(RT-PCR)和Western印迹法测定后肢肌肉中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA和蛋白表达,并测定结构型NOS(cNOS)活性。结果与正常对照组相比,糖尿病大鼠缺血肢体的微血管密度、eNOS、VEGF和bFGF的mRNA和蛋白表达及cNOS活性均下降。培哚普利治疗后上述指标均明显升高。结论糖尿病使大鼠缺血肢体的血管再生受损,有关的生长因子的表达下调或活性下降。培哚普利能促进糖尿病大鼠缺血肢体的血管再生,其机制与eNOS、VEGF和bFGF的表达上调及cNOS活性增加有关。

缺血肢体血管一氧化氮合酶表达的实验

缺血肢体血管一氧化氮合酶表达的实验边杰芳１杨振东１宁莫凡１丁玉强２（１第四军医大学西京医院血管外科西安７１００３３２第四军医大学解剖学教研室）关键词一氧化氮合酶负压肢体缺血中图号Ｒ５４３．５肢体负压改善肢体缺血已在临床应用［１，２］，其产生长期疗效的...

人脐带血CD34+细胞诱导小鼠缺血肢体血管生成

目的观察体外增殖的人脐带血CD34+细胞对缺血肢体血管生成的影响,探讨CD34+细胞与血管生成的关系。方法采集人脐血细胞并进行CD34+细胞的提取、培养。建立小鼠左后肢缺血模型并随机分为CD34+细胞增殖组(n=5)、CD34+细胞组(n=5)和空白对照组(n=5)3组。采用Di I标记CD34+细胞示踪显像和抗人核抗原抗体(HNA)免疫组织化学方法评估人CD34+细胞向缺血区域的迁移能力,肢体温度、CD31免疫组织化学方法和转化生长因子β1(TGF-β1)m RNA表达评估缺血肢体血流改善情况。结果 Di I标记示踪及HNA显色可见扩增的CD34+细胞出现在小鼠缺血下肢的肌肉组织中并分布在血管周围。注射液体后第14天(t=5.421,P=0.001;t=0.616,P=0.000)和第28天(t=10.780,P=0.000;t=12.123,P=0.000),CD34+细胞增殖组和CD34+细胞组的温度改变百分比均明显高于对照组。注射液体后第28天,CD34+细胞增殖组和CD34+细胞组毛细血管密度分别为592.3±24.6(t=26.386,P=0.000)和530.7±25.5(t=21.502,P=0.000),均明显高于对照组的219.7±19.9;CD34+细胞增殖组和CD34+细胞组的TGF-β1mRNA表达量分别为(0.578±0.050)(t=12.376,P=0.000)和(0.504±0.080)copies(t=7.098,P=0.000),均明显高于对照组的(0.224±0.040)copies。结论体外培养的人脐带血CD34+细胞能向缺血区富集并诱导血管生成,促进血流复通,有望成为治疗下肢缺血的有效途径。

自体骨髓间充质干细胞移植联合丹参注射液促进缺血肢体血管生成实验研究

目的:探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植及联合丹参注射液对于兔肢体缺血模型的疗效。方法:新西兰兔18只经丝线结扎血管造成肢体缺血模型,随即平均分为3组:对照组即生理盐水组(NS);单纯移植组即单纯自体骨髓间充质干细胞移植组(BMSCs);联合用药组即自体骨髓间充质干细胞移植联合丹参注射液组(BMSCs+D)。建立模型1周后,单纯移植组、联合用药组取自体培养BMSCs,在腓肠肌部位皮下多点注射,对照组予以生理盐水,联合用药组在单纯移植组的基础上合并丹参注射液耳静滴。常规饲养2周后,(1)超声检测血管生成指标:股浅动脉内径、血流信号、峰值血流速度、加速时间;(2)免疫组化染色观察比较各组抗Brdu染色阳性细胞;(3)HE染色观察比较各组血管生成情况。结果:(1)超声结果:①2D超声显示联合用药组与单纯移植组股动脉及股浅动脉近段管径较对照组明显增宽(P<0.05),且联合用药组较单纯移植组增宽明显(P<0.05);②CDFI超声显示联合用药组与单纯移植组较对照组股动脉血流信号明显增强,且联合用药组较单纯移植组血流信号增强明显;③彩色多普勒图像显示单纯移植组和联合用药组股动脉内血流的峰值流速较对照组明显增高,血流加速时间明显小于对照组(P<0.05),且联合用药组略优于单纯移植组(P>0.05)。(2)免疫组化染色:单纯移植组和联合用药组均检测到抗Brdu染色阳性细胞,且联合用药组多于单纯移植组。(3)HE染色:单纯移植组和联合用药组组织血管密度明显高于对照组,且联合用药组高于单纯移植组。结论:联合用药组与单纯移植组在反映血管生成相关方面明显优于对照组,且联合用药组较单纯移植组为优。

腔内建立足底外侧动静脉交通治疗糖尿病慢性威胁肢体缺血1例

1临床资料患者女,62岁,因“双下肢间歇性跛行10年,右足静息痛2年,足趾破溃坏疽1月余”于2023年3月21日以“糖尿病足,下肢动脉闭塞症”入院。既往糖尿病史5年,冠心病史17年,分别于2006年、2007年于外院接受心脏腔内血管成形手术治疗。本次入院前曾于外院接受腔内治疗不成功,同时接受肝细胞生长因子注射治疗效果不佳。

DCE-MRI联合脂肪酸代谢组学评价兔糖尿病重症肢体缺血骨髓内皮祖细胞功能

目的 探究动态对比增强磁共振成像(dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging,DCE-MRI)微血管渗透性参数和脂肪酸代谢组学评价糖尿病(diabetes mellitus,DM)重症肢体缺血(critical limb ischemia,CLI)兔股骨上段骨髓内皮祖细胞(bone marrow endothelial progenitor cells,BMEPCs)功能。材料与方法 36只雄性新西兰大白兔中随机选取18只兔静脉注射四氧嘧啶构建DM模型兔,其中造模成功的DM兔12只,6只DM造模失败兔处以安乐死。12只DM兔和12只非DM兔行右侧股动脉结扎术分别作为DM合并CLI(DM+CLI)组和单纯CLI组,术后两组各存活10只。6只非DM兔手术暴露右侧股动脉不结扎作为假手术对照(Control)组(n=6),全部存活。各组在术后第0、4周行右侧股骨上段DCE-MRI检查,于术后第4周检测外周血内皮祖细胞和右侧股骨上段BMEPCs数量、BMEPCs迁移和血管生成功能以及骨髓液相色谱-质谱脂肪酸代谢组学,并计算骨髓微血管密度(microvessel density,MVD)。结果 与CLI组和Control组相比较,DM+CLI组术后第4周股骨上段骨髓Ktrans、Kep、Ve值增加(P<0.05),骨髓MVD减少,骨髓棕榈油酸、单不饱和脂肪酸/多不饱和脂肪酸比值以及硬脂酰辅酶A去饱和酶1活性指数减少(P<0.05),延长酶活性指数增加(P<0.05)。DM+CLI组BMEPCs动员、迁移和血管生成能力受损(P<0.05)。术后第4周右侧股骨上段骨髓Ktrans、Kep、Ve值、骨髓脂肪酸合成代谢相关指标均与BMEPCs迁移和血管生成功能存在相关性(P<0.05),对DM+CLI组和CLI组相关参数进行相关性分析,BMEPCs动员能力与Ktrans、Kep、Ve值呈负相关(P<0.05)。结论 DCE-MRI联合脂肪酸代谢组学评价DM+CLI兔骨髓BMEPCs功能是可行的,可以为调脂改善BMEPCs功能和预防截肢的病理生理机制提供定量影像学证据。

药物涂层球囊扩张治疗慢性肢体威胁性缺血患者腘动脉病变的效果

目的探讨在慢性肢体威胁性缺血(CLTI)患者中运用药物涂层球囊(DCB)扩张治疗腘动脉病变的有效性和安全性。方法回顾性分析2019年6月至2021年6月首都医科大学附属北京朝阳医院血管外科收治的110例CLTI患者病历资料,DCB干预的靶病变为腘动脉。评估患者术后Rutherford分级和肢体威胁程度(WIfI)分期,以及临床驱动的靶血管重建(TLR)。主要安全终点包括全因死亡和截肢。通过多因素生存分析评估影响无截肢生存率的因素。结果患者年龄(72.7±9.2)岁,靶病变长度(127.6±56.8)mm,闭塞性病变和重度钙化分别占79.1%和62.7%,重度肢体威胁患者占20.9%。在12个月的随访中,患者的全因死亡率、无截肢生存率和TLR分别为11.8%、81.8%和12.7%。在3个月和12个月的随访中,Rutherford分级和WIfI分期均得到改善(P均<0.001)。在12个月的随访中,重度肢体威胁患者中有43.5%死亡或截肢。多因素生存分析提示,WIfI分期是患者无截肢生存的独立危险因素。结论DCB扩张治疗CLTI患者的腘动脉病变安全有效。WIfI分期可用于评估CLTI患者预后情况。

DCE-MRI评价H 2S干预糖尿病重症肢体缺血兔骨髓血管内皮细胞氧化应激水平

目的:采用定量DCE-MRI评价外源性硫化氢(H 2S)干预糖尿病重症肢体缺血兔骨髓血管内皮细胞氧化应激水平。方法:将15只糖尿病合并重症肢体缺血模型兔随机分为DM+CLI+Saline组(n=7)、DM+CLI+NaHS组(n=8),另设置空白对照组(NC组,n=6)。连续3周予DM+CLI+NaHS组实验兔耳缘静脉注射NaHS溶液(30μmol/kg/d)。分别于造模后第0、1、2、3周对各组实验兔行MRI右侧股骨斜冠状位DCE-MRI序列扫描,通过后处理计算得到右股骨上段骨髓的血容量转移常数(K trans)、速率常数(K ep)和对比剂血管外细胞外间隙的容积(V e)等定量参数。取第3周各组实验兔股骨上段行CD31免疫组化染色,计算骨髓微血管密度(MVD),并检测造模后第3周原代骨髓内皮祖细胞(EPCs)内活性氧(ROS)水平、骨髓组织超氧化物歧化酶(SOD)水平、血清可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)、血管生成素-1(Ang-1)水平和骨髓来源EPCs迁移和成管功能。结果:外源性H 2S干预第2、3周股骨上段骨髓K trans、V e和K ep值较未干预组减低(P<0.05),股骨上段MVD较未干预组增加(P<0.05)。干预第3周骨髓EPCs胞内ROS水平下降,骨髓组织SOD水平升高,血清sICAM-1显著降低,血清Ang-1浓度显著增加,且骨髓来源EPCs迁移和成管功能上调(P<0.05)。第3周股骨上段骨髓MVD与K trans值呈负相关(r=-0.780,P<0.05)、与K ep值和V e值呈正相关(r=0.808、0.889,P<0.05),骨髓内皮祖细胞ROS阳性率与股骨上段骨髓K trans值、K ep值、V e值呈正相关(r=0.714、0.872、0.877,P<0.05),而与骨髓组织SOD水平呈负相关(r=-0.754、-0.856、-0.880,P<0.05)。血清sICAM-1、Ang-1水平与股骨上段骨髓K trans、K ep、V e值之间均无显著相关关系(P>0.05)。结论:利用DCE-MRI定量参数评价外源性H 2S干预兔糖尿病重症肢体缺血骨髓氧化应激水平是可行的,外源性H 2S通过降低骨髓血管内皮细胞氧化应激水平,降低骨髓微血管渗透性。

慢性肢体威胁性缺血患者生活质量现状与影响因素分析

目的分析慢性肢体威胁性缺血患者生活质量现状和影响因素。方法以便利抽样方法选取2022年7~11月就诊于中国中医科学院西苑医院、中国中医科学院望京医院和中国中医科学院广安门医院的102例患者作为研究对象。采用一般资料调查问卷、焦虑自评量表、生存质量量表对患者进行问卷调查;采用Pearson相关分析探讨患者生活质量与功能状况、疼痛、行走能力、焦虑的相关性;采用多重线性回归分析探讨患者生活质量的影响因素。结果102例慢性肢体威胁性缺血患者生活质量评分为(62.70±8.58)分。相关分析显示,患者生活质量总分与疼痛、行走能力、焦虑存在相关性(P<0.05)。多重线性回归分析显示,照顾者、多病共存、行走能力、手术、焦虑是慢性肢体威胁性缺血患者生活质量的主要影响因素(P<0.05)。结论慢性肢体威胁性缺血患者生活质量整体偏低,照顾者、多病共存情况、行走能力、手术、焦虑情绪能影响其生活质量。

3-硝基-N-甲基水杨酰胺对肢体缺血再灌注损伤大鼠骨骼肌的保护作用及机制

背景:线粒体活性氧爆发已被证明在骨骼肌缺血再灌注中起着关键作用。3-硝基-N-甲基水杨酰胺(3-nitro-N-methyl salicylamide,3-NNMS)可以有效降低电子传递速度,对肢体缺血再灌注损伤具有潜在的保护作用,但目前尚无明确的研究和临床应用。目的:探讨3-NNMS对肢体缺血再灌注损伤大鼠骨骼肌的保护作用及机制。方法:40只健康8周龄SD大鼠随机分为对照组及3-NNMS的0μg/mL组、25μg/mL组、125μg/mL组,每组10只。除对照组外,其余各组制备肢体缺血再灌注损伤大鼠模型,于再灌注前30 min,向损伤部位注射相应浓度的3-NNMS。再灌注2 h后,心尖取血,取大鼠右下肢股直肌组织进行检测。苏木精-伊红染色观察大鼠股直肌组织病理形态;ELISA检测血清骨骼肌损伤因子肌酸激酶(Creatine Kinase found in the skeletal muscle,CK-MM)、乳酸脱氢酶、髓过氧化物酶水平,并检测股直肌核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、环氧合酶2、丙二醛、活性氧、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平,以及股直肌ATP水平、ATPase活性、线粒体呼吸控制率(RCR)水平。结果与结论:①与对照组相比,缺血再灌注模型大鼠血清CK-MM、乳酸脱氢酶、髓过氧化物酶水平升高,股直肌核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、环氧合酶2、丙二醛及活性氧水平升高,过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平下降,ATPase活性、线粒体呼吸控制率水平降低;细胞形态不规则,炎性细胞浸润明显,细胞出现肿胀。②与0μg/mL组相比,25μg/mL组大鼠血清CK-MM、乳酸脱氢酶水平降低,股直肌核因子κB、环氧合酶2水平降低,活性氧减少,超氧化物歧化酶活性升高;细胞形态较规则,炎性细胞浸润较轻,细胞肿胀现象缓解。③与0μg/mL组相比,125μg/mL组大鼠血清CK-MM、乳酸脱氢酶、髓过氧化物酶水平降低,股直肌核因子κB、肿瘤坏死因子α、环氧合酶2量减少,丙二醛、活性氧水平降低,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性升高,线粒体呼吸控制率水平升高;细胞排列较整齐,轮廓较清晰完整,炎性细胞浸润较轻。④结果说明:3-NNMS可以减轻肢体缺血再灌注引起的骨骼肌功能损伤,其作用机制可能是通过改善线粒体功能、减少活性氧产生、降低氧化应激和炎症反应,进而减轻组织损伤,修复骨骼肌功能。