内皮型一氧化氮合酶在运动预适应改善心肌缺血-再灌注损伤中的作用

背景:运动是防治各种心血管疾病并保护心脏免受缺血-再灌注损伤的有效策略,其作用机制有待深入研究。目的:观察有氧运动预适应对心肌缺血-再灌注损伤的影响,并探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)激活(包括偶联和磷酸化)在其间的作用。方法:取80只成年Wistar大鼠,采用随机数字表法分为安静组(n=40)和运动组(n=40),运动组进行8周有氧运动,安静组在鼠笼内安静饲养。8周后进行3项实验:①实验1:末次训练后,检测大鼠心功能、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体的蛋白表达量;②实验2:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS抑制剂,再灌注3 h后检测心功能与心肌梗死面积;③实验3:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS偶联剂,再灌注3 h后检测心肌梗死面积、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体和3-硝基酪氨酸的蛋白表达量(其中,磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值反映eNOS磷酸化/去磷酸化水平,eNOS二聚体/单体比值反映eNOS偶联/解偶联水平)。结果与结论:①实验1:与安静组比较,运动组大鼠心输出量、左心室射血分数升高(P<0.05),亚硝酸盐和S-亚硝基硫醇含量升高(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177、eNOS蛋白表达和磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值上调(P<0.05),eNOS二聚体蛋白表达和eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05);②实验2:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS抑制剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05);③实验3:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值下降(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值下降(P<0.05),S-亚硝基硫醇含量增加(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达量下调(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS偶联剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值升高(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达升高(P<0.05);④结果表明:有氧运动预适应可诱导心脏保护效应,其机制与心脏缺血-再灌注期间eNOS解偶联以及去磷酸化进而抑制NO过度产生并降低硝基-氧化应激有关。

麻醉药物对缺血-再灌注损伤导致肠道屏障功能障碍的保护作用研究进展

在临床众多常见疾病当中,肠道缺血-再灌注损伤疾病是最为常见的,其主要是指患者肠道组织在短暂或者是长时间内出现缺血现象后,由血液的再灌注而引起的局部组织收到损伤,而此类疾病的出现,在心肺脑复苏、创伤后进行输血、患者器官移植、各类休克现象以及肠系膜动脉栓塞等较为多见,而肠道缺血-再灌注会对患者体内肠道黏膜屏障的完整性产生较大的破坏,导致患者体循环受到外界有害物质的侵袭,最终患者的身体诱发全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征等一系列的并发症出现,此疾病的发病率在我国呈逐年上升趋势,发病率较高,且也是易导致患者死亡的一种疾病。而近年来,越来越多的专家对此进行研究,发现麻醉药物的使用对患者在手术期间肠道缺血-再灌注损伤具有较大的保护作用,目前临床常用的麻醉药物中可以对患者体内的肠道黏膜产生一定影响,且影响程度与麻醉药物使用剂量紧密相连,而合理的应用麻醉药物,能够尽可能的减轻患者肠道黏膜的损伤。因此,为了更深入的了解麻醉药物对肠道缺血-再灌注损伤导致的肠道屏障功能障碍的保护作用的研究进展,本文将把麻醉药物及肠道缺血-再灌注损伤作为核心,着重对其预防重要性、有效的治疗措施及现状进行着重的分析并探讨,随后再根据出现的问题进行针对性且具体的应对措施,为其他对麻醉药物对肠道缺血-再灌注损伤导致肠道屏障功能障碍的保护作用进行探讨的学者提供有效的借鉴意义。

NLRP3炎性小体在治疗性浅低温后处理大鼠心肌缺血-再灌注中的作用

目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制。方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五组:空白对照组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注组(MH组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP组(HT组)和34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP+MCC950组(HTM组),每组12只。S组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏180 min;IR组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 37℃灌注液再灌注120 min;MH组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 34℃灌注液再灌注120 min;HT组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入沉默信息调节因子2同源蛋白3(sirt3)抑制剂3-TYP后行34℃灌注液再灌注120 min;HTM组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入sirt3抑制剂3-TYP和NLRP3抑制剂MCC950后行34℃灌注液再灌注120 min。再灌注120 min后取离体心脏,采用ELISA法测定灌注后心脏漏液中IL-1β、IL-6浓度,Western blot法检测心肌组织中NLRP3和sirt3蛋白相对含量,1%氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理变化。结果 与S组比较,IR组、MH组、HT组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显升高(P<0.05);IR组、HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低,NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3和NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05)。与IR组比较,MH组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3蛋白含量明显升高,NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05);HTM组心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与MH组比较,HT组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、±dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HT组比较,HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论 治疗性浅低温(34℃)可通过改善离体心脏血流动力学参数、降低IL-6、IL-1β浓度、心肌组织中NLRP3蛋白含量、心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变,减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与线粒体介导sirt3通路抑制炎性小体NLRP3的高表达有关。

中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

药物预处理在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用研究进展

肝部分切除术和肝移植术是治疗肝脏良恶性肿瘤及终末期肝病的重要方法。肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)则是此两类手术中不可避免的难题之一,直接影响手术效果、术后并发症及预后。大量基础及临床研究提示,预处理可以有效减轻HIRI。其中,经典缺血预处理效果确切,但临床实际应用受限;远程缺血预处理临床效果仍存争议;而药物预处理受到更多重视,包括减轻炎症反应或氧化应激反应的药物、抑制特异性酶的药物、改善肝脏微循环的药物、拮抗Ca^(2+)超载的药物等。目前最具临床应用前景的药物包括甲基强的松龙、右美托咪定、乌司他丁、七氟醚、褪黑素等。联合用药可能具有更大潜在价值,但需要更多临床高等级证据支持。本文对临床可减轻HIRI的药物预处理方法进行综述,为接受肝部分切除术或肝移植术患者的早期肝脏功能恢复和远期预后改善提供证据。

匝迪-5味丸改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制预测及验证

目的探讨匝迪-5味丸改善心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法通过网络药理学方法筛选匝迪-5味丸改善MIRI的潜在作用靶点和通路。将72只大鼠随机分为模型组、假手术组、丹参组[复方丹参滴丸80 mg/(kg·d)]和匝迪-5味丸高、中、低剂量组[1.6、0.8、0.4 g/(kg·d)],每组12只。各组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续14 d。末次给药后,结扎大鼠左冠状动脉前降支建立MIRI模型,假手术组大鼠只穿线不结扎。检测建模后各组大鼠血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、心肌肌钙蛋白T(CTn-T)的含量,心肌细胞凋亡率,心肌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达水平;观察心肌组织形态变化。结果共获得匝迪-5味丸的活性成分177个,作用靶点220个,参与改善心肌缺血相关的靶点51个,其中核心靶点为AKT1,涉及PI3K-Akt、内质网、缺氧诱导因子-1等多个通路。与模型组比较,丹参组和匝迪-5味丸高剂量组大鼠血清中CK、LDH、AST、CTn-T含量和心肌细胞凋亡率,以及心肌组织中caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织中PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),心肌组织病理形态改变均明显改善;匝迪-5味丸低、中剂量组大鼠上述指标亦有不同程度改善。结论匝迪-5味丸可能通过激活PI3K-Akt信号通路抑制细胞凋亡,从而发挥改善MIRI的作用。

miR-330-5p通过抑制MAPK通路发挥对心肌缺血再灌注的保护作用

目的:探究miR-330-5p保护心肌缺再灌注的分子机制及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:体外培养人心肌细胞AC16,转染miR-330-5p模拟剂(mimic),在1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2)条件下构建心肌细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,以模拟心肌缺血再灌注。采用流式细胞技术检测细胞凋亡;采用ELISA法检测心肌细胞中4-羟基壬烯醛(4-HNE)、丙二醛(MDA)的含量;采用WesternBlot法检测凋亡相关因子Bcl-2相关的X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达、乙醛脱氢酶2(ALDH2)和MAPK信号通路相关因子脯氨酸导向的细胞外调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的蛋白表达。结果:在OGD/R模型中,心肌细胞凋亡率增加,4-HNE、MDA含量均显著升高,而ALDH2则显著降低;凋亡标志Bax显著升高,而Bcl-2显著降低。转染miR-330-5p mimic后,心肌细胞中4-HNE、MDA显著降低,ALDH2可见显著升高,且细胞凋亡显著抑制。对于MAPK信号通路,在转染miR-330-5pmimic后,ERK1/2、JNK1、p38MAPK蛋白表达均显著降低。结论:miR-330-5p通过抑制MAPK信号通路,调控ALDH2表达,抑制心肌缺血再灌注过程中心肌细胞的氧化应激和细胞凋亡,从而保护心肌细胞。

黄芪-水蛭药对调控铁死亡治疗脑缺血再灌注损伤作用机制探析

目的“黄芪-水蛭”药对可以减轻脑缺血再灌注损伤(CIRI),但其作用机制尚未明确。铁死亡是CIRI的新靶点,本文利用网络药理学方法探究“黄芪-水蛭”药对通过调控铁死亡治疗CIRI的作用机制。方法通过检索PubChem、SwissTargetPrediction、Batman-TCM、UniProt、TCMSP等数据库分别获得黄芪、水蛭的有效活性成分和作用靶点;检索GeneCards数据库收集CIRI相关靶点;利用Venny在线工具获得“黄芪-水蛭”药对活性成分和CIRI的共同作用靶点。通过Cytoscape软件得出“黄芪-水蛭”药对活性成分、疾病及预测靶点之间相互关系的网络,将蛋白互作网络图进行可视化处理,并使用CytoHubba插件计算得出核心靶点。应用R语言软件对“黄芪-水蛭”治疗CIRI的靶点进行GO分析和KEGG分析。利用FerrDb数据库,获取调控铁死亡的相关基因,将“黄芪-水蛭”药对活性成分、CIRI、铁死亡三者之间的公共基因进行分析,探究其关系并作出预测。使用AutoDockTools 1.5.7等软件对药对活性成分与关键靶点进行分子对接验证。结果通过数据库检索共收集到“黄芪-水蛭”药对有效活性成分28个、预测得到药对基因靶点680个,CIRI相关靶点1513个,药对-疾病的共同靶点253个,铁死亡相关靶点259个,进行相关预测得到包括PIK3CA、RELA、MAPK1、MAPK8、PTGS2、STAT3、SRC、NOS2等28个“黄芪-水蛭”药对调控铁死亡干预CIRI的可能作用靶点,及包括PI3K-Akt、Ras、TNF、MAPK、HIF-1信号传导途径在内的279条信号通路。分子对接显示,药对关键成分和核心靶点之间有相互作用关系,“黄芪-水蛭”药对可能通过调控铁死亡干预CIRI的发生发展而发挥治疗作用。结论利用网络药理学方法,分析挖掘出“黄芪-水蛭”药对活性成分通过调控铁死亡抗CIRI的潜在靶点及其相关通路,提示“黄芪-水蛭”可能通过氧化应激和抗炎途径调控铁死亡途径发挥其抗CIRI的作用,并为后续进一步的细胞和动物实验提供依据。

基于铁死亡探讨乌司他丁对肝缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨乌司他丁对肝缺血-再灌注损伤的保护作用及机制。方法24只雄性SD大鼠分成3组,分别为假手术组(Sham组)、肝缺血-再灌注损伤组(HIRI组)、肝缺血-再灌注损伤+乌司他丁预处理组(HIRI+UTI组),每组8只。采用阻断肝门静脉和肝动脉1 h的方法建立大鼠HIRI模型,HIRI+UTI组于造模前30 min腹腔注射乌司他丁,Sham组和HIRI组腹腔注射等量的生理盐水。造模6 h后处死大鼠,收集大鼠血清检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法检测肝组织病理学改变;透射电镜观察肝组织线粒体超微结构改变;免疫荧光检测谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达;检测肝组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、铁、活性氧簇(ROS)及GPX4含量;检测肝组织GPX4、酰基辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)信使RNA(mRNA)和蛋白表达水平。结果与Sham组相比,HIRI组血清ALT、AST水平升高,肝脏出现淤血、肝细胞坏死和肝小叶结构异常等病理改变,病理学评分升高,线粒体缩小,膜密度增加,线粒体嵴断裂甚至消失,ROS、MDA、铁含量升高,GSH含量下降,GPX4荧光强度减弱,ACSL4 mRNA及蛋白相对表达量升高,GPX4 mRNA和蛋白相对表达量降低(均为P<0.05)。与HIRI组比较,HIRI+UTI组血清ALT、AST水平降低,肝组织损伤减轻,病理学评分降低,线粒体缩小、嵴断裂情况改善,ROS、MDA、铁含量降低,GSH含量升高,GPX4荧光强度增强,ACSL4 mRNA和蛋白相对表达量降低,GPX4 mRNA和蛋白相对表达量升高(均为P<0.05)。结论乌司他丁可减轻大鼠肝缺血-再灌注损伤,其机制可能是通过抑制铁死亡。

基于疾病与活性化合物靶点网络研究牛舌草治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用

目的基于脑缺血-再灌注损伤与牛舌草中活性化合物靶点网络,研究牛舌草治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用及机制。方法采用线栓法制备脑缺血-再灌注损伤大鼠模型,缺血1.5 h再灌注24 h,对大鼠神经功能进行评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)测定大鼠脑梗死体积。采用网络药理学的分子网络分析技术、蛋白质-蛋白质相互作用网络、基因本体(GO)生物过程富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析、分子对接等方法研究牛舌草治疗脑缺血-再灌注损伤作用机制。结果牛舌草给药治疗能够显著改善脑缺血-再灌注损伤引起的神经行为功能障碍,减轻脑组织病理损伤。并且牛舌草能够通过143个缺血性脑卒中相关靶点,调控炎症反应、细胞凋亡等生物过程,干预肿瘤坏死因子信号通路、血管内皮生长因子信号通路和缺氧诱导因子-1信号通路等发挥作用。结论网络药理学及动物实验表明,牛舌草通过多靶点、多机制整体联合治疗脑缺血-再灌注损伤,可有效降低脑损伤和保护神经功能。

骨髓间充质干细胞对小鼠肝缺血-再灌注损伤修复作用的机制探讨

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠肝缺血-再灌注损伤过程中淋巴细胞亚群以及细胞多因子表达的影响。方法18只6~8周龄雄性小鼠随机分为假手术组(sham组)、肝脏缺血-再灌注损伤组(HIRI组)和BMSCs干预组(BMSC组),每组6只。检测3组小鼠肝功能及病理学改变;检测3组小鼠肝组织细胞凋亡情况;检测3组小鼠外周血CD4^(+)T细胞、NK细胞及血清中9项细胞多因子白介素-2(IL-2)、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、肿瘤坏死因子-α(NF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的表达水平。结果对照组小鼠肝组织结构正常,HIRI组肝组织结构损伤严重,BMSC组损伤较轻。与HIRI组比较,BMSC组小鼠肝组织损伤学评分较低(P<0.05)。与sham组比较,HIRI组小鼠外周血肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平升高(P<0.05),BMSC组肝功能指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。HIRI组肝组织凋亡细胞数量多于BMSC组和Sham组(P<0.05)。与HIRI组比较,BMSC组小鼠外周血中淋巴细胞亚群CD4^(+)T淋巴细胞、NK细胞表达明显下降(P<0.05);已检测的9项细胞多因子中,与HIRI组比较,BMSC组外周血清中IL-4、IL-5、IL-12、IL-17的表达水平升高(P<0.05),TNF-α、IFN-γ的表达水平降低(P<0.05),IL-2、IL-6、IL-10的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论在BMSC对小鼠肝缺血-再灌注损伤后的修复过程中,BMSCs可以改善肝功能,抑制细胞凋亡,并通过抑制淋巴细胞(CD4^(+)T淋巴细胞、NK细胞)的表达,并进一步协同调控细胞释放的细胞因子,降低促炎因子,增高抑炎因子,维持HIRI环境中细胞因子稳态。

Legumain/TRAF6通路在肾脏缺血-再灌注损伤中的作用研究

目的本研究旨在探讨Legumain/TRAF6通路在肾脏缺血-再灌注损伤中的作用机制。方法将50只SPF级C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只,A组:假手术组,B组:模型组,C组:Legumain低表达,D组:Legumain低表达+TRAF6过表达组,E组:Legumain低表达+TRAF6低表达组,再灌注24 h时处死各组小鼠。ELISA测定小鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、肾损伤分子1(KIM-1)含量。TUNEL检测试剂盒检测各组小鼠肾组织细胞凋亡水平,Western blot和RT-PCR法检测Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达水平。结果与A组相比,B组SCr、BUN、LDH、MDA、Kim-1水平、肾组织细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05),与B组相比,C组逆转上述五种标志物、细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05),与C组相比,D组逆转了上述五种标志物、细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达的降低,呈现升高趋势(P<0.05),而E组上述五种标志物、细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达均继续降低(P<0.05)。结论Legumain/TRAF6通路参与肾脏缺血-再灌注损伤,抑制Legumain表达可通过TRAF6减轻肾脏缺血-再灌注损伤。

云南分心木对小鼠肾缺血-再灌注损伤的防护作用研究

目的探讨云南分心木中部分金属元素与小鼠双侧夹闭肾缺血-再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury,RIRI)防护作用的相关性,为明确分心木传统药用基础提供依据。方法利用强酸性阳离子交换树脂制备得去离子分心木水提物;运用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定分心木醇提物、水提物和去离子水提物中7种金属元素的含量;采用双侧夹闭法构建肾缺血-再灌注损伤小鼠模型,对分心木提取物中部分金属元素与RIRI小鼠的生化指标进行相关性分析。结果云南分心木提取物各剂量组均能不同程度的降低肾缺血-再灌注小鼠血清肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)水平,下调肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平,提取物中Mg、Zn元素含量与RIRI小鼠模型血清中CRE含量呈(负)显著相关;Mn元素含量与BUN呈(负)极显著相关,与IL-1β的水平呈负相关;Fe元素含量与TNF-α的水平呈负相关,显示分心木中部分金属元素具有防护RIRI作用。结论云南分心木中部分金属元素与其发挥防护小鼠双侧夹闭肾缺血-再灌注损伤作用具有相关性,在一定范围内具有防护RIRI的作用。

黄芪甲苷对脑缺血-再灌注损伤大鼠神经的影响及作用机制

目的探讨黄芪甲苷(astragalolosideⅣ,AS-Ⅳ)对脑缺血-再灌注(cerebral ischemia-reperfusion injury,CI-RI)大鼠脑损伤的影响及可能的作用机制。方法选取65只大鼠采用大脑中动脉阻塞线栓法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)建立CI-RI模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、AS-Ⅳ低剂量组、AS-Ⅳ中剂量组和AS-Ⅳ高剂量组,另设对照组,各12只。AS-Ⅳ低剂量组、AS-Ⅳ中剂量组和AS-Ⅳ高剂量组分别灌胃20、40、80 mg·kg^(-1) AS-Ⅳ混悬液(蒸馏水配制),对照组及模型组给予等量蒸馏水。评价大鼠神经功能缺损情况;用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;HE染色观察各组大鼠脑组织病理变化;用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blotting)分别检测大鼠脑组织中过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator receptorγcoactivator,PGC-1α)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)mRNA和蛋白的表达情况。结果与模型组比较,AS-Ⅳ低、中、高剂量组大鼠各时间神经功能学Garcia JH评分、GSH-Px、SOD、PGC-1α、Nrf2 mRNA和蛋白表达水平均升高,TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平均降低(P<0.05)。与AS-Ⅳ低剂量组比较,AS-Ⅳ中剂量、AS-Ⅳ高剂量组诸项指数水平的改变更明显,且AS-Ⅳ高剂量组的变化更显著(P<0.05)。结论AS-Ⅳ能够改善MCAO大鼠神经功能损伤,降低氧化应激水平,改善神经炎症,可能是通过激活PGC-1α/Nrf2信号通路发挥作用的。

铁死亡在心肌缺血-再灌注损伤中的作用及针刺干预研究进展

缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)是以冠状动脉狭窄、心肌缺血缺氧为主要特征的慢性疾病。数据显示,2017年全球共有1.26亿人罹患IHD,有900万人死于IHD[1]。经皮冠状动脉介入等再灌注治疗是挽救缺血心肌、改善心脏功能的重要手段。但缺血一段时间再恢复血液灌注,会引起额外的心肌损伤,使得心脏功能障碍和结构损伤加重[2],即心肌缺血-再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)。MIRI可扩大心肌梗死范围,诱发心室重构,极大增加严重心律失常、猝死等不良事件发生风险。研究表明,铁死亡参与MIRI发生发展,抑制铁死亡可能是抗MIRI的有效策略[3]。而针刺具有保护心肌、改善MIRI效应,其机制与铁死亡相关[4]。因此,本文就铁死亡在MIRI中的作用及针刺干预相关研究进行综述,以期为深入研究针刺抗MIRI的机制研究提供新的思路。

右美托咪定对神经介入脑缺血-再灌注损伤的保护作用观察

探讨右美托咪定应用于脑梗死神经介入治疗对脑缺血-再灌注损伤的保护效果。选取2021年4月—2023年4月贵州中医药大学第一附属医院收治的60例脑梗死经神经介入治疗的患者为研究对象。采用随机数字表法将患者分为两组,分别为参照组和试验组,每组各30例。试验组麻醉诱导前10min应用右美托咪定,参照组应用等容量的0.9%浓度生理盐水。比较两组患者的治疗效果。结果显示,T1、T2、T3、T4阶段,两组患者HR、MAP、ICP指标水平均有一定程度的升高,试验组升高幅度比参照组小(P<0.05);术后7天、14天,试验组NIHSS评分低于参照组,日常生活能力评分高于参照组(P<0.05);治疗后,试验组患者SOD、MDA、NSE、S-100B、TNF-α、IL-6等水平均低于参照组(P<0.05)。研究发现,脑梗死神经介入治疗中,应用右美托咪定能够保护患者的神经功能,减轻其脑缺血-再灌注损伤程度,可提高其日常生活能力。

灯盏花素对心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌保护作用

目的观察灯盏花素对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)大鼠的心肌保护作用,并探讨其可能的机制。方法将60只SD大鼠随机分为健康组、模型组、灯盏花素低剂量和灯盏花素高剂量组,各15只;灯盏花素低剂量、灯盏花素高剂量组大鼠腹腔注射灯盏花素(50、100 mg·kg^(−1));健康组、模型组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。每日1次,干预5 d。模型组、灯盏花素低剂量组、灯盏花素高剂量组最终均纳入10只大鼠。检测心电图指标;2,3,5-氯化三苯基四氮(2,3,5-tri⁃phenyltetrazolium chlorid,TTC)染色检测心肌梗死面积;检测血清心肌损伤指标;检测血清氧化应激指标;检测血清炎性因子水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌组织白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)蛋白的表达水平。结果与模型组比较,灯盏花素低剂量组大鼠室颤(ventricular fibrillation,VF)和室性心动过速(ventricular tachycardia,VT)发生次数、血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)活性、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、心肌组织IL-23及IL-17蛋白的表达水平降低,VF、VT持续时间缩短,血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性升高(P<0.05);灯盏花素低剂量组和灯盏花素高剂量组各指标水平变化规律相同,灯盏花素变化高剂量组变化更显著(P<0.05)。结论灯盏花素可缓解MIRI大鼠心律失常、减轻心肌损伤及氧化应激反应和炎症反应。推测其作用机制可能与抑制IL-23/IL-17轴活性有关。

生脉饮复合依托咪酯预处理对肺缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

缺血再灌注(IR)是引起临床肺移植、创伤和急性肺损伤(ALI)的主要原因之一。IR引起的炎症反应和氧化应激是导致和加重其继发性损伤的重要因素。本研究旨在探究生脉饮复合依托咪酯对肺缺血再灌注损伤(LIRI)的治疗作用及其机制。方法 我们用雄性SD大鼠构建LIRI模型,并给药生脉饮和依托咪酯。通过检测大鼠肺组织损伤和氧化应激相关分子的表达,我们探究了生脉饮和依托咪酯对缺血再灌注后肺组织损伤和氧化应激的影响。此外,我们还研究了TLR4信号通路活性的变化,以阐明生脉饮的作用机制。结果 IR后大鼠肺组织损伤相关指标的表达水平明显上升,而生脉饮和依托咪酯则减轻了这种损伤程度。此外,IR后大鼠肺组织的氧化应激水平明显增加,表现为抗氧化分子SOD含量下降、MDA含量上升,而生脉饮和依托咪酯则提高了大鼠肺组织的抗氧化水平。IR后的肺组织中,TLR4等信号通路的活性明显增加,而生脉饮和依托咪酯则抑制了这些信号通路的活性。结论 生脉饮复合依托咪酯预处理可能通过减轻大鼠肺脏病理性损伤、改善肺功能、减轻细胞氧化应激、和抑制TLR4信号通路,从而缓解LIRI。

上调缺氧诱导因子对老龄小鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的:分析上调缺氧诱导因子(HIF)对老龄大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护机制。方法:选择40只SPF级健康老年雄性C57小鼠为研究对象,适应性饲养1周后将其随机分为A、B、C、D四组,每组各10只。A组不做任何处理,B、C、D组均构建小鼠心肌I/R损伤模型,C组于缺血前2 h腹腔注射100 mg/kg HIF-1α激活剂[二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)],D组于缺血前2 h腹腔注射15 mg/kg HIF-1α抑制剂[2-甲氧基雌二醇(2-ME2)]。比较四组小鼠给药前、给药1、2 h的心率、心肌收缩张力、左室内压最大上升/下降速率、心肌梗死面积情况,以免疫荧光技术、Western blot检测心肌细胞HIF-1α及α-微管蛋白表达。结果:给药后1、2 h,B组、C组和D组小鼠的心率、心肌收缩张力、左室内压最大上升/下降速率较给药前均降低,且D组低于B组、C组,B组低于C组,差异有统计学意义(均P<0.05)。给药后2 h,B组、D组小鼠心肌梗死面积的危险区/左心室、梗死区/左心室、梗死区/危险区水平均低于C组,且D组低于B组(均P<0.05);B组、C组、D组小鼠的HIF-1α蛋白表达水平均高于A组,且D组低于B组、C组,B组低于C组;C组小鼠的α-微管蛋白表达水平高于A组、B组、D组(均P<0.05),但A组、B组、D组小鼠的α-微管蛋白表达水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:上调HIF可改善心肌I/R损伤小鼠的心脏功能,减少心肌梗死面积,改善HIF-1α及α-微管蛋白表达。

阿芬太尼预处理通过抑制内质网应激发挥对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探究阿芬太尼预处理对心肌缺血再灌注损伤(myocardial Ischemia reperfusion injury,MIRI)大鼠的改善作用及可能存在的分子机制。方法纳入60只雄性SD大鼠,随机将其分为假手术组(Sham组,n=15)、模型组(MIRI组)、阿芬太尼低剂量预处理组(L-alfentanil组,3 mg/kg)及阿芬太尼高剂量预处理组(H-alfentanil组,6 mg/kg),每组15只;除去假手术组,剩余各组大鼠均构建MIRI模型。统计各组大鼠心功能参数[左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)]、血清心肌损伤因子[肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)]水平差异性;双染色法观察大鼠心肌梗死面积;HE染色分析心肌组织病理损伤;TUNEL检测心肌组织凋亡;免疫荧光及Western-blot检测各组大鼠心肌组织内质网应激蛋白(GRP78、CHOP、FAM134B)表达差异性。结果与Sham组相比,MIRI模型建立可以提升LVEDD、LVESD、CK-MB、cTnI水平、心肌梗死面积占比、心肌组织细胞凋亡程度及GRP78、CHOP表达及荧光强度,下调LVEF、LVFS水平及内质网应激蛋白FAM134B表达及荧光强度(P<0.05)。与MIRI组相比,阿芬太尼预处理可以下调LVEDD、LVESD、CK-MB、cTnI水平、心肌梗死面积占比、心肌组织细胞凋亡程度及GRP78、CHOP表达及荧光强度,上调LVEF、LVFS水平及内质网应激蛋白FAM134B表达及荧光强度(P<0.05)。与阿芬太尼低剂量组相比,阿芬太尼高剂量组大鼠LVEDD、LVESD、CK-MB、cTnI水平、心肌梗死面积占比、心肌组织细胞凋亡程度及GRP78、CHOP表达及荧光强度明显降低,LVEF、LVFS水平及内质网应激蛋白FAM134B表达及荧光强度明显提升,体现出剂量依赖性(P<0.05)。结论阿芬太尼预处理具有减轻心肌缺血再灌注大鼠心肌组织病理损伤,减少心肌梗死面积占比及抑制心肌组织细胞凋亡的作用,剂量依赖性明显,其分子机制可能与抑制内质网应激性程度有关,值得临床进一步研究。