鸡J亚群白血病病毒与网状内皮增殖病病毒混合感染发病机理的研究

通过人工感染建立了ALV-J、REV单独感染和混合感染1日龄肉仔鸡的病理模型。初步研究表明混合感染使试验鸡的生长发育障碍、免疫器官萎缩、对细菌易感性及死亡率等指标显著升高。动态病理学研究表明:REV感染主要引起骨髓网状细胞及淋巴样细胞弥漫性或灶状浸润,ALV-J感染主要引起骨髓髓系细胞灶状或弥漫性显著增生,混合感染时骨髓病变与REV感染基本一致,但相对较严重,并见ALV-J感染病变。各病毒感染组免疫器官均发生了严重的实质萎缩性病变,病变以混合感染组最重,REV组次之。在某些组织器官ALV-J组见嗜酸性粒细胞样的瘤细胞浸润增生,REV组见网状细胞及淋巴细胞样瘤细胞浸润增生,而混合感染组见以上两种瘤细胞增生。从混合感染组的病变来看,在致病性上ALV-J与REV之间的确存在明显的协同促进作用,导致机体的免疫抑制加重,但混合感染早期尚未发现REV对ALV-J致瘤的促进作用。

鸡胚中人工感染网状内皮增殖病病毒的检测

为了模仿禽网状内皮增生病毒(REV)垂直感染鸡胚,在1和3日龄的发育SPF鸡胚人工接种不同剂量的REV,并继续孵化至12日龄。在将发育鸡胚制成成纤维细胞单层后,再用抗REV单克隆抗体11B118作间接荧光抗体反应检测REV。结果表明,从所有人工感染REV的鸡胚12日龄制备的成纤维细胞中均能在培养48h检测出REV。该方法可用于检测生产弱毒疫苗的SPF鸡胚及其相应细胞有无REV的污染。

IFN-α对禽网状内皮组织增殖病病毒体内外增殖的抑制作用

为明确禽源α干扰素(IFN-α)对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)体内外增殖的抑制效果,本试验在细胞和动物水平上分别采用鸡胚成纤维(DF-1)细胞和海兰褐鸡作为模型,于REV接种前(预防)和接种后(治疗)分别添加不同浓度的禽IFN-α处理,分析禽IFN-α在体外和体内对REV增殖的影响。体外试验结果显示,与阳性对照组相比,禽IFN-α浓度为33 IU/mL的治疗组72 h细胞和上清中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05),禽IFN-α浓度为33 IU/mL的预防组72 h细胞中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05)。通过比较各组海兰褐鸡的平均体重、血液中REV阳性率和病毒载量、泄殖腔REV阳性率和排毒量、免疫器官指数和病毒载量系统评估禽IFN-α对REV体内增殖的影响,结果显示,与阳性对照组相比,禽IFN-α浓度为1 500 IU的治疗组海兰褐鸡21和28日龄时体重显著升高(P<0.05),14日龄时肝脏发育指数以及14和28日龄时的脾脏发育指数显著降低(P<0.05),14日龄时血液和脾脏中病毒载量显著降低(P<0.05),7和21日龄时泄殖腔排毒量显著降低(P<0.05)。本试验在体外细胞和体内动物2个层面均证实了禽IFN-α对REV增殖具有显著的抑制效果,这不仅为禽网状内皮组织增殖病的防控策略提供了新的思路和辅助手段,也为未来抗病毒药物的研发和应用提供了科学依据。

不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测

为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。

2021年北京市种鸡场禽网状内皮组织增殖病和禽白血病监测

为了解北京市种鸡场禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)和禽白血病病毒(ALV)的流行情况,采用ELISA方法,对2021年从9个区27个种鸡场采集的2660份血清和2660份蛋液样品分别进行了REV抗体和ALVp27抗原监测。监测结果显示:2021年北京市种鸡场的REV抗体和ALVp27抗原个体表观阳性率分别为33.83%和1.54%,真实阳性率分别为34.53%(95%CI:32.72%~36.33%)和1.57%(95%CI:1.10%~2.05%);群体表观阳性率分别为81.48%和29.63%,真实阳性率分别为83.14%和30.23%。除第四季度未检出REV抗体阳性外,其他季度均检出这2种病原,其中第三季度ALV个体阳性率最高(4.86%),与其他季度差异有统计学意义(P<0.05),第二季度REV个体阳性率最高(85.40%),不同季度间的REV个体阳性率差异显著(P<0.05)。祖代群和父母代群均检出REV抗体和ALVp27抗原阳性个体,且阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)。结果表明,北京市种鸡场REV和ALV分布广泛,感染较严重,净化效果不佳,存在病原传播风险。结果提示,北京市各种鸡场应高度重视这两种疫病的防控,加快推进种群净化工作。本次监测结果为北京市REV和ALV的净化及其感染的防控提供了依据。

网状内皮组织增殖病病毒免疫抑制状态下禽波氏菌对雏鸡致病性增强

禽波氏菌可引起禽类的高度接触性上呼吸道疾病,且经常与免疫抑制性病毒发生共感染。为研究免疫抑制状态下禽波氏菌致病性的变化,试验中以网状内皮组织增殖病病毒(REV)感染鸡胚构建雏鸡的免疫抑制状态,雏鸡孵出后再经呼吸道感染禽波氏菌,模拟临床二者的混合感染。分别监测混合感染与单纯感染条件下雏鸡的生长状况、免疫器官指数、NDV灭活苗免疫抗体水平、禽波氏菌抗体水平、禽波氏菌入侵组织时间、组织病理学变化以及其他细菌的继发感染状况等。结果发现REV感染可导致雏鸡严重的生长抑制和免疫抑制作用,感染禽波氏菌后使抑制作用加重,且干扰了针对禽波氏菌的抗体的产生。禽波氏菌在REV免疫抑制状态雏鸡肝、心和肾中的检出时间比单纯感染组提前了1d。混合感染组雏鸡气管黏膜完全脱落,肝、心等组织内细胞广泛性坏死,细菌继发感染病例数增多。REV免疫抑制状态下,机体防御体系被破坏,对禽波氏菌的免疫应答降低,为禽波氏菌在组织中的侵袭扩散提供了便利,使禽波氏菌对雏鸡的致病性增强。

禽网状内皮组织增殖病的诊断及淋巴器官的病理变化

对实验室诊断为禽网状内皮组织增殖病 (RE)病鸡的淋巴器官进行了病理组织学检查 ,发现腔上囊、胸腺和脾脏均表现非炎性退行性病变 ,这种病变是病鸡群免疫抑制及病原持续感染的根本原因。

SPF雏鸡人工感染禽网状内皮组织增殖病病毒后肝组织的超微结构观察

通过对１日龄ＳＰＦ雏鸡进行人工接种禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ），观察其肝脏组织在透射电镜下细胞器的变化，接种ＲＥＶ后７～１４ｄ，出现线粒体嵴变短、断裂膨大、排列紊乱、细胞核浓缩、核碎裂等。雏鸡感染ＲＥＶ后２１～４２ｄ，线粒体急性肿胀，嵴很多消失呈现空泡化，线粒体内出现包涵体，粗面内质网网池扩大，网状结构断裂呈单个囊泡状，细胞核溶解，坏死，出现髓样小体，细胞间胶原纤维增多，网状细胞增殖。

不同方法对网状内皮组织增殖病病毒的检测

从山东、江苏、上海等地的鸡场中 ,收集疑为网状内皮组织增殖病病毒 (REV)感染鸡的脾脏、肝脏 5 6份 ,分别通过聚合酶链式反应 (PCR)、班点杂交试验 (Dot- blot)和间接免疫荧光试验 (IFA)对其进行 REV检测。结果有 2 1份呈PCR阳性 ,2 0份呈 Dot- blot阳性 ,15份呈 IFA阳性 ,且所有 IFA阳性样品 ,PCR和 Dot- blot检测都呈阳性 ,2 0份Dot- blot阳性样品中有 19份呈 PCR阳性。研究表明 ,PCR检测 REV较其他方法敏感 ,可作为 REV的常规检测方法之一。

网状内皮组织增殖病病毒(REV)不同分离株LTR基因的序列分析

从山东、江苏的几个大型鸡场收集疑为REV感染的鸡脾脏、肝脏 ,提取组织DNA ,并以此为模板 ,通过PCR技术 ,从山东泰安及江苏海安的某鸡场中分别扩增到REV的LTR基因。将该基因克隆进TA载体中 ,转化大肠杆菌TG1,经酶切鉴定 ,得到了两株REVLTR基因的克隆 ,标记为SD和HA。将所得克隆测序并与国外报道的REVLTR基因进行比较 ,发现国内分离株与国外株有

禽网状内皮组织增殖病病毒的实时荧光定量PCR检测

基于Light Cycler平台,利用SYBR GreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。整个检测过程2 h内可以完成,病毒的最低检出浓度为10-7,在特异性试验中,REV有特异性的扩增曲线,而禽流感病毒和阴性对照一样,没有特异性扩增。对REV患鸡各器官组织进行了荧光PCR检测,各脏器病毒含量从高到低依次是肝、脾、腺胃、肾、肌胃,肝脏中的病毒含量最高,肌胃中的病毒含量最少,肺中没有检测到病毒。基于SYBR GreenI的荧光PCR方法检测REV快速、敏感、特异性好,为开展REV病原学检测提供了一种快速、无污染的方法。

肉鸡感染禽网状内皮组织增殖病的诊断及流行病学分析

禽网状内皮组织增殖病病毒（REV）引起鸡、鸭、鹅、火鸡及其它禽类的网状内皮组织增殖病（RE），它是以急性网状细胞肿瘤形成、矮小综合征、淋巴组织和其它组织的慢性肿瘤形成为特征的一群病理综合征，由于病毒引起的肿瘤以网状组织增生为特征，因此称为禽网状内皮组织增殖病。

禽网状内皮组织增殖病的实验室诊断

经剖检观察到病鸡脏器上的肿瘤结节,病理组织学检查到心、肝、脾、肺、肾、肠等组织中有大量网状细胞增生。免疫组织化学检测到病变组织中有REV抗原。因此,将组织学病理变化和检测禽网状内皮组织增殖病病毒相结合可以作为实验室快速、准确诊断禽网状内皮组织增殖病的方法。

禽网状内皮组织增殖病病毒GD09株的分离与全基因组测序

从广东某鸡场送检的疑似禽网状内皮组织增殖病的病鸡中采集病料,处理后经接种DF-1细胞,经聚合酶链式反应(PCR)及特异性间接免疫荧光试验(IFA),分离并鉴定出1株禽网状内皮组织增殖病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV),命名为GD09。依据已发表的REV前病毒全基因组序列设计并合成6对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示,该分离株基因组序列全长8295bp,符合典型的复制完全型反转录病毒的基因组结构,基因序列中不含已知致癌基因。将该分离株的亚群特异性gp90基因序列与国内外各参考株相应序列进行相似性比较分析,结果表明,GD09分离株与中国分离株HA9901亲缘关系最近,核苷酸相似性最高。

禽网状内皮组织增殖病研究进展

综述了禽网状内皮组织增殖病的发生与分布、病原学、发病机制、流行病学、诊断与防制。

聚合酶链反应技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒

目的建立聚合酶链反应(PCR)技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。方法提取感染REV-T和脾坏死病毒(SNV)的SPF鸡胚成纤维细胞DNA为模板,利用前病毒长末端重复序列(LTR)区引物进行扩增。采集肿瘤病鸡,以及人工感染REV 28 d后鸡肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊等器官,进行扩增。同时将采集的脏器组织,进行HE染色和免疫组化试验(IHC)。结果REV-T感染的组织未检测出电泳条带,而SNV感染的细胞中检测到了一条300bp特异而清晰的电泳条带,而且SNV感染的鸡组织中,PCR方法检测到了特异的条带。通过HE染色和免疫组化技术观察到了肿瘤组织,肿瘤细胞的形态、分布。结论PCR检测REV更快捷,特异更好。

网状内皮组织增殖病病毒感染鸡红细胞免疫功能的动态变化

对１日龄ＳＰＦ鸡分别腹腔接种３株禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）的ＲＥＶ－Ｔ，ＤＩＡ和Ｃ４８株，测得试验鸡红细胞补体（Ｃ３ｂ）受体花环率自接种后１１ｄ起显著低于对照组；而红细胞免疫复合物（ＩＣ）花环率从接种后２５ｄ起（３２ｄ除外），又显著高于对照组。接种不同ＲＥＶ毒株的鸡红细胞Ｃ３ｂ受体花环率和ＩＣ花环率的变化程度不一致，表明不同毒株引起的免疫抑制程度不同。

禽网状内皮组织增殖病病毒LTR序列的启动子功能

通过PCR方法,将禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)扩增并克隆进pUC-18质粒多克隆位点(MCS)的EcoRI和SacI之间,并以BGH基因的多聚腺苷酸序列作为终止子克隆到SphI和HindⅢ之间,构建成重组质粒pUC-LTR。将GFP基因和REV囊膜糖蛋白gp90基因分别克隆到pUC-LTR载体中,获得质粒pUC-LTR-GFP和质粒pUC-LTR-gp90。重组质粒经转染48h,能够检测到外源基因的表达。本研究提示,REVLTR能够作为启动子构建表达质粒。