蛋鸡中发现J亚群白血病与网状内皮增生症自然混合感染

发病蛋鸡经组织学、免疫组化检测确诊为J亚群白血病与网状内皮增生症混合感染。与人工接种病例不同的是,在肿瘤组织内还发现一种特殊的细胞——淋巴-巨噬细胞;在骨髓和肿瘤组织中检测到部分髓细胞胞浆内有ALV-J抗原表达。从发病情况、各器官病变程度及免疫组化结果来看,2种病原存在明显的相互协同作用,脾可能是网状内皮增生症的原发器官,但其发病的时间可能不如J亚群白血病早。此次在蛋种鸡发现此混合感染提示,病毒在环境选择压及免疫选择压的作用下,其生物特性、致病作用以及宿主范围均可发生改变,应警惕J亚群白血病和网状内皮增生症混合感染在蛋鸡中的大面积暴发。

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测网状内皮增生症病毒方法的建立

根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列LTR基因保守区域设计并合成一对引物,建立基于SYBR GreenI模式的实时荧光PCR方法(Real-timePCR)。以常规PCR产物为标准品建立标准曲线,并对方法的特异性、敏感性、可重复性以及再现性、检出率进行评价。结果表明,该方法只从REV阳性样本检出扩增信号,不与其它病原出现交叉反应;熔解温度为86.8±0.5℃,无引物二聚体;扩增产物片段大小为270bp,与预期大小相符,测序结果证实为REV靶序列;在1.01×102～1.01×109拷贝之间呈现良好的线性关系,相关系数为0.999,扩增效率为99.7%,最低可检测101拷贝/反应阳性标准品,比常规PCR敏感103倍;组内变异系数、组间变异系数分别为4.80%～5.72%、0.75%～3.87%;对16例临床疑似病例进行检测,阳性率为81.25%(13/16),随机抽取7份阳性扩增产物进行测序,证实为REV序列。本研究建立的SYBR GreenI实时荧光PCR特异性强、通量高、灵敏度高、检测速度快,为REV的快速检测、分子流行病学调查以及监测REV污染疫苗情况提供新方法。

禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株。经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8。2株细胞培养上清的效价均在1∶4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上。亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为κ链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性。利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100%和90%。作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础。

鸡传染性贫血病毒与禽网状内皮增生症病毒二重PCR检测方法的建立

当前养鸡业中鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒混合感染的发生率日益增高,为提高CIAV、REV检测效率,根据GenBank上登录的CIAV全基因序列和REV的LTR序列分别设计了2对引物,建立了REV、CIAV二重PCR检测方法,另外还比较了2种不同的DNA提取方法。结果显示,该方法扩增目的条带清晰、敏感性高、特异性好。应用建立的方法对临床7份病料样品检测,检出5份CIAV、REV阳性,表明建立的二重PCR方法能有效用于CIAV、REV混合感染的临床诊断。

PCR结合斑点杂交技术在检测禽网状内皮增生病毒中的应用

为评价PCR结合斑点杂交技术在鸡REV检测中的应用价值,采用PCR法制备禽网状内皮细胞增生症病毒特异性地高辛标记DNA探针,同时用PCR技术、斑点杂交方法和PCR产物斑点杂交方法检测了不同地区的病、死鸡的组织样品REV的感染情况。结果表明,PCR产物斑点杂交法的检出率(45.16%,14/31)高于组织DNA直接斑点杂交法(32.26%,10/31),显著高于单纯PCR扩增法(0%,0/31)。PCR结合斑点杂交检测技术能快速、敏感、准确,充分避免PCR中的假阴性和假阳性现象,值得推广应用。

鸡传染性贫血病毒、网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒基因芯片检测方法的建立

基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参考毒株的序列,设计合成特异性扩增引物及探针,将下游引物进行Cy3荧光标记,制备基因芯片;分别提取几种病毒的基因组DNA,进行PCR扩增后与探针进行杂交,荧光检测仪扫描并分析结果。结果表明:制备的芯片能够同时检测CIAV、REV与ALV A、C、D亚群,该方法对病毒的最低检测限为106copies/m L,特异性试验结果表明,该方法与NDV、MDV和IBDV均无交叉反应,可快速鉴别ALV、REV、CIAV。为今后在临床应用中快速鉴别诊断CIAV、REV与ALV A、C、D亚群提供了可行性。

福州市鸡群网状内皮增生症病毒血清学调查与初步分析

应用ELISA抗体检测试剂盒,对福州市9个养殖场鸡群进行网状内皮增生症病毒（Reticuloendotheliosis Virus,REV）抗体检测。共采集了鸡血清样品427份。结果表明,被检样品总的阳性率为29.51%（126/427）,阳性的鸡场数占鸡场总数的77.78%（7/9）,养殖场个体阳性率在0~98.36%之间。经比较不同品种REV抗体阳性率,发现肉鸡的感染率最高（61.18%）,蛋鸡次之（15.48%）,种鸡最低（6.60%）。不同日龄段不同品种的鸡群REV抗体阳性率呈散在分布。

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV(A、B亚群)抗体检测。在572份血清样品中,除了一个8.1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13.3%和75%外,其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫,抗体阳性率均为100%。在212份血清样品中,REV抗体阳性率在16.7%～62.5%之间;ALV(A、B亚群)抗体阳性率在0%～75%之间。本研究结果表明,所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。

广西部分规模场禽网状内皮增生症流行病学调查

通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63%;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的鸡痘疫苗检测出1个批次为禽网状内皮增生症病毒阳性,8个批次的马立克氏病疫苗均未检测出禽网状内皮增生症病毒。

不同日龄肉鸡感染网状内皮增生症和传染性贫血动态分布及抗体产生规律

为了解禽网状内皮增生症(REV)和传染性贫血(CAV)在商品肉鸡中的感染情况,对某鸡场不同日龄商品肉鸡,通过斑点杂交和ELISA,对这两种免疫抑制病进行抗原和抗体检测。结果表明:137份病料中REV感染率为2.19%,高于CAV的感染率(1.46%),相对应的90份血清样品中REV抗体水平都低于相同日龄CAV抗体水平(42日龄除外),且都低于50%。这些检测结果为该商品肉鸡制定合理的免疫程序提供可靠生物学背景,具有重要的兽医临床指导意义。

网状内皮增生症（ＲＥ）琼脂扩散和间接荧光免疫法的建立

网状内皮增生症是指逆转录病毒群中的逆转录病毒REV引起的一群病理综合症。主要表现为网状细胞肿瘤的形成,淋巴组织和其他组织肿瘤的形成。该病以水平和垂直方式进行传播,虽然垂直传播比例不高,但对于SPF鸡群来说十分危险。本室为了准确地监测本病,研究开发了AGP和IFA两种监测方法,经过实验取得了良好的效果。实验表明,REVIFA方法的特异性和敏感性均高于AGP方法。

禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立

为建立禽网状内皮增生症病毒(REV)的ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增gp90基因,构建杆状病毒重组质粒,转化DH10Bac后,通过转座获得重组杆粒,并将其转染Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE及western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约为45 ku,具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白纯化后包被ELISA反应板,建立检测REV抗体的rgp90-ELISA方法。特异性试验结果表明该方法具有良好的特异性;将该方法与IDEXX公司生产的试剂盒共同检测包括63份已知背景的血清在内的黑龙江省和广东省的临床血清样品共477份,符合率分别为90.5%和86.4%。该方法的建立为禽群REV抗体的监测提供了方便、快捷、准确的技术手段。

从表现腺胃炎的病鸡中分离到1株网状内皮增生症病毒

从表现传染性腺胃炎的病鸡中分离到 １ 株病毒。该病毒呈球形，真径 ８０～１００ ｎｍ ，有囊膜。将病料接种于鸡胚成纤维细胞，分别用单克隆抗体免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验，证明该病毒为网状内皮组织增生症病毒。用细胞培养物接种于 １ 日龄健康鸡，复制出与临床完全相同的症状。

商品肉用种雏鸡接种污染网状内皮增生病毒的鸡痘疫苗…

用肉肯和显微镜检查两群２７和３１周龄商品肉用种鸡的组织，在一些病鸡组织中发现了内脏淋巴瘤及囊淋巴瘤病变。从发病鸡血液中到网状仙皮增生病毒（ＲＥＶ），未分离出鸡血病病毒（ＡＬＶ）。从肿瘤中提取ＤＮＡ，用ＰＣＲ检查，结果为ＲＥＶ阳性，而ＡＬＶ和马立克氏病毒毒为一。为确定ＲＥＶ的传染源。检查了用于免疫７日龄鸡群的商品鸡痘（ＦＰ）疫苗。以ＰＣＲ和免疫荧光技术检查了接种ＦＰ疫苗的鸡胚成纤维细胞。

禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立

根据禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至pMD-19T载体,进行测序和比对;将基因片段按正确的阅读框架定向克隆至pET-32a（＋）,转化大肠杆菌BL21（DE3）,以IPTG诱导表达,包涵体洗涤纯化,探讨以重组gp90蛋白为包被抗原初步建立检测REV的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法.结果表明：1）REV-SC1株gp90核苷酸序列与在GenBank上已发表序列的同源性最高为99%,于231位、870位发生了2个碱基突变;2）SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约为45 ku,与预期分子质量大小相符;免疫印迹（Western-blot）结果表明重组蛋白具有生物学活性;3）间接ELISA检测方法的最佳抗原包被质量浓度为1.5 mg·mL-1,一抗稀释度为1∶320,临界值为0.126;特异性、敏感性试验结果良好.综上,本试验成功表达了REVgp90蛋白,并对其在ELISA检测方面的应用作了初步探讨.

简述禽网状内皮增生组织病毒危害及其P30蛋白免疫抑制功能

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis Virus,REV)是由禽网状内皮组织增生病毒(Reticuloendotheliosis,RE)引起的一类免疫抑制性疾病和肿瘤性疾病,感染对象包括鸭、火鸡、鸡和野禽,可引起免疫抑制、致命性网状细胞瘤、生长抑制综合征(短综合征)和慢性肿瘤.REV不仅可以诱导肿瘤病变,还可以引起患病鸡生长迟缓,并且与马立克氏病毒(Marek's disease virus,MDV)、禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)等多种免疫抑制性病毒发生混合感染.最为重要的是,REV感染可使感染鸡产生严重的免疫抑制,降低或消除对其他疫苗的免疫应答,极易引起其它病原体的二次感染,导致清除率和死亡率的增加,给养鸡业带来巨大的经济损失.目前,尚无有效防治措施.

一例肉鸡网状内皮组织增生症病毒与圆圈病毒混合感染的实验室诊断

黑龙江地区某养殖场,28日龄商品肉鸡出现精神萎靡,采食量下降,生长缓慢的症状,发病鸡在眼、鼻、喙部位出现溃疡结痂。病鸡剖检病理变化主要是腺胃出血、乳头肿胀,肾脏肿大、脾脏出血坏死、法氏囊萎缩、肠炎等,病原学核酸检测结果表明该鸡场存在禽网状内皮组织增生症病毒和圆圈病毒3型的混合感染。本病例的实验室诊断为家禽疫病防控提供了部分理论基础和有效参考。

黔东南小香鸡种群禽白血病、禽网状内皮组织增生症和鸡白痢感染情况检测与分析

为了解黔东南小香鸡种群禽白血病(AL)、禽网状内皮组织增生症(RE)和鸡白痢(PD)的感染状况,便于有效预防、净化疫病,更好地保护黔东南小香鸡的种质资源,从鸡群采集524份血清样品,采用ELISA检测禽白血病病毒p27抗原(ALV-p27)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)及鸡白痢感染抗体水平,采用PCR核酸检测进行禽白血病病毒A、B、J亚群(ALV-A、B、J)鉴定。结果表明:样品中ALV-p27抗原的阳性率为85.88%、ALV-J亚群的阳性率42.67%,REV抗体的阳性率为25.57%,鸡白痢抗体的阳性率为3.82%。根据检测结果,建议尽早对种群采取净化措施,以避免AL进一步发生及流行。

禽网状内皮组织增生症及其危害

禽网状内皮组织增生症(RE)是由网状内皮组织增生症病毒(REV)引起的禽类的一种重要的免疫抑制性和致瘤性疾病。近年来,国内外鸡群中REV流行逐渐严重,是养禽业健康发展的重要威胁之一。本文综述了REV的分子病原学、流行病学,以及直接和间接危害,对人们更好地认识和防控该病具有重要意义。

禽网状内皮组织增生症研究进展

禽网状内皮组织增生症(RE),也被称为极性网状内皮组织细胞癌,是一种重要的家禽免疫抑制疾病。其病原体禽网状内皮组织组织增生症病毒(REV)广泛分布于不同鸟类,可引起亚临床感染。REV具有免疫抑制作用,REV整合到其他较大DNA病毒基因组中的能力使其诊断和预防变得复杂,可能导致其他疫病的疫苗接种失败。目前还没有有效的治疗方案和预防疫苗,这也使如何限制RE对家禽养殖的影响变得复杂。本文综述了RE已知的知识现状,强调了这一问题的严重性。