3种方法检测禽网状内皮组织增殖病毒人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒比较

为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒(REV)的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病(RE)净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量RT-PCR检测,对1日龄雏鸡血液和胎粪样品,7~70日龄鸡(每隔1周)的血液和泄殖腔棉拭子样品,进行REV检测和结果比较。结果显示:对1日龄出壳的SPF鸡血浆进行检测,荧光定量RT-PCR灵敏度最高,阳性检出率为100%(25/25),其次为病毒分离,阳性检出率为96%(24/25),RT-PCR检出率最低;对1日龄出壳的SPF鸡胎粪进行检测,荧光定量RT-PCR与病毒分离灵敏度一致,阳性检出率均为80%(20/25),RT-PCR检出率最低,为28%(7/25)。对7~70日龄鸡(每隔1周)进行血液和泄殖腔棉拭子检测,3种方法阳性检出率与1日龄检测情况总体相似,检出率从高到低依次为荧光定量RT-PCR、病毒分离和RT-PCR。结果表明,在同一检测时间点使用同一检测方法,胎粪/泄殖腔棉拭子REV阳性检出率基本低于血液检出率。本研究初步比较了不同方法检测REV人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒情况,为实施REV净化奠定了基础。

不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测

为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。

禽网状内皮组织增殖症的诊治

禽网状内皮组织增殖症(reticuloendotheliosis,RE)是由反转录病毒属的禽网状内皮组织增殖症病毒(avian reticuloendotheliosis virus,REV)感染多种禽类引起的一群病理综合征。目前该病在我国被列为三类动物疫病。徐佳等于2018和2019年对黑龙江省四个种鸡场随机采样。

昆虫细胞表达的网状内皮组织增殖症病毒囊膜糖蛋白及其免疫性

利用Bac-to-BacBaculovirusExpressionSystems构建了能表达禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)囊膜糖蛋白基因(env)的重组杆状病毒。用REV特异性单克隆抗体分别做间接免疫荧光抗体试验(IFA)和免疫转印试验,均可从感染的Sf9昆虫细胞中检出REVenv。重组杆状病毒感染的Sf9细胞裂解后制备成油乳疫苗免疫SPF鸡后,可以诱发维持45d以上的特异性抗REV抗体,并可抵抗REV病毒感染。

网状内皮组织增殖病病毒(REV)不同分离株LTR基因的序列分析

从山东、江苏的几个大型鸡场收集疑为REV感染的鸡脾脏、肝脏 ,提取组织DNA ,并以此为模板 ,通过PCR技术 ,从山东泰安及江苏海安的某鸡场中分别扩增到REV的LTR基因。将该基因克隆进TA载体中 ,转化大肠杆菌TG1,经酶切鉴定 ,得到了两株REVLTR基因的克隆 ,标记为SD和HA。将所得克隆测序并与国外报道的REVLTR基因进行比较 ,发现国内分离株与国外株有

不同方法对网状内皮组织增殖病病毒的检测

从山东、江苏、上海等地的鸡场中 ,收集疑为网状内皮组织增殖病病毒 (REV)感染鸡的脾脏、肝脏 5 6份 ,分别通过聚合酶链式反应 (PCR)、班点杂交试验 (Dot- blot)和间接免疫荧光试验 (IFA)对其进行 REV检测。结果有 2 1份呈PCR阳性 ,2 0份呈 Dot- blot阳性 ,15份呈 IFA阳性 ,且所有 IFA阳性样品 ,PCR和 Dot- blot检测都呈阳性 ,2 0份Dot- blot阳性样品中有 19份呈 PCR阳性。研究表明 ,PCR检测 REV较其他方法敏感 ,可作为 REV的常规检测方法之一。

禽网状内皮组织增殖病病毒的实时荧光定量PCR检测

基于Light Cycler平台,利用SYBR GreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。整个检测过程2 h内可以完成,病毒的最低检出浓度为10-7,在特异性试验中,REV有特异性的扩增曲线,而禽流感病毒和阴性对照一样,没有特异性扩增。对REV患鸡各器官组织进行了荧光PCR检测,各脏器病毒含量从高到低依次是肝、脾、腺胃、肾、肌胃,肝脏中的病毒含量最高,肌胃中的病毒含量最少,肺中没有检测到病毒。基于SYBR GreenI的荧光PCR方法检测REV快速、敏感、特异性好,为开展REV病原学检测提供了一种快速、无污染的方法。

禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用

以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。

14株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征(英文)

[目的]研究十四株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征。[方法]对分离于我国不同商品蛋鸡场的14株REV的表面囊膜基因gp90进行了扩增和序列测定。[结果]序列分析表明,这14株REV不同于我国早期分离毒株与亚型3毒株亲缘关系较近。另外发现,这14株REV与美国和我国台湾的流行毒株同源性较高。[结论]本研究对深入研究我国REV的流行和遗传演化意义重大。

禽网状内皮组织增殖病病毒GD09株的分离与全基因组测序

从广东某鸡场送检的疑似禽网状内皮组织增殖病的病鸡中采集病料,处理后经接种DF-1细胞,经聚合酶链式反应(PCR)及特异性间接免疫荧光试验(IFA),分离并鉴定出1株禽网状内皮组织增殖病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV),命名为GD09。依据已发表的REV前病毒全基因组序列设计并合成6对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示,该分离株基因组序列全长8295bp,符合典型的复制完全型反转录病毒的基因组结构,基因序列中不含已知致癌基因。将该分离株的亚群特异性gp90基因序列与国内外各参考株相应序列进行相似性比较分析,结果表明,GD09分离株与中国分离株HA9901亲缘关系最近,核苷酸相似性最高。

聚合酶链反应技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒

目的建立聚合酶链反应(PCR)技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。方法提取感染REV-T和脾坏死病毒(SNV)的SPF鸡胚成纤维细胞DNA为模板,利用前病毒长末端重复序列(LTR)区引物进行扩增。采集肿瘤病鸡,以及人工感染REV 28 d后鸡肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊等器官,进行扩增。同时将采集的脏器组织,进行HE染色和免疫组化试验(IHC)。结果REV-T感染的组织未检测出电泳条带,而SNV感染的细胞中检测到了一条300bp特异而清晰的电泳条带,而且SNV感染的鸡组织中,PCR方法检测到了特异的条带。通过HE染色和免疫组化技术观察到了肿瘤组织,肿瘤细胞的形态、分布。结论PCR检测REV更快捷,特异更好。

禽网状内皮组织增殖病病毒LTR序列的启动子功能

通过PCR方法,将禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)扩增并克隆进pUC-18质粒多克隆位点(MCS)的EcoRI和SacI之间,并以BGH基因的多聚腺苷酸序列作为终止子克隆到SphI和HindⅢ之间,构建成重组质粒pUC-LTR。将GFP基因和REV囊膜糖蛋白gp90基因分别克隆到pUC-LTR载体中,获得质粒pUC-LTR-GFP和质粒pUC-LTR-gp90。重组质粒经转染48h,能够检测到外源基因的表达。本研究提示,REVLTR能够作为启动子构建表达质粒。

禽网状内皮组织增生症病毒SNV株人工感染诱导细胞异常增殖研究

试验旨在研究实验室条件下人工感染对禽网状内皮组织增生症病毒(REV)非缺陷型毒株SNV致瘤能力的影响。通过将SNV株人工接种于7日胚龄SPF鸡胚、1日龄SPF雏鸡以及鸡胚成纤维细胞(CEF),动态观察被感染鸡只内脏器官肿瘤发生的特点与规律,同时监测CEF的分裂增殖能力及生长状态。结果表明:鸡胚接种SNV株后肿瘤发生的时间提前,最早可在2周龄雏鸡的肝脏、肾脏等器官发现网状细胞瘤及其他细胞的异常增生灶;免疫组化检测结果进一步显示这些异常生长的细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)表达量上升。CCK-8及P-半乳糖苷酶检测结果显示,感染SNV株的CEF增殖能力增强且衰老减缓;Western-blot结果进一步显示,感染组CEF中的PCNA表达量显著上升。由此可知,在实验室条件及人工接种等因素的影响下,原先具有慢性致瘤作用的SNV株致病能力已发生改变,表现为机体发生肿瘤的时间提前和体外培养的细胞异常增殖。

鸡混合感染J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增殖症病毒的初步研究

对1日龄肉鸡混合感染J亚群禽白血病病毒和禽网状内皮增殖症病毒进行了初步研究,结果表明:感染鸡生长发育不良,体重显著下降(P<0.05),新城疫疫苗免疫后血清中新城疫抗体效价明显低于对照组(P<0.05),同时使早期鸡对大肠杆菌等细菌性疾病的易感性增加,死亡率升高。这种作用在两种病毒的混合感染后尤为显著。

禽网状内皮组织增殖症研究进展

网状内皮组织增殖病是由网状内皮组织增殖病病毒群（Reticulendotheliosis virus group）引起禽类的一组症状不同的综合症,包括免疫抑制.

禽网状内皮组织增殖病病毒感染鸡的外周血白细胞动态变化

３２只１日龄ＳＰＦ鸡随机分为３个试验组和１个对照组。试验组分别腹腔接种３株禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ－Ｔ、ＲＥＶ－ＤＩＡ和ＲＥＶ－Ｃ４５），０．５ｍＬ／羽；对照组注射等量生理盐水。在不同时期检测感染鸡外周血白细胞数的动态变化。结果发现，各试验组鸡的白细胞总数和异嗜性白细胞百分率及总数均呈先升高后降低的趋势；淋巴细胞百分率先降低后升高，而淋巴细胞总数则在接种后第３天显著（Ｐ＜０．０１）高于对照组，第１０天起则显著低于对照组。各试验组间白细胞数的变化不尽相同。

禽网状内皮组织增殖症病原检测及其抗体检测分析

运用PCR方法对8种日龄(0、21、35、75、126、168、245、315d)的400份棉拭子、水样和环境样本以及12个批次的疫苗样本进行禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)病原检测;用间接ELISA方法对2 208份8个日龄的鸡血清样品进行REV抗体检测。结果发现,400份棉拭子、水样和环境样本REV病原检测全部为阴性,16个批次的疫苗有2个批次疫苗检测REV病原阳性。抗体分布特点是刚出壳时REV抗体滴度主要集中在3 000~10 000,占81.88%,抗体阳性率为90.58%;21~35d抗体下降明显,抗体阳性率仅为0~1.09%;70d抗体为0的鸡群占50.72%,1 077~1 500滴度之间的血清占30.43%;126~315d抗体滴度主要集中在12 000以上,占53.26%~65.94%。