RNA恒温扩增实时检测痰标本结核分枝杆菌对肺结核的诊断价值

目的:探讨RNA恒温扩增实时检测(SAT)技术检测痰标本结核分枝杆菌(MTB)对肺结核的诊断价值.方法:选择2020年8月至2022年8月本院收治的1190例可疑活动性肺结核患者为研究对象.对患者痰标本行罗氏培养、抗酸染色、SAT检测,以痰培养结果为"金标准",分析SAT检测方法的诊断价值.结果:痰培养结果明确肺结核患者990例,非肺结核患者200例;SAT检测明确肺结核患者570例,非肺结核患者620例;罗氏培养法明确肺结核患者445例,非肺结核患者745例;抗酸染色法明确肺结核患者300例,非肺结核患者890例.与罗氏培养法及抗酸染色法比较,SAT检测对于肺结核诊断灵敏度、准确度、阳性预测值及阴性预测值分别为56.97%(564/990)、63.95%(761/1190)、98.95%(564/570)、31.29%(194/620),均高于罗氏培养法及抗酸染色法,差异均有统计学意义(P<0.05);特异度各检查方法比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:SAT检测痰标本MTB对肺结核诊断具有较高的应用价值,能在较短时间内提供诊断结果,且具有较高的诊断准确度,为临床进一步诊疗提供了可靠的参考依据.

环介导等温扩增技术在病原微生物临床检测中的应用

病原微生物是威胁人类健康的重要因素之一,快速、准确的检测方法对于感染性疾病的诊断具有重要意义。环介导等温扩增(LAMP)是一种恒温扩增方法,具有反应时间短、操作简便、灵敏度高、特异度高、检测成本低等优点,因此被广泛应用于感染性疾病的快速诊断。基于这种情况,该文主要阐述了LAMP的原理、特点及其在临床常见病原微生物检测方面的应用与研究进展。LAMP技术现在已经被应用于病原微生物的检测,且具有较高的灵敏度及特异度,但该技术仍有易产生假阳性、引物设计复杂等不足之处。该文综述了近年来LAMP技术在病原微生物感染中的应用与进展,并对其未来的发展前景进行了展望,以期在资源有限的环境中为病原微生物感染的快速诊断提供合理的研究方向。

结核感染T细胞斑点试验、结核分枝杆菌核酸恒温扩增检测及腺苷脱氨酶联合检测在结核性胸腔积液诊断中的价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核分枝杆菌核酸恒温扩增检测(TB-SAT)、腺苷脱氨酶(ADA)联合检测对结核性胸腔积液的诊断价值。方法选择2021年1月至2021年12月于新乡医学院第一附属医院就诊的135例胸腔积液患者为研究对象,其中结核性胸腔积液患者83例,非结核性胸腔积液患者52例。135例患者均进行外周血T-SPOT.TB、胸腔积液TB-SAT和胸腔积液ADA检测,比较3种方法单独检测和联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度及特异度。结果T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度、特异度比较差异均无统计学意义(P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.990、13.410、14.590,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.000、2.420、0.060,P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于ADA单独检测(χ^(2)=4.069,P<0.05),与T-SPOT.TB、TB-SAT单独检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.055、3.384,P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.370、12.511、5.371,P<0.05)。TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度与T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.000、2.604、3.213,P>0.05)。TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于TB-SAT单独检测(χ^(2)=5.765,P<0.05),与T-SPOT.TB、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.782、1.251,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=6.760、15.755、16.966,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.370、12.511、5.371,P<0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测(χ^(2)=4.090、4.990,P<0.05);T-SPOT.TB+ADA联合检测与TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.060,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著高于T-SPOT.TB+ADA联合检测(χ^(2)=4.371,P<0.05);TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB+TB-SAT、T-SPOT.TB+ADA联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.780、1.490,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度与T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.210,P>0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测(χ^(2)=5.750、6.760,P<0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测(χ^(2)=4.370,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.000、1.490,P>0.05)。结论联合检测较单一检测诊断结核性胸腔积液效果理想,外周血T-SPOT.TB联合胸腔积液TB-SAT诊断结核性胸腔积液的总体效能最好。联合检测能有效降低漏诊率和误诊率,对结核性胸腔积液具有较高的临床应用价值。

交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立

目的:建立一种快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)和非结核分枝杆菌(NTM)的分子交叉引物恒温扩增技术(CPA)检测系统。方法:针对分枝杆菌高度保守的16S rRNA基因序列设计6套CPA引物和3个探针。以含16S rRNA基因序列质粒(浓度为1000拷贝/μl)为阳性模板,筛选确立最佳引物探针组合,并对建立的最佳反应体系进行敏感度、特异度和包容性分析。收集福建省龙岩市第二医院2022年2月8日至2023年3月14日具有肺结核症状或体征的125例疑似肺结核患者的标本,采用分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)和建立的CPA法对收集到的标本进行检测,并对两种方法间的检测结果一致性进行统计分析,采用Kappa值评估。Kappa值≥0.75,说明一致性好。结果:筛选出MTBC/NTM-16S-6引物和MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3为分枝杆菌检测系统最佳引物探针组合,检测体系最低检测限为100拷贝/μl,检测时间为40 min,能检出MTBC和临床常见NTM,且与常见呼吸道细菌无交叉反应。与实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法相比,阳性预测值为95.65%(66/69),阴性预测值为85.71%(48/56),符合率为91.20%(114/125),Kappa值为0.82。结论:成功建立了一种基于CPA技术的快速检测MTBC和NTM的检测系统,能够为基层医院结核病疫情防控提供一种新的检测方法。

网状分枝扩增技术快速检测大肠埃希菌O157:H7及其他产志贺样毒素大肠埃希菌

目的:建立一种简便、快速、灵敏和特异的检测食品和临床标本中大肠埃希菌O157 : H7及其他产志贺样毒大肠埃希菌(STEC)的方法。方法:设计并合成了检测志贺毒素2(stx2)基因特异的环形探针和捕获探针,确定网状分枝扩增方法(RAM)的灵敏度;含有stx2基因的不同血清型的菌株包括O46 : H38、 O22:H8、O111:NM,用于RAM特异度的测定。用RAM检测所有分离的菌株,并进一步对瞬时RAM进行研究。结果:RAM最低能检测10个拷贝的stx2合成靶基因和临床分离的菌株,表明RAM与PCR具有一样的灵敏度。特异度的测定结果表明不同血清型的大肠埃希菌均为stx2阳性,而非致病性大肠埃希菌ATCC23716则为阴性。在32株菌株中,28株细菌含有stx2基因,其余则为阴性,与PCR检测结果100％一致。瞬时RAM结果也表明最低能检测10个细菌,检测信号的出现依赖于样品的浓度。结论:RAM的简便和等温扩增特点可替代PCR检测各种标本中大肠埃希菌O157:H7和STEC。

结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术检测肺泡灌洗液诊断肺结核的价值

收集陕西省结核病防治院2021年10月至2022年7月疑似肺结核住院患者的肺泡灌洗液,同时进行涂片抗酸杆菌染色、分枝杆菌BACTEC MGIT 960液体培养(简称“培养”)及菌种鉴定、GeneXpert MTB/RIF、结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术(simultaneous amplification and testing for Mycobacterium tuberculosis,SAT-TB),并对结果进行分析。以培养法(菌种鉴定结果为结核分枝杆菌复合群)为参考标准,SAT-TB诊断肺结核的敏感度为80.61%(399/495),特异度为87.74%(1259/1435),阳性预测值为69.39%(399/575),阴性预测值为92.92%(1259/1355),约登指数为0.68。SAT-TB技术具有敏感度和特异度较高的特点,对临床快速诊断活动性结核病具有一定的价值。

二代交叉引物恒温扩增技术对结核分枝杆菌检测的应用价值

目的 评估二代交叉引物恒温扩增技术(CPA)对结核分枝杆菌(MTB)检测的应用价值。方法 选取我院收治患者送检的各类标本235例,其中痰液98例、肺泡灌洗液76例、胸(腹)水37例、其它标本(穿刺液及分泌物等)24例。对每份送检标本应用多色巢式荧光定量PCR(Xpert MTB/RIF)和二代CPA同步检测MTB,比较二者检测结果的差异。结果 Xpert MTB/RIF和二代CPA检测MTB的总体阳性率分别为43.38%和42.13%,对痰液、肺泡灌洗液、胸(腹)水、其它标本(穿刺液及分泌物等)的阳性检出率则分别为50.00%与47.96%、47.37%与44.74%、16.22%与16.22%、50.00%与50.00%,二者对各类标本的阳性检出率比较差异均无统计学意义(p>0.05)。二者对全部标本的阳性符合率88.35%,阴性符合率93.94%,总符合率91.49%,一致性比较,Kappa=0.83。二者检测结果的差异主要表现在少数含菌量极低的标本。结论 二代CPA与Xpert MTB/RIF对检测MTB结果比较具有极高的一致性,二代CPA可推荐用于临床对MTB的快速检测。

4种实验室检测技术对肺外结核病成人患者非呼吸道标本中结核分枝杆菌检出率对比观察

目的 对比观察结核菌荧光染色、环介导等温扩增技术(LAMP)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)、全自动分枝杆菌液体培养检测技术(BACTEC MGIT 960)诊断成人肺外结核病非呼吸道标本结核分枝杆菌(MTB)的效能。方法 收集2019年1月—2021年12月确诊为肺外结核病患者的非呼吸道标本317例份(组织155例份、尿液52例份、胸水47例份、脓液41例份、脑脊液22例份),分别采用荧光染色、LAMP、BACTEC MGIT 960、Xpert MTB/RIF检测,比较各检测技术检测同一种非呼吸道标本的MTB检出率。结果 LAMP、Xpert MTB/RIF、BACTEC MGIT 960、荧光染色的MTB检出率分别为72.6%、70.3%、48.3%、22.7%。在组织标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色检出率最低;在尿液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT 960和荧光染色;在胸水标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT 960,荧光染色最低;在脓液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色最低;在脑脊液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP、Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960检出率较高,荧光染色最低。245例荧光染色阴性的标本中,LAMP、BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF的MTB检出率分别为66.1%、39.2%和63.7%,LAMP和Xpert MTB/RIF在涂阴标本中的检出率差异无统计学意义,但均高于BACTEC MGIT 960(P均<0.05)。126例标本为Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960同时阳性,两种方法检测利福平耐药性统计分析发现,Kappa值为0.829,P<0.05。结论 LAMP和Xpert MTB/RIF诊断人肺外结核病非呼吸道标本MTB灵敏度和特异度高,同时具有检测速度快的优势;荧光染色特异度高,但灵敏度低;BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF对利福平药敏的一致性强,但培养时间长,后续能得到药物种类多,对临床治疗在药物选择性上高。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)对结核病及利福平耐药性的检测效能。方法选取588例初诊患者痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和XpertMtb/RIF检测,分析Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本中Mtb及其耐药性的敏感度和特异度。结果以固体培养试验结果作为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本Mtb的敏感度和特异度为95.0%(345/363)和89.6%(147/164),以传统比例法药敏试验结果为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为89.1%(41/46)和96.3%(289/300)。结论Xpert Mtb/RIF检测敏感度和特异度较高,在Mtb及其利福平耐药快速检测方面具有比较好的应用前景。

环介导等温扩增技术检测痰样结核分枝杆菌临床价值评价

目的 评价环介导等温扩增技术（LAMP）检测痰标本中结核分枝杆菌的效果和临床价值。 方法 收集深圳市慢性病防治中心2013年4—9月350例结核病专科门诊就诊者的痰标本，其中肺结核患者216例（初诊患者93例，其中涂阳患者41例，涂阴患者52例；随访治疗患者123例），非结核病患者134例（含非结核分枝杆菌感染11例）。用涂片法、罗氏培养法、实时PCR法和LAMP法检测样本中的结核分枝杆菌，以临床诊断为标准，用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计算LAMP对初诊患者的检出率和检测敏感度和特异度。不同方法之间检测效率的比较采用χ2检验，P〈0.05为差异有统计学意义。LAMP与实时PCR法检测的一致性评价采用Kappa检验。 结果 上述4种方法检测初诊肺结核患者痰样的敏感度分别为44.1%（41/93）、52.7%（49/93）、48.4%（45/93）、48.4%（45/93），LAMP检测敏感度与实时PCR一致；高于涂片法，低于罗氏培养法，但差异均无统计学意义（χ^2=0.75，P〉0.05；χ^2=0.75，P〉0.05）。LAMP对初诊涂阳患者的总检出率为90.2%（37/41），对初诊涂阴患者的检出率为15.4%（8/52），诊断肺结核的特异度为100.0%（134/134）。对123例治疗随访的患者，涂片、培养、实时PCR 和LAMP 4种方法单次检测的阳性率分别为26.0%（32/123）、14.6%（18/123）、31.7%（39/123）和30.9%（38/123）。LAMP和实时PCR检测总体一致率为96.9%（339/350），Kappa值为0.91。 结论 LAMP检测痰样本结核分枝杆菌用于结核病诊断具有良好的特异度，总体检测效能和实时PCR具有很高一致性，具有临床应用价值。

DNA环介导恒温扩增技术速检测结核分枝杆菌的研究

DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术,其检测结果可以通过加入核酸燃料SYBR GreenⅠ进行肉眼观察,也可以通过琼脂糖凝胶电泳进行观察。本文以结核分支杆菌(M.TB)作为研究对象,设计了4种LAMP引物以特异地识别结核分支杆菌中gyrB基因的六个特殊区域,着重于利用LAMP技术在几种常见的致病分支杆菌中能快速、特异地检测出结核分支杆菌。实验结果表明,LAMP技术能在恒温(63℃)条件下,1h内检测出结核分枝杆菌,分别对7株非结核分枝杆菌进行检测,只有一株偶发分支杆菌得到了阳性的结果。说明该技术有望应用于畜牧业中肉制品或乳制品中结核分支杆菌的检测。

RNA恒温扩增实时荧光检测技术在检测脑脊液中结核分枝杆菌的应用

目的评估用RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT-TB)快速检测脑脊液中结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法采集来我院接受检查的高度疑似儿童结核性脑膜炎患儿96例(A组),非结核性脑膜炎儿童78例(B组),分别采用夹层杯离心集菌法、罗氏培养法、SAT-TB和MTB DNA荧光定量扩增法(TB DNA)同时检测,比较筛检指标及临床应用价值。结果 A组脑脊液检测中罗氏培养法、TB DNA和SAT-TB法检测阳性率分别为40.63%、39.58%、42.71%,三者差异无统计学意义(X^2=0.20,P>0.05);以罗氏培养法作为金标准,SAT-TB法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确指数、误诊率、漏诊率、诊断符合率分别为92.31%、91.23%、87.80%、94.55%、0.84%、8.77%、7.69%和91.67%;TB DNA法的各项指标分别为66.67%、78.95%、68.42%、77.59%、0.46%、21.05%、33.33%和73.96%。结论 SAT-TB检测脑脊液标本中的MTB,具有快速、敏感度和特异度较高等优点,可提高脑脊液标本中MTB的检出率,从而提高儿童结核性脑膜炎的诊断水平。

环介导等温扩增技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌

目的建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肺结核患者痰标本和分枝杆菌阳性培养物中的结核分枝杆菌(MTB)。方法选择临床可疑肺结核患者痰标本121份、MTB阳性分离物14份,非结核分枝杆菌(NTM)阳性分离物14种共31株,用涂片抗酸染色镜检、罗氏固体培养基培养、LAMP技术分别进行检测,用LAMP技术对人MTB标准菌株H37Rv及卡介苗(BCG)进行检测,判断LAMP检出限并评价敏感性和特异性。结果涂片法抗酸杆菌检出率为38.02%(46/121),培养法MTB检出率为42.15%(51/121),LAMP法MTB检出率为49.28%(56/121),差异无统计学意义(χ2分别为3.146和1.247,P均>0.05)。对121例可疑肺结核患者痰标本进行MTB检测,以罗氏固体培养基培养结果为金标准,LAMP检测结果的敏感性为92.16%(47/51),特异性为87.14%(61/70),二者无显著性差异(χ2=1.247,P>0.05),且一致性强(kappa=0.78,P<0.01)。LAMP能准确分辨MTB和NTM阳性分离物,对H37Rv、BCG检测结果均为阳性;对H37Rv菌株的检出限为120 CFU/mL。结论 LAMP检测MTB敏感性和特异性高,操作简便易行、快速准确,不需要昂贵的检验设备,适于基层医院结核病诊断的推广和应用。

不同靶点环介导等温扩增技术对结核分枝杆菌检测的比较研究

目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者，对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者，收集痰标本后采用LAMP、定量PCR及涂片法进行分析，评价LAMP技术的临床应用价值。采用LAMP及定量PCR分别对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测，评价LAMP技术的检测限；同时对鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌、龟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等8种非结核分枝杆菌菌株及4株普通菌标准株包括大肠埃希菌（ATCC25922）、阴沟肠杆菌（ATCC700323）、铜绿假单胞菌（ATcc27853）和金黄色葡萄球菌标准菌株（ATcc29213）进行鉴定，评价LAMP的敏感度和特异度。结果本研究采用hspX、IS6110和gyrB靶基因进行LAMP检测，对H37Rv的DNA样品检测限分别为320amol／L，320amol／L和32amol／L。LAMP对8种非结核分枝杆菌和4种普通菌检测结果为阴性。对照组中健康志愿者定量PCR，涂片法及LAMP方法的结果均为阴性，对照组中肺癌患者中hspX，gyrB，IS6110LAMP方法和定量PCR阳性结果2例，3种靶基因位点的LAMP和定量PCR检测的特异度均为96．9％（63／65）。针对hspX、gyrB、IS6110靶基因进行LAMP检测，对68例肺结核患者痰标本检测的敏感度分别为75．0％（51／68），77．9％（53／68），73．5％（50／68）；定量PCR检测的敏感度为79．4％（54／68）。3种不同基因位点LAMP技术与定量PCR检测的敏感度比较差异无统计学意义（x^2=0．82，P〉0．05），但均高于涂片法的38．2％（26／68），LAMP技术与涂片法之间差异均有统计学意义（x^2=18．71，x^2=22．02，x^2=17．18，P值均〈0．01）。结论hspX、gyrB、IS6110LAMP技术检测的敏感度和特异度均较高，尤其是针对gyrB靶基因位点进行LAMP检测的敏感度与定量PCR接近，并且高于涂片法；如果结合不同基因位点LAMP技术的检测结果进行评判可以提高该技术的敏感度。

环介导等温扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的评价环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术在结核分枝杆菌诊断中的应用价值。方法收集246份疑似肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检,罗氏培养以及实时定量PCR和LAMP法检测。结果涂片镜检,罗氏培养实时定量PCR和LAMP法对结核分枝杆菌的检出率分别为30.89%,45.53%,54.47%,57.32%。以罗氏培养结果作为金标准,LAMP法诊断的敏感性为96.19%(101/105),特异性为76.87%(103/134),两种方法检测结果的一致性是Κ=0.71,两法具有很好的吻合性。以实时定量法为标准,LAMP法的敏感性为90.07%(127/141),特异性为93.33%(98/105),两法检测结果的一致性是κ=0.83,P<0.001。结论 LAMP法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,与罗氏培养和RT-PCR有着较高的吻合性,很适合作为临床检测项目开展。

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用

目的评估采用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)快速检测结核性胸膜炎患者胸腔积液中的结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法收集90例确诊结核性胸膜炎患者胸腔积液标本和52例非结核性胸膜炎患者胸腔积液标本,分别采用罗氏培养法、SAT和DNA荧光定量扩增法检测MTB,并通过与罗氏培养法比较,分析SAT的灵敏度、特异度及临床应用价值。结果以罗氏培养法为标准,则SAT的灵敏度、特异度和约登指数分别为90.9%、72.1%、0.630。在临床确诊的结核性胸膜炎患者中,罗氏培养法和SAT检测胸腔积液标本的阳性检出率分别为24.4%、43.3%,差异有统计学意义(χ2=7.166 3,P=0.001 4)。结论 SAT检测胸腔积液标本中的MTB,具有快速、灵敏度和特异度较高的优点,可提高胸腔积液标本中MTB的检出率并减少误诊和漏诊的发生。

世界卫生组织《关于更新使用结核分枝杆菌及其耐药性核酸扩增检测技术的建议》的启示

快速并准确诊断结核病及耐药结核病对于结核病防治至关重要。世界卫生组织于2021年2月18日发布了《关于更新使用结核分枝杆菌及其耐药性核酸扩增检测技术的建议》。笔者对其更新的技术及技术指标进行描述和分析,并就此背景下对中国结核病防治规划实施中相关领域可汲取的经验、潜在影响及实施层面的问题和启示进行阐述。

环介导等温扩增技术在检测痰标本结核分枝杆菌中的应用

目的评价结核分枝杆菌环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测试剂盒的临床应用效果。方法选取肺结核患者183例(肺结核组)和非肺结核患者120例(对照组)。采用涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP对痰标本进行检测,采用结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒(TB-PCR)检测罗氏培养与LAMP结果不符的标本,分析LAMP与罗氏培养的检出率及两者的符合率。结果去除经鉴定为非结核分枝杆菌的10例标本,涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP的阳性检出率分为64.1%(111/173)、64.7%(112/173)、78.6%(136/173)。LAMP与抗酸染色、罗氏培养阳性检出率的差异有统计学意义(P<0.01),抗酸染色与罗氏培养比较差异无统计学意义(P>0.05)。以罗氏培养为金标准,LAMP检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.5%(108/122)、82.3%(149/181)、77.1%(108/140)、91.4%(149/163),LAMP检测与罗氏培养的符合率为84.8%(257/303)。结论结核分枝杆菌环介导等温扩增技术的灵敏度和特异度高,具有简单易行、快速准确的特点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在脊柱结核检测中的应用

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert Mycobacterium tuberculosis/Rifampin,Xpert MTB/RIF)在不同类型脊柱结核组织标本检测中的作用。方法收集127例脊柱结核患者的301份标本(脓液108份、干酪样标本94份、肉芽组织99份)进行细菌培养和Xpert MTB/RIF检测,计算阳性率。结果127例中,培养阳性60例,阳性率47.24%;301份标本中培养阳性138份,阳性率45.85%。脓液标本和干酪样标本培养阳性率均高于肉芽组织(P<0.05)。Xpert MTB/RIF检测脓液、干酪样标本和总标本阳性率高于细菌培养(P<0.05);60例细菌培养阳性的患者中,Xpert MTB/RIF法的敏感度为96.67%;利福平耐药27例,耐药率为45%,Xpert MTB/RIF检测利福平的敏感度为96.30%,特异性为94.29%;67例细菌培养阴性的患者中,36例Xpert MTB/RIF法检测阳性,敏感度为53.73%。结论Xpert MTB/RIF在脊柱结核标本检验中有较高的敏感性,收集脊柱结核患者的各种标本尤其是脓液标本,使用Xpert MTB/RIF可方便、快速、准确地诊断结核感染和耐药,值得临床推广应用。