Mdivi-1通过修复黑质网状部线粒体改善肝性脑病小鼠运动功能

目的:探讨急性肝性脑病(AHE)模型小鼠中黑质网状部(SNr)的线粒体变化,以及线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对AHE小鼠运动功能和SNr线粒体功能的影响。方法:使用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射构建小鼠的AHE模型并通过腹腔注射给予Mdivi-1处理,利用生化检测试剂盒检测小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和血氨的变化,并进行旷场实验、转棒疲劳实验以及高架十字迷宫实验观察AHE小鼠的运动功能;电镜下观察SNr的线粒体结构变化,商品化试剂盒检测SNr的线粒体膜电位(MMP)以及细胞的活性氧(ROS)和ATP水平。结果:与对照组相比,AHE小鼠血清中的AST、ALT和血氨含量均增加;小鼠在旷场中的总运动距离减少,转棒疲劳实验以及高架十字迷宫实验中的运动时间均缩短;SNr的线粒体变小变圆、线粒体分裂增加,MMP降低,细胞ROS增加,ATP产生减少。使用Mdivi-1干预后,AHE小鼠血清中的AST、ALT和血氨含量均降低;小鼠在旷场中的总运动距离增加,转棒疲劳实验以及高架十字迷宫实验的运动时间均增多,SNr的线粒体变大、圆率降低,线粒体分裂减少,MMP增加,细胞ROS降低,ATP产生增多。结论:Mdivi-1可以通过修复AHE小鼠SNr的线粒体从而改善运动功能。

靶向抑制黑质网状部GABA能神经元的DRP1改善肝性脑病小鼠运动功能

目的:探讨黑质网状部(SNr)的GABA能神经元中线粒体分裂对急性肝性脑病(AHE)小鼠运动障碍的影响。方法:利用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射制备AHE小鼠模型,通过苏木精-伊红(HE)染色观察AHE小鼠肝小叶的变化,利用生化检测试剂盒检测AHE小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和血氨的变化。接下来通过转棒疲劳实验、高架十字迷宫实验、旷场实验观察AHE小鼠运动功能。进一步利用透射电镜观察分析AHE小鼠SNr的线粒体面积、周长、圆率等形态学指标的变化,Western Blot观察AHE小鼠SNr的线粒体分裂融合相关分子的表达变化。接下来,利用重组腺相关病毒(AAV)靶向调控AHE小鼠SNr的线粒体动力相关蛋白1(DRP1)的表达,在荧光酶标仪上检测SNr的线粒体膜电位(MMP)、细胞的ATP和活性氧(ROS),并观察小鼠运动功能的变化。结果:较对照组,AHE小鼠运动功能明显降低,SNr的线粒体分裂明显增强,线粒体分裂相关蛋白表达显著升高;AHE小鼠SNr的MMP显著下降,细胞的ATP下降,ROS升高。靶向抑制AHE小鼠SNr的DRP1表达后,运动改善;进一步观察发现,AHE小鼠SNr的线粒体分裂被抑制后,MMP显著升高,细胞的ATP升高,ROS下降,证明线粒体功能明显改善。结论:靶向抑制AHE小鼠黑质网状部GABA能神经元的线粒体分裂,可以改善线粒体形态和功能,从而缓解其运动障碍。

Exendin-4对小鼠黑质网状部神经元自发放电影响

目的探究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂Exendin-4对小鼠黑质网状部神经元自发放电的影响。方法采用免疫荧光染色观察GLP-1受体(GLP-1R)在小鼠黑质网状部的表达。使用在体电生理微电极注射10μmol/L的Exendin-4到小鼠黑质网状部神经元表面,观察黑质网状部非多巴胺能(假定为γ-氨基丁酸能)神经元的自发放电变化。结果免疫荧光染色结果显示,小鼠黑质网状部有GLP-1R的高表达。在所记录到的13个黑质网状部神经元中,Exendin-4可显著降低其中9个神经元的自发放电,其放电频率由加药前(18.62±3.19)Hz降低到(14.615±3.06)Hz,差异有显著性(t=7.257,P<0.05);其放电频率平均降低(21.85±7.72)%,较生理盐水组的(1.15±9.67)%显著升高(Z=2.282,P<0.05)。在另外的4个黑质网状部神经元中,Exendin-4对放电频率无明显影响,其放电频率由(13.49±7.16)Hz变为(13.54±7.45)Hz,差异无显著性。结论Exendin-4能降低部分黑质网状部神经元的自发放电频率。

苍白球内侧部、黑质网状部与运动调控

基底神经节的主要功能是运动调控。苍白球内侧部(Internal segment of the globus pallidus,GPi)和黑质网状部(Substantia nigra pars reticulata,SNr)是基底神经节输出通路——"GPi/SNr-VL(Ventrolateral thalamus,丘脑腹外侧核)-SMA(Supplementary motor area,辅助运动区)"上的重要核团;直接通路、间接通路和超直接通路的信息最终都要经过这两个核团的整合以及丘脑的中继后,传输回皮层。目前关于GPi/SNr在运动调控方面的作用机制尚不完全清楚,就GPi/SNr在运动调控方面的研究现状予以介绍。

猫黑质外侧部和网状部至上丘的定位投射——HRP法逆行性研究

关于黑质至顶盖的传出联系,Carpenter和McMaster曾用损毁黑质的方法进行过研究,近年来又有不少资料证实黑质顶盖路径源于黑质网状部,其传出纤维主要终止于同侧上丘中间灰层或深层。这些研究对黑质网状部至上丘的定位投射虽有描叙,但其结果不尽一致,而黑质外侧部至上丘的投射则报导甚少。本实验采用HRP逆行追踪法进一步证实了黑质外侧部和网状部至上丘的投射,并观察了其定位投射关系。

丘脑底核毁损术对帕金森病大鼠脚内核和黑质网状部的影响

目的 :观察毁损丘脑底核 (STN)对帕金森病 (PD)大鼠脚内核 (EP)及黑质网状部 (SNr)γ -氨基丁酸(GABA)能系统的影响。方法 :将 6 0只Wistar大鼠随机分为 6组 ,每组 10只。对照组采用 6 -OHDA立体定向注入大鼠右侧前脑内侧束 (MFB)和中脑被盖腹侧区 (VTA) ,制成偏侧PD模型。实验组分为第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组 ,分别于 6 -OHDA注射前 7d、注射后 1h、2h、3d、7d5个不同时间点 ,局部注射海人藻酸 (KA)破坏STN。 4周后处死大鼠 ,采用免疫组化染色方法 ,定量测量各组大鼠SNr区和EP区的GABA免疫反应阳性区面积和免疫反应强度。实验数据采用方差分析和t检验统计学处理。结果 :GABA免疫组化显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ实验组的注射侧EP面积分别为正常侧的 72 9%、83 7%、79 7%、88 1%、90 1%。对照组注射侧为正常侧面积的 139 1% (P <0 0 5、0 0 1)。各实验组注射侧EP的GABA免疫反应强度 (积分光密度 )均较正常侧减少 ,对照组注射侧较正常侧积分光密度增加 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ实验组的注射侧SNr面积分别为正常侧的 90 6 %、86 9%、87 3%、80 5 %、80 4%。对照组注射侧面积为正常侧的 10 8 1% (P <0 0 5、0 0 1) ,各实验组注射侧SNr的GABA免疫反应强度均较正常侧减少 ,对照组注射?

马桑内酯致癫痫大鼠黑质网状部的形态计量研究

用光镜和电镜定量研究了马桑内酯致ＳＤ大鼠急性局灶型癫痫发作１小时后黑质网状部的结构变化．与对照组（５只）比较，在实验组（５只）脑的重量、体积及黑质横切面积均无明显改变的前提下，实验组黑质网状部单位面积内神经元数量，神经元胞体、胞核的直径以及神经元胞体、胶质胞体、血管和神经毡的面积分数均无显著性变化，表明实验组黑质网状部神经元的数目及大小没有显著性变化，实验组神经元胞体内粗面内质网、游离核糖体的面积分数以及游离核糖体的数密度显著减少，神经元胞质基质的面积分数则显著增加，线粒体、高尔基复合体和溶酶体的面积分数无显著性改变。马桑内酯所致急性局灶型癫痫发作１小时．黑质网状部神经元的粗面内质网和游离核糖体的显著减少，表明该神经元合成蛋白质的活性有所减弱。本文对该结果的意义进行了讨论。

GAD67-GFP基因敲入小鼠黑质网状部神经元GABA与氯离子转运体KCC2和NKCC1的共存

为了观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠黑质网状部(SNr)内,表达GFP的GABA能神经元与一对功能相反的Cl-共转运体(K+-Cl-cotransporter2,KCC2;Na+-K+-Cl-cotransporter1,NKCC1)的共存情况,本研究分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合以及GFP与KCC2或NKCC1免疫荧光染色相结合的双重标记方法,在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下同时进行观察。结果显示:(1)SNr内95%以上的GFP阳性神经元同时表达KCC2 mRNA,而50%表达KCC2 mRNA的阳性神经元呈GFP阳性;(2)SNr内80%以上的GFP阳性神经元同时表达NKCC1 mRNA,约35%表达NKCC1 mRNA的阳性神经元呈GFP阳性;(3)SNr内90%以上的GFP阳性神经元同时表达KCC2,双标神经元约占KCC2阳性神经元的50.5%;(4)SNr内80.5%以上的GFP阳性神经元同时表达NKCC1,双标神经元约占NKCC1阳性神经元的42.5%。以上结果表明,SNr内表达GFP的GABA能神经元大部分与KCC2和NKCC1共存,提示氯离子共转运体可能对SNr内GABA能神经元起重要的调控作用。

大鼠尾壳核对同侧黑质网状部神经元电活动的影响

研究大鼠尾壳核神经元对黑质网状部神经元电活动的影响。通过在尾壳核注射谷氨酸钠,同时利用Plexon多通道数据采集处理系统进行黑质网状部神经元放电的胞外记录,然后运用NeuroExplorer软件对所记录的电信号进行直观分析,通过SPSS 16.0对所采集信号数据进行统计分析。实验成功在6只大鼠的黑质网状部记录到11个神经元的放电情况,麻醉状态下大鼠黑质网状部神经元放电频率为12.20±6.60 Hz,当向尾壳核注射谷氨酸钠后降低至1.80±1.00 Hz,P<0.01。化学刺激尾壳核后,黑质网状部神经元放电频率显著性降低,提示尾壳核对黑质网状部神经元有明显的抑制作用。

电刺激大鼠黑质网状部对脚桥核神经元自发放电的影响

目的：观察电刺激大鼠黑质网状部（substantia nigra pars reticulata,SNr）对脚桥核（pedunculopontine nu-cleus,PPN）神经元自发放电活动的影响,进一步探讨脑内电刺激治疗帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的机制。方法：应用细胞外记录方法观察不同频率电刺激大鼠SNr对PPN神经元自发放电的影响。结果：实验记录了大鼠46个PPN神经元的自发放电,其放电频率在2.4~55.4 Hz之间,平均为（21.3±13.8）Hz;低频电刺激（5~10Hz）大鼠SNr时,PPN神经元的自发放电无明显变化（P〉0.05）,随着刺激频率（20~200 Hz）的增加,大多数PPN神经元的自发放电活动受抑制,神经元放电频率较刺激前明显降低,且在100 Hz时的抑制作用最强（P〈0.05）。结论：高频电刺激大鼠SNr对PPN神经元自发放电的影响主要为抑制,提示高频电刺激SNr可通过抑制PPN神经元活动参与PD的治疗。

未成熟脑惊厥性损伤与黑质网状部特异性神经保护的研究

目的 探讨未成熟脑对惊厥性损伤的耐受性及可能机制,推测黑质网状部（SNR）特异性屏蔽的神经保护作用. 方法 将幼年SD大鼠（21日龄）和成年SD大鼠（2月龄）腹腔注射青霉素建立惊厥模型,分别称为未成熟组和成熟组,观察大鼠惊厥过程中行为改变.建模成功72 h后断头取脑,取SNR做HE染色进行光镜观察. 结果 （1）两组发作强度比较,差异有统计学意义,未成熟组大鼠惊厥发作程度53％为Ⅲ级,成熟组大鼠惊厥发作程度47％为V级;未成熟组开始惊厥的时间、惊厥时间持续、惊厥发生后开始死亡的时间分别为（9±5）min、（39.3±15.3） min、（40±13）min;成熟组分别为（14±6） min、（16.3±8.2）min、（8±4） min,差异均有统计学意义.（2）HE染色后,未成熟脑黑质神经元细胞核嗜碱性较成熟脑组织强,黑质神经元变性、死亡及丢失,所有未成熟脑组织神经元改变,包括SNR、海马、皮层部位的神经元细胞均较成熟脑组织相应部位的神经元损伤程度轻.结论 SNR成熟度对脑惊厥性损伤具有特异性神经保护作用.

电刺激大鼠束旁核对黑质网状部神经元自发放电的影响

目的 应用不同频率电刺激大鼠束旁核 (PF) ,观察对黑质网状部 (SNR)神经元自发放电频率的影响 ,探讨PF对SNR神经元活动的调节作用。方法 采用单管玻璃微电极细胞外记录方法 ,观察SNR神经元自发放电频率在不同频率 (强度 0 4mA ,波宽 0 1ms,时程 5s ,频率 1Hz、 10Hz、 2 0Hz、 5 0Hz、 80Hz、 10 0Hz、 130Hz、 15 0Hz、 180Hz、 2 0 0Hz、 2 5 0Hz、 30 0Hz和 5 0 0Hz)电刺激PF时的变化。结果 高频电刺激抑制93 6 7%SNR神经元的自发放电频率 ,抑制时程具有频率依赖性 ,有效电刺激频率需大于 5 0Hz,且随外加刺激频率增加 ,抑制时程延长 ,二者呈正相关。刺激频率超过 2 0 0Hz后 ,抑制时程保持恒定 ,不再随外加刺激频率而发生显著变化。结论 高频刺激PF ,可以降低基底节输出核团SNR的神经元活动 ,本研究提示高频刺激PF对帕金森氏病的运动症状有治疗作用。

丘脑底核电刺激对大鼠黑质网状部及苍白球细胞外神经递质的影响

目的通过电刺激正常及癫痫大鼠丘脑底核（STN），研究黑质网状部（SNr）及苍白球（GP）细胞外液中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）的变化，探讨电刺激治疗癫痫的机制。方法正常大鼠和癫痫大鼠各20只，将刺激电极植入一侧STN，分别用130Hz和260Hz进行刺激，同时在同侧的SNr和GP收集细胞外液，用高压液相色谱法检测其Glu和GABA的含量。结果癫痫大鼠SNr的GABA基础值明显高于正常大鼠。电刺激使两组SNr的GABA明显升高。130Hz和260Hz刺激明显增高两组GP和SNr的Glu含量，但130Hz的更显著。结论SNr细胞外GABA升高在STN电刺激治疗中起重要作用。电刺激增加了GP细胞的活动，STN电刺激治疗癫痫机制不能单纯解释为“功能的毁损”。

皱褶部网状色素异常1例

临床资料 患者男，20岁，学生。因全身皮疹17年，于2007年7月来我院就诊。患者自3岁开始，无明显诱因面部、躯干、四肢等出现点状色素沉着斑。皮疹逐渐增加，颜色加深，并融合成网状、片状，波及全身其余部位。一直无明显自觉症状，亦无季节性变化。曾在外院就诊（诊疗不详），皮疹无明显改善。患者平素体健，否认长期服药史及内科疾病史，亦否认家族病史。

皱折部网状色素异常伴外阴皮赘

1 病例报告 患者，女，45岁。以口周、颈部、腋下及乳房下起褐色斑点1年余。2004年9月17日就诊。1年前无明显诱因两手背、前臂起棕褐色平滑斑点，继后逐渐泛发于面部、腋下、乳房下、腰、腹、股内侧及外阴等皱折部位，图1：呈网状分布，无自觉症状。颈部伴有散在褐色米粒大丘疹，口周出现小凹陷及色素沉着；图2：同时外阴部起密集如绿豆大丘疹，触之软；图3：3年前不明原因双手指疼痛、肿胀、渐不能伸直。

家族性良性慢性天疱疮误诊为皱褶部网状色素异常一例

临床资料 患者,女,47岁。主因反复发作的双侧腋下及腹部皮损伴瘙痒10年,于2013年6月22日就诊。10年前因辛辣饮食后,患者左腋下出现散在红色小丘疹及小水疱,自觉瘙痒,曾于外院按＂皱褶部网状色素异常＂给予氧化锌软膏、复方醋酸地塞米松乳膏和莫匹罗星软膏治疗,一周后症状缓解。

皱褶部网状色素异常1例报告

患者女，49岁，因“颈部、腋下、腹股沟、腘窝、肘窝处出现色素沉着斑8年”，于2011年7月4日来我院就诊。8年前无明显诱因患者双侧腹股沟处出现大小不等黄褐色斑、斑丘疹，皮疹无明显痒痛不适，后颈部、双腋下、双肘窝、腘窝等处也渐出现类似皮疹，一直未正规就医。患者既往有高血压病史半年，口服尼莫地平控制良好。有子宫肌瘤病史10余年，平素月经量大，经期不规律，未行特殊治疗。否认其他内科疾病病史、长期服药史，无类似皮肤疾病家族史。育有一女，无类似病史。体格检查：一般情况良好，系统检查未见异常，浅表淋巴结未见肿大。皮肤科专科检查：右侧腹股沟见1．5 cm x1 cm黄褐色斑块，表面粗糙，呈疣状突起，无糜烂、渗液；颈部、双腋下、腘窝、肘窝多发大小不等黄褐色斑、斑丘疹，躯干部散在类似皮疹，颈部可见少许黑头粉刺样皮损；外阴部毛发稀疏，掌跖和指、趾甲无异常。辅助检查：血常规、凝血功能检查基本正常；心电图示窦性心律，ST段改变；胸部X线片、尿常规、性激素（血清促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、泌乳素、促卵泡刺激素、皮质醇、促黄体生成素、睾酮、雌二醇等）检测、肿瘤标志物检查无异常，甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）阴性；腹部、盆腔B超检查示轻中度脂肪肝、胆囊结石、脾稍大、双肾小结石、腹膜后未见明显肿块，子宫肌层多发实性肿块（考虑子宫肌瘤）。皮损病理组织检查示右侧腹股沟斑块性皮损，符合脂溢性角化病；右大腿内侧黄褐色斑，病变符合皱褶部网状色素异常。患者确诊后自行放弃治疗。

大白鼠黑质-纹状体的局部定位投射 荧光组织化学和辣根过氧化物酶法联合应用的研究

关于黑质有纤维投射到纹状体的问题,很早以前就有人因损毁纹状体后在黑质观察到有退行性细胞溃变而提出过[1]。但破坏黑质后用Nauta银染法常不能在纹状体内追踪到终末前变性[2-4]。而用改良的Fink-Heimer法在大白鼠[5]及猫[6]的纹状体中则可见到大量的终末前变性。