胃癌细胞促进网膜脂肪干细胞分化的机制研究

目的:本实验主要研究在胃癌条件培养基(conditioned medium,CM)诱导下网膜脂肪干细胞(omental-adipose stromal cells,O-ASCs)是否能分化为癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs),及ERK信号通路在其中的作用。方法:通过诱导分化成骨、成脂及流式细胞鉴定O-ASCs,将O-ASCs与MGC803和SGC7901 CM共培养,通过RT-PCR和Western-blot检测O-ASCs细胞CAFs标志物α-SMA、FSP-1、vimentin,旁分泌因子VEGFA、TGFβ-1、FAP、SDF-1的表达水平。将O-ASCs分为对照组,SGC7901-CM实验组,SGC7901-CM+U0126处理组,12 h后收集细胞。Western blot检测O-ASCs细胞CAFs标志物α-SMA、FSP-1及ERK1/2、p-ERK1/2的表达水平。结果:经鉴定原代培养出的细胞为O-ASCs,在SGC7901 CM和MGC803 CM作用下,CAFs标志物α-SMA、FSP-1、vimentin及旁分泌因子SDF-1、VEGFA、TGFβ-1、FAP表达均有明显增加(P<0.05)。与对照组比较SGC7901-CM组α-SMA、FSP-1、p-ERK1/2表达明显增加(P<0.05),ERK表达未见明显变化(P>0.05)。SGC7901-CM+U0126组与SGC7901-CM组比较,α-SMA、FSP-1及p-ERK1/2的蛋白表达水平明显降低(P<0.05),ERK表达变化无统计学意义(P>0.05)。结论:O-ASCs通过分化为CAFs及旁分泌作用参与胃癌腹膜转移,ERK信号通路在该过程中发挥了重要作用。

人网膜脂肪干细胞与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1体外增殖分化对比观察

目的比较人网膜脂肪干细胞与小鼠胚胎成纤维细胞(3T3-L1)体外增殖分化情况。方法使用胶原酶消化法提取人网膜脂肪干细胞,复苏冻存的3T3-L1,进行培养,显微镜观察细胞在培养瓶中的生长过程,拍照记录细胞密度、形态;将两种细胞接种入96孔板,定时加入CCK-8试剂,测定吸光值,绘制生长曲线;将两种细胞诱导为成熟脂肪细胞,油红O染色后,观察脂滴分布。结果人网膜脂肪干细胞1~3代细胞倍增时间6 d,随着传代次数增多,细胞贴壁后停止增殖,第4天出现老化凋亡;复苏后3T3-L1倍增时间48 h,每72 h传代1次。根据人网膜脂肪干细胞和3T3-L1的吸光值,二者的指数增长期分别为第2~5天、第2天,平台期分别为第6~8天、第3~10天,人网膜脂肪干细胞第9天进入衰亡期。人网膜脂肪干细胞和3T3-L1经过10天成脂诱导分化,油红染色后均可见红染的脂滴,两种细胞均可分化为成熟脂肪细胞,并且在诱导过程中出现漂浮裂解,贴壁细胞减少。结论与3T3-L1相比,人网膜脂肪干细胞也具有成脂分化的能力,但增殖能力有限。

TGFβ1-Smad3信号通路参与胃癌条件培养基诱导的网膜脂肪干细胞向癌相关成纤维细胞分化

目的研究TGFN—Smad3信号通路在胃癌条件培养基（CM）诱导网膜脂肪干细胞（O—ASCs）分化为癌相关成纤维细胞（CAFs）中的作用。方法通过诱导分化成骨、成脂及流式细胞鉴定O—ASCs，将O—ASCs分为对照组、SGC7901-CM试验组、SGC7901-CM＋SB431542处理组，12h后收集细胞。通过RT—PCR和Western—blot检测各组细胞CAFs标志物α—SMA、FSP-1的表达水平。通过Western—blot检测Smad信号通路Smad3、P—Smad3的表达水平。结果鉴定原代培养细胞为O—ASCs。与对照组相比，SGC7901-CM组CAFs特异性标志物仪-SMA、FSP-1及Smad信号通路蛋白P—Smad3均增加明显（P〈0．05），Smad3表达未见明显变化（P〉0．05）。与SGC7901-CM组相比，SGC7901-CM＋SB431542组仪-SMA，FSP-1及P—Smad3蛋白表达均受到明显抑制（P〈0．05），Smad3表达未见明显变化（P〉0．05）。结论胃癌条件培养基具有诱导O—ASCs向CAFs分化的作用，TGFβ1-Smad3信号通路在该过程中发挥了重要作用。